方法选择与检测系统性能评价

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1、教材第29页 方法学评价方法学评价 是通过实验途径来测定分析方法的性能指标，并评价其是否可接受。方法学评价的目的方法学评价的目的在于评估该分析方法在稳定状态下具有的误差，并对这些误差做出判断，来决定该分析方法是否可以用于常规测定。方法学评价内容方法学评价内容，通常应包括：精密度、准确度、检测限、生物参考区间和可报告范围等。举例 参考物，也称标准品或标准物质，是一类具有一种或多种成分、含量均匀确定的物质。参考物用以校准仪器设备、评价测量方法或给其它物质赋值。参考物的结果含量一般表示为：标准值总不确定度举例 用于常规质量控制，用来控制患者标本的测定误差。质控物不能用于仪器的校准。决定性方法决定性方

2、法用途：评价参考方法及一级参考物一级参考物一级参考物发展及评价参考方法，校准决定性方法及参考方法，为二级标准品定值参考方法参考方法为二级标准品及质控品定值，评价常规方法二级参考物、校准品二级参考物、校准品常规方法的标准品，为质控品定值常规方法常规方法临床实验室的常规定量分析 质控品质控品质量保证评价校准校准评价定值评价校准定值各级分析方法与参考物的互相关系各级分析方法与参考物的互相关系测定结果测定控制测定五.定量测定的方法学比对 ISO15189规定：当同样的检验应用于不同的程序或设备，或在不同地点进行，应有确切机制以验证在整个临床适用的区域内检验结果的可比性。（简单地说：一个检验项目在不同仪

3、器、方法、地点检测，应该得到相同的结果。）比对方案：CLSI EP9-A2文件“用患者标本进行方法学比较和偏倚评估批准指南”（CLSI 美国临床和实验室标准研究院）进行EP9-A2的准备和步骤：1.熟悉检测系统，熟悉评价方案。2.对整个过程进行质量控制。3.至少应有40份患者新鲜标本，这些标本应涵盖线性范围，不要收集对实验有干扰的标本。4.按标本号1、2、3、4、5、6、7、8测定一次，然后8、7、6、5、4、3、2、1测定一次，不同检测系统同时进行。5.剔除离群值，绘制散点图，建立线性回归方程。6.判断是否可接受。六.定性试验的方法学评价（一）评价准备 熟悉实验方法，选择合适的试剂，使用质量

4、控制，使用阴阳性对照（二）定性试验重复性评价 1.确定方法的临界值（cut-off），是判定阴性阳性的分界点。2.准备 临界值20%浓度标本。3.分别测定以上标本20次，记录阴性阳性结果。4.测定结果阴性和阳性结果应该各占一半。5.结论：测定结果阴性和阳性结果应分别大于95%了解（三）定性试验方法学比较样本种类和数量 患者新鲜标本，稳定。阴性和阳性标本应分别在50例以上。2.实验过程 在常规条件下，10-20天完成。3.以符合率进行结果描述。了解 量值溯源的目的，是让常规标本的检测结果得到和参考系列相同的测量值。参考方法常规方法患者新鲜标本参考值结果常规测定结果结果一致一级参考校准测定得到第二

5、节 量值溯源、误差及不确定度掌握几个基本概念二级参考校准一、量值溯源的概念量值的溯源性 通过一条具有规定不确定度的不间断的比较链，使测量结果或标准的值能够与规定的参考标准，通常是与国家标准或国际标准联系起来的特性。二、参考物的量值溯源了解大大小小三、误差的分类和表示系统误差 是指测定值与“真值”的符合程度。以变异系数来表示 特点：单向性，没有随机性，有一定的大小和方向；找到原因，采取措施后可以基本消除。分恒定系统误差和比例系统误差。2.随机误差 是多次测定结果之间的符合程度。以偏倚表示 特点：误差没有一定的大小和方向，呈正态分布，不可预测，不可避免，但可控制在一定范围内；重复测定的均值可减少随

6、机误差。真值样本均值测定值SERE比例系统误差恒定系统误差比较方法结果试验方法结果系统误差类型示意图理想情况四、测量不确定度基本概念 表征合理地赋予被测量之值的分散性，与测量结果相联系的参数。（理解：测量不确定度是指由于测量误差的存在，而对被测量值不能肯定的程度，它表征被测量的真值所处的测量范围。）测量不确定度计算 A类不确定度估算=测量值标准偏差s因子 B类不确定度估算=仪器误差 总不确定度的合成：“平方和 开平方”评价的意义 方法学评价，是通过实验途径测定分析方法的技术性能，并评价分析性能是否被临床所接受。评价的基本步骤 1.确定方法的质量目标，总允许误差 2.选定评价指标，重复、回收、干

