腹膜解剖及生理功能论文

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1、范文最新推荐腹膜解剖及生理功能论文树突状细胞(DendriticCells, DC)是目前体内功能最强的专职抗原 呈递细胞，具有启动T细胞介导的免疫反应的功能。本文介绍DC在 血液肿瘤中诱导的自身肿瘤杀伤活性、移植免疫、治疗及预后等方面 的研究。树突状细胞(DendriticCells,DC)是近年来倍受人们关注 的专职抗原呈递细胞(AntigenpresentingCells,APC),能摄取、加 工及呈递抗原，启动T细胞介导的免疫反应。DC于1973年首次由 St einman和Cohn发现。近年来关于DC分化、发育及抗肿瘤应用尤 其受到人们的关注。本文对血液肿瘤DC的研究作一综述。1DC

2、诱导 的自身肿瘤杀伤活性Choudhury等1报道，慢性髓系白血病(CML) 慢性期患者外周血单个核细胞与细胞因子-粒单核细胞集落刺激因子(CM-CSF)、白介素4 (IL-4)、肿瘤坏死因子a (TNF- a )在体外共 同孵育后，产生了形态学、免疫表型具有DC特征的细胞，荧光原位 杂交(FISH)表明这些细胞中t(9; 22)的存在，说明它们来自白 血病细胞。特异的体外测定DC的功能证实这些细胞具有潜在刺激淋 巴细胞增殖的作用。体外产生的白血病DC刺激自体T细胞产生了强 烈的抗白血病细胞的细胞毒活性，但对主要组织相容性复合物(MajorhistocompatibilityComplex,M

3、HC)匹配的正常异体骨髓细胞 表现为低反应。用DC刺激的自体T细胞抗CML靶细胞的细胞毒活性， 是体外单用IL-2培养扩增的自体T细胞作用的4一6倍。DC刺激的T 细胞也抑制CML克隆前体的生长。这些结果表明，体外细胞因子诱导CML细胞向DC分化，这些DC具有明显的T细胞刺激功能。体外产生 的DC通过对白血病特异性抗原的有效传递产生抗白血病作用。Robinson等2报道，急性白血病(AL)细胞在上述细胞因子的作用 下亦能向DC分化。作者用21例AL患者的外周血单个核细胞与 GM-CSF、TNF-a共同孵育，15例细胞成活，其中12例可观察到符合 DC典型的形态学特征。流式细胞分析显示，这些细胞

4、有DC特异性抗 原 CD1a、CD83 的表达，成熟 DC 还有 HLA-DR、CD40、CD80、CD86 的 表达。9/12例中混合淋巴细胞反应(MLR)测定，这些培养的细胞具 有很强的抗原呈递功能，经FISH分析证实，一些AML的DC起源于 5q-及ph+白血病细胞，另外2例髓系和淋巴系双表型白血病CD19持 续异常表达。AML恶性转变发生在多能干细胞水平，但是体内随后白 血病细胞的分化被局限于某一细胞系、然而体外白血病克隆50%可自 然向单核细胞、粒细胞成熟，另外在细胞因子的作用下可进一步终末 细胞分化。该研究证实了 AL原始细胞衍生的DC是恶性起源的，表明 种恶性细胞向具有潜在抗原呈

5、递能力的细胞转变，这类细胞具有很 强的呈递肿瘤相关抗原的能力，因此可以用于诱导抗白血病免疫反 应。需指出的是，DC的白血病起源由以下证据支持：在培养的外 周血单个核细胞中白血病原始细胞占90%一98%，细胞数量在整个培 养阶段维持稳定且具有恒定的高存活力；在GM-CSF、TNF-a中培 养后观察到的DC占73%一92%,比在相同条件下正常祖细胞衍生的DC 比例高；AL单个核细胞生成的DC与正常DC前体行为不一致。体 外来自12/15例AL所产生的潜在抗原呈递DC,这一发现提出的两大 重要问题有待于进一步研究：一种早期干细胞表型是这种现象的先 决条件吗？ AL与其它白血病的进一步研究，需要确定是

