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1、线粒体的超活染色一）实验目的：1. 观察动、植物活细胞内线粒体、液泡系的形态、数量与分布。2. 学习一些细胞器的超活染色技术。二）实验原理：活体染色是指对生活有机体的细胞或组织能着色但又无毒害的一种染色方法。它的目 的是显示生活细胞内的某些结构，而不影响细胞的生命活动和产生任何物理、化学变化以致 引起细胞的死亡。活染技术可用来研究生活状态下的细胞形态结构和生理、病理状态。 根据所用染色剂的性质和染色方法的不同，通常把活体染色分为体内活染与体外活染两类， 体内活染是以胶体状的染料溶液注入动、植物体内，染料的胶粒固定、堆积在细胞内某些特 殊结构里，达到易于识别的目的。体外活染又称超活染色，它是由活
2、的动、植物分离出部分 细胞或组织小块，以染料溶液浸染，染料被选择固定在活细胞的某种结构上而显色。活体染料之所以能固定、堆积在细胞内某些特殊的部分，主要是染料的“电化学“特 性起重要作用。碱性染料的胶粒表面带阳离子，酸性染料的胶粒表面带有阴离子，而被染的 部分本身也是具有阴离子或阳离子，这样，它们彼此之间就发生了吸引作用。但不是任何染 料皆可以作为活体染色剂之用，应选择那些对细胞无毒性或毒性极小的染料，而且总是要配 成稀淡的溶液来使用；一般是以碱性染料最为适用，可能因为它具有溶解在类脂质（如卵磷 脂、胆固醇等）的特性，易于被细胞吸收。詹纳斯绿B（Ja nus green B）和中性红（n eut
3、ral red） 两种碱性染料是活体染色剂中最重要的染料，对于线粒体和液泡系的染色各有专一性。三）实验用品：一、器材显微镜、恒温水浴锅、解剖盘、剪刀、镊子、双面刀片、载玻片、凹面载玻片、盖玻片、 表面皿，吸管、牙签、吸水纸。二、试剂1、Rin ger 溶液2、1%、1 / 5 000詹纳斯绿B溶液四）实验步骤：1、用脊椎脱臼法处死小白鼠，置于解剖盘中，剪开腹腔，取小白鼠肝边缘较薄的肝组织 一小块，放入表面皿内。用吸管吸取Ringer液，反复浸泡冲洗肝脏，洗去血液。2、在干净的凹面载玻片的凹穴中，滴加1 /5 000詹纳斯绿B溶液，再将肝组织块移入染 液，注意不可将组织块完全淹没，要使组织块上面
4、部分半露在染液外，这样细胞内的线粒体 酶系可充分得到氧化，易被染色。当组织块边缘被染成蓝绿色即成（一般需染2030mi n）。3、吸去染液，滴加Rin ger溶液，用眼科剪将组织块着色部分剪碎，使细胞或细胞群散出。然后用吸管吸取分离出的细胞悬液，滴一滴于载玻片上，盖上盖玻片进行观察。4、在低倍镜下选择不重叠的肝细胞，在高倍镜或油镜下观察，可见具有I 一2个核的肝 细胞质中，有许多被染成蓝绿色的线粒体，注意其形态和分布状况。五）实验结果与分析:细胞肝细胞观察结果最后在10X40显微镜下观察到肝细胞内含有一些被染成浅蓝色的小点， 分布呈圆形，靠近细胞膜分析肝细胞内线粒体被詹纳斯绿试剂染成蓝色，因染色时间不足的原因，染 色不够明显，线粒体呈现浅蓝色。图:六）注意事项:
线粒体的超活染色
