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1、货号：QS3403-25规格：25管/24样腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP-glucose pyrophosphorylase, AGP) 活性测定试剂盒说明书紫外分光光度法 正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定测定意义：AGP (EC2.7.7.21)主要存在于植物中，催化葡萄糖-1-磷酸与ATP反应生成淀粉合成的直 接前体ADPG，是植物淀粉生物合成的主要限速步骤。测定原理：AGP催化的逆向反应生成G1P,在反应体系中添加的磷酸己糖变位酶和6-磷酸葡萄糖脱氢 酶依次催化生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH, 340nm下测定NADPH增加速率，即可计算AGP活性。 自备实验用
2、品及仪器：紫外分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL 石英比色皿、研钵、冰和 蒸馏水试剂的组成和配制：提取液：液体30mLx1瓶，4C保存；试剂一：液体10mLx1瓶，4保存； 试剂二：粉剂X1支，4保存；临用前加入250“L蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂 分装后-20保存，禁止反复冻融；试剂三：粉剂X1瓶，4保存；临用前加入2mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分 装后-20保存，禁止反复冻融；试剂四：粉剂X1瓶，4保存；临用前加入3mL蒸馏水充分溶解备用；用不完的试剂分 装后-20保存，禁止反复冻融；试剂五：粉剂X1瓶，-20保存；临用前加入3mL蒸馏水充分溶解备用；用不
3、完的试剂 分装后-20保存，禁止反复冻融；试剂六：粉剂X1支，-20保存；临用前加入250ML蒸馏水充分溶解备用；用不完的试 剂分装后-20保存，禁止反复冻融；试剂七：粉剂X1支，-20保存；临用前加入250ML蒸馏水充分溶解备用；用不完的试 剂分装后-20保存，禁止反复冻融；粗酶液制备：按照组织质量(g)：提取液体积(mL)为1: 510的比例(建议称取约0.1g组织，加入1mL 提取液)，进行冰浴匀浆 10000g 4离心10min,取上清，置冰上待测。测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至340nm,蒸馏水调零。2、试剂一置30保温10min以上。2、在EP管中按顺序加入
4、下列试剂(如果一次性测定样本较多，可以将试剂一、二、三和四按 比例配成混合液1，将试剂一、五、六和七按比例配成混合液2)试剂名称（ML）测定管试齐H100试剂二10试剂三50试剂四100样本20混匀，30C保温15 min，置沸水浴中1 min （盖紧，防止水分散失），冰浴迅速冷却试齐H300试剂五100试剂六10试剂七10混匀后立即在340 nm波长下记录初始吸光度A1和2min后的吸光度A2，计算AA=A2-A1。AGP活性计算：1、按样本蛋白蛋白浓度计算单位的定义：每mg组织蛋白每分钟催化产生lnmol NADPH定义为一个酶活性单位。AGP （nmol/min/mg prot） =AA
5、x V 反总 *（sxd）x109*（V 样xCpr） +T=2813 xAA + Cpr此法需要自行测定样本蛋白质浓度。2、按照样本鲜重计算单位的定义：每g组织每分钟催化产生1 nmol NADPH定义为一个酶活力单位。AGP （nmol/min/g 鲜重）=AAx V 反总子（8 xd）x109（Wx V 样+ V 样总）+T =2813x AA-WV反总：反应体系总体积，7x10-4 L; : NADPH摩尔消光系数，6.22 x 103mol/L/cm; d:比色 皿光径，1cm; V样：加入样本体积，0.02 mL; V样总：加入提取液体积，1 mL; T:反应时间, 2 min; Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL; W：样本质量。
腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(ADP