6、否如此，以 及该现象的真正频率和生物学重要性；这种体外成熟能允许假定的 白血病相关抗原更有效地呈递到有适当受体的细胞毒 T细胞吗？ Choudhury等3报道，AML包括一组血及骨髓中原始髓细胞克隆积累 的疾病，恶性细胞表现为髓细胞分化的变异程度及与许多特征性的细 胞遗传异常和基因重排有关，特殊的细胞遗传变化通常与特殊疾病表 型和临床后果有关。正常多能造血干细胞与白血病克隆共存于骨髓。 成功的抗白血病治疗后，骨髓正常造血干细胞的造血功能得以恢复， 但大多数病例，缓解仅为暂时的。因此，对于大多数AML病人的治疗 上的挑战就在于防止复发，以期达到长期缓解。为此，Choudhury等 3开展了体外诱

7、导AML细胞分化成DC的工作，并以此来刺激自体的 抗白血病的T细胞反应。他们在体外用GM-CSF+IL-4联合TNF- a或 CD40配体(CD40L)产生DC,对象19例不同染色体异常的AML病人, 除1例外均产生了 DC的形态学表型特征及T细胞刺激特性，这些细 胞高表达MHC- I类、II类抗原及共刺激分子CD86和ICAM-1。有3例 通过FISH分析染色体异常。自体淋巴细胞与AML衍生的DC共同培养 能溶解自体白血病细胞，并注意到少许抗自体的正常细胞的细胞毒活 性，这些正常细胞来自于病人缓解期。结果显示有DC表型、功能的 细胞能从多数人AML标本中获得。如果已知AML的生物学异质性，就

8、 不会奇怪实验结果的变异及偶尔有AML细胞标本未显示有向DC分化。 进一步研究这些细胞确保可决定靶抗原而进行被观察到的免疫活性。 这些工作潜在治疗上的应用是重要的，白血病DC可潜在地被用作体 内细胞的白血病疫苗或体外产生抗白血病的T细胞而用于免疫治疗。 它们在免疫治疗上的应用于这种通常致死性疾病可消除微小残余疾 病及将暂时的反应转变成持久缓解。据Cao等4报道，GM-CSF可诱 导鼠红白血病细胞(FBL-3)分化成类单核细胞的细胞来刺激宿主对 白血病的免疫反应，即经GM-CSF处理后的FBL-3细胞，DC的特异性 标志33D1及NLDC-145的表达阳性率显著升高，同时MHC-II类分子, C

9、D80、CD86的表达及血管细胞粘附分子1 (VCAM-1 )表达显著上调， 通过电镜观察到DC典型的形态学。功能上，GM-CSF诱导的FBL-3细 胞可明显刺激初始异基因的和自体的T细胞的增殖，并诱导特异的细 胞毒T细胞的产生。总之，这些结果对白血病的免疫治疗有重要启示。 2DC在移植免疫中的作用Fujii等5提出，CD34+脐血细胞衍生的DC 是可诱导抗肿瘤的细胞毒细胞，如细胞毒T细胞、NK细胞和单核细 胞。用射线照射的MHC- I类抗原阳性的K562细胞脉冲刺激的DC刺 激脐血T细胞能选择诱发清除K562mHC- I类抗原，CD8+或MHC- I抗 原T细胞的这种杀伤活性几乎完全被抗体消