7、扰、比较 3.收集评价的实验数据，进行统计学分析 4.判断方法的临床可接收性什么是检测系统？完成一个项目检测涉及的仪器、试剂、校准品、测定方法、质量控制、保养计划等的（规定）组合。贝克曼LX20生化仪罗氏的检测试剂盒贝克曼的校准品葡萄糖氧化酶法如：葡萄糖测定贝克曼LX20生化仪贝克曼的检测试剂盒贝克曼的校准品葡萄糖氧化酶法两个不同的检测系统一、检测系统的概念及分类完整的检测系统自建的检测系统进行性能核实进行详尽的评估二、检测系统的评估方法 一个检测系统从厂家的实验室搬运到我们的常规实验室，诸如环境（供电、供水、温度、湿度等）和操作人员等的改变，其性能是否还能保持和说明书上的描述一致？因此需要评

8、估（一）评估内容 与检测结果质量相关的：精密度、准确度、可报告范围等。（二）评估方法 重点是检测系统性能评价（方法学评价）性能评价参考文件 美国临床和实验室标准研究院（CLSI）公布一系列与方法学评价相关的文件，如：EP5-A精密度评价 EP6-A线性评价 EP7-A干扰实验 EP9-A2方法比对 。必要时可以利用上述EP文件对我们的检测系统进行标准化的评估。精密度是指同一样本在规定条件下多次重复测得的一系列单次值之间的接近程度，是表示测定结果中随机误差大小的指标。精密度一般以变异系数CV%表示 重复性试验是评价精密度的常用方法。性能可接受判断 （1）批内或日内标准差应小于等于CLIA88规定

9、的总允许误差的1/4 （2）日间的标准差应小于等于CLIA88规定的总允许误差的1/3四、准确度的评价（一）准确度评价指标有：方法比较试验、回收试验和干扰试验。（二）方法比较试验 实验方案：EP9-A2 1.基本方法：用两种方法同时对一组新鲜标本进行测定，根据测定结果的差异，得到恒定或比例系统误差。2.实验要点：（1）比较方法的选择：尽可能选择性能高的方法，如参考方法。（2）实验标本与测定（见定量检测的方法学比对）标本例数、浓度分布、测定时间、测定顺序比例系统误差恒定系统误差比较方法结果试验方法结果3.结果分析理想情况4.临床可接受判断：SE TEa 为可接受水平。3）标准液量（）血清量（）标

10、准液量（mlmlml加入浓度回收浓度1003回收率接近100 分析不受基质影响。无论在纯溶液还是复杂的基质环境中，分析方法的反应能力是一样的。（准确度不受影响）回收率明显偏离100 分析明显受不同的基质影响。在不同的基质环境下，分析方法的反应能力有明显差异。（准确度受影响）回收率的理解：基质：分析样品中，除了被测物质之外的，都称为可接受判断 一般：SE+RE 1.03）例预期值实测值预期值预期值实测值实测值举例七、生物参考区间（一）关于基本概念：参考个体 根据临床的要求选择的检测个体；参考总体 所有参考个体的集合称；参考抽样组 一定数量的参考个体；参考值 对一个参考个体进行某项目的测定得到的一

11、个测定值；参考值范围 所有参考抽样组的各参考值合起来为；参考区间 所有参考值根据临床使用要求，经过统计归纳分析后，确定的是参考区间（是参考值范围的一部分）。（二）参考区间的建立 1.实验方案：建立新项目参考值范围和参考区间的计划 2.选择参考个体怎样才算健康？各项目临床应用不同，对健康也有不同的规定。一般规定要排除的：饮酒、吸烟、高血压尽可能与使用该项目的患者分布组成相近的；除非有必要，不要选择门诊或住院患者。是否要分年龄组和性别组。3.做好参考个体分析前的准备尽量减少生物变异，避免引入干扰。4、参考值数据的要求和分析（1）建议至少每组要取120个参考值数据；（2）按照统计学要求舍取疑似离群点，如有离群点被剔除，应补足数据；（3）绘制分布图，了解数据的分布特性；（4）参考值数据分组要根据临床意义并作Z检验（p56）。（三）参考区间的转移和验证 实验室引入外部实验室或厂家提供的参考区间的过程，称参考区间的转移。实验室一般存在以下两种情况：（1）使用相同检测系统的参考区间的转移 （2）使用不同检测系统的参考区间的转移对于上述（1），可采用“用20个参考值数据进行验证”。对于上述（2），则采用EP9-A2进行方法比对和偏倚评估。