维生素C含量测定方法综述

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1、维生素维生素C的结构式的结构式 维生素C：六碳的多羟基内酯CCO H O H2,6-二氯酚靛酚滴定法测定维生素C含量v其能还原2,6-二氯酚靛酚染料。v维生素C具有还原性的烯二醇基，我们通过氧化还原滴定来测定维生素COClClNOHCCCHOHOCHOOCHHOCH2OH 原理原理2，6-二氯靛酚是一种染料，其氧化型在酸性介质中为红色，碱性介质中为蓝色，与Vc反应后，生成无色的还原型酚亚胺，因此，在酸性条件下，用2，6-二氯靛酚滴定至溶液显玫瑰红色，即为终点；无需另加指示剂。方法方法取本品适量（约相当于Vc50mg），用适量水溶解，置100ml量瓶中，加偏磷酸-醋酸试液20ml,再用水稀释置刻

2、度，摇匀；精密量取稀释液适量（约相当于Vc2mg）置50ml的锥形瓶中,加偏磷酸-醋酸试液5ml,用2,6-二氯靛酚滴定液滴定,至溶液显玫瑰红色,并持续5s不褪；空白试验：取偏磷酸-醋酸试液5.5ml，加水15ml，用2，6-二氯靛酚滴定液滴定。计算：(V-V0)F T WW 标示量 标示量%=反应摩尔比反应摩尔比100CCO H O HOHClClNOHCCOCHCOOOCHCH2OHHO 维生素C 2,6-二氯酚靛酚 维生素C 2,6-二氯酚靛酚（还原型）（氧化型，粉红色）（氧化型）（还原型）+=v2,6-二氯酚靛酚染料的钠盐在水溶液中显蓝色，在酸性溶液中呈红色，被还原后红色消失。碘量法o

3、原理：由于维生素C分子中的烯二醇基有极强的还原性，能被碘氧化，用碘滴定VCoEC6H6O6/C6H8O6=0.18 ,EI2/I-=0.535 o终点：淀粉为指示剂，溶液出现稳定的蓝色即为终点o反应式：222 23462 2IS OIS O 碘量法n碘的浓度由已知浓度的Na2S2O3标准溶液标定n反应式：n计算式：nWvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%碘量法 注意！测定时：加HAC使溶液呈弱酸性 原因:(1)Vc还原性很强，在空气中很容易被氧化，在碱性介质中更甚(2)I2在碱性介质中会发生歧化反应 加HAC可减少VC的副反应，避免实验误差电位滴定法原理(具体来说:)随着

4、滴定剂的加入，由于发生化学反应，待测离子浓度将不断变化；从而指示电极电位发生相应变化；导致电池电动势发生相应变化；计量点附近离子浓度发生突变；引起电位的突变，因此由测量工作电池电动势的变化就能确定终点。电位滴定法u右图：电位滴定法基本仪器装置n计算式：(与碘量法相同)nWvc=C(I2)V(I2)M(vc)/m(vc)*100%n优点：n解决了滴定分析中遇到有色或浑浊溶液时无法指示终点的问题2 2 分光光度测定维生素分光光度测定维生素C C 2.1 22.1 2，4 4一二硝基苯肼分光光度一二硝基苯肼分光光度法法 2.2 2.2 钼蓝比色法钼蓝比色法 2.3 2.3 其他方法其他方法2，4一二

5、硝基苯肼分光光度法一二硝基苯肼分光光度法 l原理：l维生素C在空气中尤其在碱性介质中极易被氧化成脱氢抗坏血酸l反应式：HHHHHH2，4一二硝基苯肼分光光度法一二硝基苯肼分光光度法 pH5,脱氢抗坏血酸内环开裂，形成二酮古洛糖酸 二酮古洛糖酸分光光度法o样品溶液与VC标准溶液按上述方法同样处理o500nm处测吸光度o下图：721型分光光度计 差示旋光法差示旋光法原理原理方法方法结果结果维生素C片在不同PH值的溶液中旋光度有显著差异，而片剂辅料旋光度保持不变差示旋光法消除辅料的影响，直接测出该制剂的含量讨论讨论与与 差示旋光法差示旋光法方法方法TEXT1）标准溶液的配制准确称取维生素C精制品5.

6、0g，乙二胺四乙酸钠0.37g,置于100mL容量瓶中,用新沸冷却的蒸馏水溶解,加水到指定刻度,配制成50mg/mL的维生素C标准溶液。TEXT原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与2）比旋光度与溶液pH值的关系量取10.0mL维生素C标准液于50mL量瓶中,用水稀释至50mL。测定溶液的pH及旋光度,然后逐次分批加入氢氧化钠固体(每次约50mg),每次溶解后,测定一次溶液的pH及其旋光度,得到维生素C溶液的pH及旋光度关系原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与差示旋光法差示旋光法NoImage选定选定pH为为2.2和和6.2 差示旋光法差示旋光法2）差示旋光度与溶液浓度关系吸取2.0、4.0、8

7、.0、16.0、20.0mL的维生素C标准液各两份,分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲液定容；一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容，静置3min后,用220mm测定管，以前者为空白，测定后者的差示旋光度(a)。文献结果：线性方程为a=0 205*C+005，r=09964原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与 差示旋光法差示旋光法3）辅料干扰试验取混合辅料20mg(淀粉、硬脂酸镁、EDTA、糊精等按处方比例混匀)两份分别置于50mL的容量瓶,一份用pH2.2的盐酸盐缓冲液定容,一份用pH6.2的磷酸盐缓冲液定容,滤去不溶物,滤液在两种pH值测定差示旋光度。文献结果：辅料的差示旋