10、除，而CD4+T细胞则不同。 这表明CD34+脐血细胞衍生的肿瘤细胞脉冲的DC能诱导抗相应的肿 瘤细胞的肿瘤特异性细胞毒T细胞，这些细胞毒T细胞是经MHC- I 类分子识别肿瘤细胞的CD8+T细胞。这个发现具有潜在的重要性，提 示DC在脐血移植中及在临床免疫治疗的应用。近来，脐血干细胞移 植已被用于治疗致死的先天性或恶性疾病，且取得显著成功6, 7。 积累的实验及临床依据业已证明该临床措施的有效性。脐血移植无需 严格的HLA相合，GVHD发生机会少，这可能归因于新生免疫系统的 独特性，更能耐受异已抗原。许多研究提示体外各种不同的功能测定 中脐血与成人血比较而言缺乏T淋巴细胞、B淋巴细胞、单核细

11、胞及 DC。Harris等8, 9与其他学者10,11报道脐血T淋巴细胞表型 及功能如此不成熟以至于异基因刺激后很少产生细胞毒T细胞活性。 大量证据表明：造血干、祖细胞起源的DC可专门呈递抗原到初始T 细胞，因此很有可能DC呈递抗原是脐血初始T细胞激活所必需。对 于肿瘤治疗，研究者致力于将肿瘤抗原脉冲的DC用作治疗性的疫苗, 同时也用于体外采用T细胞治疗中启动肿瘤抗原特异的T细胞12, 13。据近来报道，肿瘤抗原负载的DC的免疫作用代表了诱导抗肿瘤 免疫的有力措施14, 15。本研究中，试图用CD34+脐血细胞衍生的 DC,诱导抗肿瘤细胞毒性活性作为脐血移植后GVL效应的体外模型。在不久的将来

12、，脐血移植可能成为各种不同的致死性恶性肿瘤尤其血 液肿瘤的标准治疗手段，因为它优于其它干细胞来源的移植。但在脐 血移植中，GVL效应减少将成为一个问题。移植免疫治疗的一个目标 是创造一种方法，即可避免GVHD、根除残余肿瘤免疫的策略，也可 激活脐血单个核细胞抗未知抗原承载的肿瘤细胞。总之，在造血干细 胞移植中，正确使用DC可能有益于更特异和更有效的免疫治疗。外 周血干细胞移植时，移植物DC可以直接激活宿主残存的T细胞，导 致移植物排斥和移植失败。因此，去除移植细胞中DC,保留干细胞(CD34+HLA-DR-)的重建活性，将会提高移植的成功率16。同种异 基因骨髓移植供者来源DC间接呈递受者次要

13、组织抗原，是GVHD发生 的主要途径17。此外，动物实验表明，骨髓去除性治疗只是去除了 大部分，而不是全部的受者DC。临床移植中控制DC策略18:DC是 刺激T细胞免疫反应的专职APC，调控DC或干扰DC致敏途径，有可 能延长移植存活并促进耐受。控制DC的可能策略包括：去除DC即 移植前预处理移植物达到减少或消除移植物内DC的目的，避免直接 致敏从而延长移植物存活；抑制DC移行或成熟，通过进一步研究 DC移行机制，选择调节DC移行和成熟的某种因子，有可能阻断致敏 途径；阻断DC与T淋巴细胞共刺激信号，如用CTLA-4-Ig阻断 B7/BB1和CD28间作用有可能诱导耐受；DC耐受作用，耐受与嵌

14、合 现象的发现，使人们重新认识DC在移植中作用，随着对DC研究的深 入，人们有希望筛选出某一类型DC，用于诱导移植嵌合体形成。3DC 治疗肿瘤DC的研究近年来已成为肿瘤治疗研究的热点，其分化发育 及抗肿瘤应用尤其受到人们关注。动物实验表明应用多种形式的肿瘤 抗原体外冲击致敏DC，少量回输即可诱导机体产生极强的抗肿瘤免 疫19。DC的临床试用亦有报道，DC回输疗法已试用于非霍奇金B 细胞淋巴瘤、黑色素瘤、前列腺癌、多发性骨髓瘤MM)晚期患者的 治疗。对于非霍奇金B细胞淋巴瘤的治疗，是应用抗独特型抗体体外 致敏的自体DC，目前已取得良好的临床疗效15。德国学者20应 用独特型蛋白多肽体外致敏的自体

