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1、一 教学要求 学习并掌握形态观察及死活细胞的鉴别方法。二二 实验原理 酵母菌是不运动的单细胞真核微生物，其大小通常比细菌大几十倍甚至十几倍。大多数以出芽方式进行无性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通过接合产生子囊孢子。本实验是通过美蓝染液水浸片和水碘液水浸片来观察酵母的形态和出芽生殖方式。美蓝是一种无毒的染料，它的氧化型呈蓝色，还原型无色。用美蓝对酵母的活细胞进行染色时，由于细胞的新陈代谢作用，细胞内具有较强的还原能力，使美蓝由蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，具有还原能力的酵母活细胞是无色的，而死细胞或代谢作用微弱的衰老细胞则呈蓝色，借此即可对酵母菌的死活细胞进行鉴别。Scanning el
2、ectron micrograph of the common bakers and brewers yeast Saccharomyces cerevisiae.Note the budding division and previous bud scars.三 材料与器材l菌种：斯达油脂酵母（Lipomyces starkeyi）2.1390.l 培养基和试剂：麦芽汗琼脂培养基，0.05 和0.1 吕氏碱性美蓝染色液，革兰氏染色用碘液.l显微镜，玻片等.四四 操作步骤操作步骤 1、菌种活化将酵母移种至新鲜的麦芽汁琼脂斜面上，2528培养48 h左右备用。2、美蓝镜片的观察1）在载玻片中央加
3、一滴0.1%吕氏碱性美蓝染色掖，然后按无菌操作用接种环挑取少量酵母菌苔放在染液中，混合均匀。2）用镊子取一块盖玻片，先将一边与菌液接触，然后慢慢将盖玻片放下使其盖在菌液上。3）将制片放置约3min后镜检，先用低倍镜然后用高倍镜观察酵母的形态和出芽情况，并根据颜色来区别死活细胞。4）染色约0.5h后再次进行观察，注意死活细胞数量是否增加。5）用0.05%吕氏碱性美蓝染液重复上述操作。3、水一碘液镜片的观察在载玻片中央加一小滴革兰氏染色用碘液，然后在其上加3小滴水，取少许酵母菌苔放在水一碘液中混匀，盖上盖玻片后镜检。5注意事项1、加染液不宜过多或过少，否则，在盖上盖玻片时，菌液会溢出或出现大量气泡
4、而影响观察。2、盖玻片不宜平着放下，以免产生气泡影响观察。六 思考题1、吕氏碱性美蓝染液浓度和作用时间的不同，对酵母菌死细胞数量有何影响？试分析其原因。2、在显微镜下，酵母菌有哪些突出的特征区别于一般细菌？一 教学要求 学习并掌握酵母菌子囊孢子的观察方法。二、二、基本原理 子囊孢子是子囊菌类真菌有性生殖产生的有性孢子。在酵母菌中，能否形成子囊孢子及其形态是酵母菌分类鉴定的重要依据之一。酵母菌形成子囊孢子需要一定的条件，所以对不同种属的酵母要选择适合形成子囊孢子的培养基。Sexual sporeslAscosporeFormed in a sac(ascus)三 材料与器材l菌种：同前.l试剂：
5、5孔雀绿水溶液，0.5番红水溶液，95乙醇.l显微镜，玻片等.四四 操作步骤操作步骤1、菌种活化将酵母移种至新鲜的麦芽汁琼脂斜面上，2528培养24h左右，然后再转种23次。2、产孢培养将经活化的菌种转接到麦氏琼脂斜面上，2528培养约1周。3、制片取经产孢培养的酵母斜面培养物，在净洁载玻片上按常规涂片、干燥、固定。4、染色滴加5%孔雀绿染色1min。5、脱色用95%乙醇脱色30s，水洗。6、复染用0.5%番红复染30s，水洗，用吸水纸吸干。7、镜检干后用油镜观察（子囊孢子呈绿色，菌体和子囊呈粉红 色）。五 注意事项 菌种活化时，要采用新配制、表面湿润的斜面培养基。六 思考题 如何区别酵母菌的营养细胞和释放出子囊外的子囊孢子？
实验一a酵母菌的形态观察
