《血清CK及其同工酶测定检验系生化ppt课件》由会员分享，可在线阅读，更多相关《血清CK及其同工酶测定检验系生化ppt课件（18页珍藏版）》请在装配图网上搜索。
1、血清血清CKCK及其同工酶测定及其同工酶测定检验系生化检验系生化一、概述n肌酸激酶Creatine kinase，CK，EC2.7.3.2全称腺苷三磷酸：肌酸N-磷酸转移酶，催化肌酸Cr和ATP或磷酸肌酸CrP和ADP之间磷酸转移的可逆反响。n肌酸+ATP 磷酸肌酸+ADP+H+CKn偏碱pH有利于顺向反响进展，中性pH倾向逆向反响，普通逆向反响较顺向反响快26倍；nMg2+是CK 的必需激活剂，但过量反而抑制；n样品宜用血清或肝素化血浆；n标本应防止严重溶血；n血清中CK较不稳定，室温4h或412h可使酶失活。二、CK测定方法n比色法n紫外分光光度法n荧光法比色法n利用顺向反响n1、测磷法
2、CrP在酸液中易水解成Cr及无机磷酸。ATP与ADP在酸性条件下较稳定2、酶偶联-丙酮酸测定法 肌酸+ATP 磷酸肌酸+ADP ADP+磷酸烯醇式丙酮酸 丙酮酸+ATP 丙酮酸+2，4-二硝基苯肼 丙酮酸-2，4-二硝 基苯腙CK丙酮酸激酶顺向反响测定CK的底物较廉价；测磷法的试剂较易得而稳定；丙酮酸激酶价钱较贵，不易获得；顺向反响速度较慢，灵敏度较低。n利用逆向反响nCrP+ADP Cr+ATPnCr+双乙酰+-萘酚 红色化合物nMg2+作激活剂；n半胱氨酸供应巯基；n氢氧化钡和硫酸锌沉淀蛋白并终止反响。CKn逆向反响的速度较快，敏感性较高，成为目前国内引荐的主要方法。n必需用中性或偏碱的蛋
3、白沉淀剂以防止底物CrP在酸性蛋白沉淀剂中非酶性水解成Cr。紫外分光光度法n多利用逆向反响，是国际最常用方法nCrP+ADP Cr+ATPnATP+Glu ADP+6-P-Glun6-P-Glu+NADP+6-P-GA+NADPH+H+CK己糖激酶G-6-PDn全部反响最适pH为6.86.9；n主要干扰要素n谷光甘肽复原酶n腺苷酸激酶荧光法n利用逆向反响生成的Cr在强碱性溶液中与茚三酮反响产生荧光复合物，测其荧光强度，经与同样处置的Cr规范管比较，可计算CK活力。n优点：快速、敏感，巯基化合物不产生干n 扰，试剂易得，操作条件易于掌握。n缺陷：需精细荧光分光光度计，不适宜基n 层单位运用。酶偶联酶偶联-丙酮酸测定法步骤顺向反响丙酮酸测定法步骤顺向反响空白标准测定H2O0.1血清0.1标准0.1酶试剂0.50.50.537，10minDNP0.50.50.537，15min0.4N NaOH444室温5min，440nm比色n计算：Au/As200U/L三、血清三、血清CKCK同工酶测定同工酶测定n方法：琼脂糖凝胶电泳法。
血清CK及其同工酶测定检验系生化ppt课件
