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1、小鼠雌二醇（E2）酶联免疫分析（ELISA）试剂盒使用说明书厦门慧嘉生物科技有限公司本试剂盒仅供研究使用。药品名称：通用名：小鼠雌二醇（E2）酶联免疫分析试剂盒使用目的：本试剂盒用于测定小鼠血清、血浆、或相关组织液中雌二醇（E2）的残留含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中小鼠的雌二醇（E2）水平。用纯化的雌二醇（E2） 抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中加入雌二醇E2），再与HRP标记的 羊抗鼠抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB 在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中 的雌二醇（E
2、2）呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线 计算样品中小鼠雌二醇（E2）的含量。试剂盒组成120倍浓缩洗涤液30ml X 1 瓶7终止液6ml X 1 瓶2酶标试剂6ml X 1 瓶8标准品（72ng/L）0.5ml X 1 瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5ml X1 瓶4样品稀释液6ml X 1 瓶10说明书1份5显色剂A液6ml X 1 瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml X 1/瓶12密封袋1个标本处理及要求1. 血清、血浆标本可直接测定；2. 组织：取相关组织1g于5ml PBS中匀浆，室温孵育5小时（期间不时旋涡混合） 后，2000-30
3、00转/分离心10分钟后，取上清液待测。3. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。4. 采集后尽早进行实验，若不能马上进行试验，可将标本放于20C保存，但应避免反 复冻融。操作步骤1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上按序设标准品孔10孔，在第一、第二孔中分别 加标准品100卩1，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液50卩1，混匀；再各取100卩1分 别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50卩1，混匀后，在第 三孔和第四孔中先各取50卩1弃掉；再各取50卩1分别加到第五、第六孔中；再在第五、 第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀；混匀
4、后从第五、第六孔中各取50卩1分别加 到第七、第八孔中；再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50卩1，混匀后从第七、 第八孔中分别取50卩1加到第九、第十孔中；再在第九第十孔分别加标准品稀释液50卩1, 混匀后从第九第十孔中各取50卩1弃掉。（稀释后各孔加样量都为50卩1,浓度分别为48ng/L, 32 ng/L , 16ng/L, 8ng/L, 4 ng/L）。2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样 品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40卩1,然后再加待测样品10卩1 （样 品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，轻轻晃动混匀
5、。3. 温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。4. 配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50卩1，空白孔除外。7. 温育：操作同3。8. 洗涤：操作同5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50y1，再加入显色剂B50y1，轻轻震荡混匀，37C避光显色 15分钟.10. 终止：每孔加终止液50卩1，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。计算以标准物的浓度为
6、横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的OD值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数， 即为样品的实际浓度。注意事项1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。2. 浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值 大于标准品孔第一孔OD值的），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）05. 严格按说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准6. 本试剂不同批号组分不得混用。7封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。8.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9 底物请避光保存。检测范围：40 pg/ml-1000 pg/ml灵敏度：25 pg/ml规格：96人份/盒 保存条件及有效期1. 试剂盒保存：；2-8Co2. 有效期：6个月
小鼠雌二醇ELISA试剂盒说明书