8、光度为零，说明辅料对维生素C含量的测定不干扰。原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与 差示旋光法差示旋光法4）稳定性试验同一测试样品，在120min内，每隔3min测定一次差示旋光度。文献结果：差示旋光度基本不变原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与 差示旋光法差示旋光法5）回收率试验精密称取维生素C精制品500.0mg两份，分别置于50mL容量瓶中，各加入20mg辅料，分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液，测定差示旋光度。文献结果：平均回收率为97.8，变异系数cv为1.03原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与 差示旋光法差示旋光法方法方法TEXT6）样品测定取维生素C片剂10片，

9、称重研碎后分别用盐酸盐缓冲液及磷酸盐缓冲液配制成50mL溶液(相当于含Vc 20mg/mL)，滤去不溶物，测定滤液的差示旋光度，根据回归方程计算其含量。TEXT原理原理讨论讨论方法方法结果结果与与方法方法TEXT1）维生素易被氧化,空气及水中的氧均可使其氧化分解，配制溶液时使用新沸冷却水,同时加人EDTA作为稳定剂；2）样品测定时，片剂部分物质不能完全溶解，必须过滤除去，然后测定滤液的差示旋光度。TEXT原理原理讨论讨论方法方法结果结果与与3 高效液相色谱法测定维生素Cn3.1 HYPERSILC83.1 HYPERSILC8色谱柱色谱柱法法n3.2 VenusilXBPC183.2 Venu

10、silXBPC18柱法柱法n3.3 3.3 其他方法其他方法 系统采用VenusilXBPC18柱(46x250 mm，5g)，用02的偏磷酸的水溶液作为流动相，流速1 mlmin，检测波长240 nm；维生素C浓度在01-10 mgmL范围内有良好的线性关系。该方法回收率9989，标准偏差091，操作简便、灵敏、可靠 薄层扫描法薄层扫描法操作方法与结果操作方法与结果（1）试纸的制备 2,6-二氯靛酚钠(DCP-Na)溶于无水乙醇配成0.05%的DCP-Na乙醇溶液，滤纸在盛有DCP-Na乙醇溶液的展开缸中浸渍3min，边浸边摇展开缸，使滤纸均匀着色，充分被染料溶液所饱和。取出悬挂于暗处，晾干

11、后，立即放入干燥器中避光保存，备用。薄层扫描法薄层扫描法（2）缓冲溶液的配制 称取柠檬酸水合物10g，放入1000ml容量瓶中，加入1M 氢氧化钠 420ml，并用蒸馏水稀释至刻度，此溶液的pH应为3.5。否则，用酸或碱调整 pH值，保存于冰箱中。薄层扫描法薄层扫描法3）扫描条件确定 在制备的染料试纸上定量点上维生素C对照品进行扫描，维 生素 C在 290nm 处有最大吸收，420nm处无吸收，故选择1=290nm，2=420nm双波长反射式锯齿扫描。原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与4）线性实验）线性实验 4.1）对照品溶液的配制）对照品溶液的配制 精密称取维生素精密称取维生素C标准品标准

12、品100mg，用缓冲溶液配，用缓冲溶液配成成lmg/ml的标准溶液。精密称取维生素的标准溶液。精密称取维生素C标准溶液标准溶液1、2、3、4、5ml，分别置于分别置于10ml容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。容量瓶中，用缓冲溶液稀释至刻度。4.2）测定）测定 用用5 l定量毛细管，分别吸取上述溶液各定量毛细管，分别吸取上述溶液各5 l，点于试纸上，点于试纸上。点样后晾干，并将试纸点样后晾干，并将试纸 固定在固定在20cm20cm玻璃板上，放入薄层扫描仪。玻璃板上，放入薄层扫描仪。测定测定A 的积分值的积分值(峰面积峰面积)作为纵坐标作为纵坐标Y，点样量为横，点样量为横 坐标坐标X，得一直线，得一

13、直线方程方程 Y=15692X+130225，r=09991 原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与方法方法TEXT5）样品的含量测定 取维生素 C片10片，研细，精密称取平均片重一片的粉末，放入100ml容量瓶中，加入缓冲液至刻度，振摇，使维生 素 C溶解，放置、澄清，用吸液管取3ml 移至10ml容量瓶中，用缓冲液稀释至刻度。用 5 l定量毛细管点样品溶液与不同浓度的标准液于同一试纸上，然后扫描 测定峰面积，由工作曲线法计算维生素C片中的维生素C含量。TEXT原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与6）回收率实验 精密称取维生素C对照品20mg，其它原辅料适量，置 10ml容量瓶中，加缓冲液稀释至刻度，振摇，滤过，弃初滤液。分别吸取续滤液与对照品维生 素 C液各5 l点于同一试纸上，按上述条件进行扫描测定。点样时各点间距应大于10mm，扫描测不定期波长可做少量变动，但每次测定必须固定同一测定波长点样量 在38l之间线性关系较好，当点样量为10 l，线性关系较差。原理原理方法方法结果结果讨论讨论与与