15、DC回输治疗了 7例MM患者。其作 法是从MM患者血清中分离出独特型蛋白，酶消化降解后用HPLC纯化 出多肽，然后用此多肽体外致敏CD34+细胞来源的自体DC,将此类 DC给MM患者皮下注射，并随后每隔2周皮下注射一次独特型蛋白多 肽，连续3次，结果发现在受检查的4例MM患者中，有2例血中抗 独特型IgM和IgG抗体的水平分别升高约8倍和12倍，而且还观察 到独特型蛋白的特异性T细胞免疫反应，表明该疗法的有效性和临床 应用前景。近来有关DC用于白血病治疗研究的报道较多，鉴于未成 熟DC具有一定的吞噬能力，Fujii等21报道，为了用DC在体外诱 导出自体细胞毒T细胞然后用于白血病的免疫治疗，将

16、G-CSF动员的 外周血CD34+细胞用GM-CSF和TNF- a体外培养出DC,这种DC混合 群体(包括典型的成熟DC及未成熟DC)能摄取外源性蛋白抗原一一 钥孔戚血蓝素(KeyholdlimpetHemocyanin,KLH)并将之提呈给CD4+ 和CD8+T细胞，诱导出KLH特异性细胞毒T细胞。并且他们选择3例 AML患者，将放射性灭活的白血病细胞与DC、T细胞共同孵育后，结 果其中2例诱导出能杀伤白血病细胞的自体细胞毒T细胞，从而为细 胞毒T细胞过继免疫治疗奠定基础。4DC判断预后有关这方面的研究 报道较少。Baur等22报道了滤泡型树突状细胞(FDC)在结节硬化 型霍奇金病(NSHD

17、)中的预后价值。霍奇金病Rye分类中已建立的形 态学表型、组织学显示一个宽阔的范围，然而这种组织学不同并未被 考虑作为预后因素。NSHD病理组织学分级中两个亚型NSI (恶性) 及NSII(高度恶性)的预后相关性仍然存在着争议，FDC的分析可提 供新的预后参数。对59例NSHD进行研究，平均随访时间8年，按分 类41例为NSI, 18例为NSII。用耐石蜡的单克隆抗体CD21和CNA42 免疫染色FDC,在肿瘤组织中区分出三种形式：FDC1，存在着广义的 滤泡样结构(n=20); FDC2,存在大量被破坏的FDC网状结构(n=25); FDC3，无或少许孤立的FDC (n=14)。这3组根据复

18、发频率及生存明 显不同，发现生存最长的是FDC1组，最短在FDC3组，FDC2组居中 (P=0.0025)。FDC状态是一个区别针对所有病人包括不同年龄和分 期的预后因素。结合FDC状态和NSI-NSII分级将最佳生存组定义为 FDC1-NSI，对于NSHD的传统病理组织学检查，FDC的分析是一种新 的预后判断方法。结果表明FDC状态的评估更加准确，其真正的预后 价值有待于进一步的随机临床试验应用中加以评估。对于DC的研究 正受到人们的青睐。仍有许多问题尚未解决，如：如何调控DC的功 能，使其选择性发挥作用。DC用于肿瘤免疫治疗大多仍处于实验研 究阶段，但随着研究的深入，人们对DC分化调控及D

19、C活化机制的掌 握，DC在肿瘤免疫治疗中将会成为一种很有效的手段，具有广阔的 前景而得到广泛的临床应用。5参考文献 1ChoudhuryA,GajewskiJL,LiangJC,e tal.Blood,1997,89:11332Robi nsonSP,EnglishN,JajuR,e tal.BrJHema tol ,1998,103:7633Choudhur yA,LiangJC,ThomasEK,e tal.Blood,1999,93:7804CaoX,ZhaoY,YuY,e tal.Immunology,1998,95:1415FujiiS,FujimotoK,OsatoM,etal.

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