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1、高效液相色谱仪（HPLC ）校正方法0.1 输液系统：.】.1梯度误差G不超过土3%C.1*2泵流量设定值误差S 土2%s0.】.3流量稳定性误差 S 土2%R0.2 紫外检测器性能0.2.1基线噪声不超过5X10-4AU，基线漂移不超过5X10-3AU022定量测量重复性误差（6次进样）RSDW1.5%023最小检测浓度不超过lX10-7g/ml萘/甲醇溶液024可调波长紫外可见光检测器波长示值不超过2nm（HP1100高效液相色谱仪可由仪器自身完成）1 校正条件1-1 环境温度10-30C，相对湿度低于65%12 校正设备121 秒表 分度值小于 01 s1,2,2分析天平最大称量200g
2、,最小分度值0.1mg123 容量瓶124 微量注射器13 标准物质和试剂131 HPLC 用甲醇、纯水，分析纯的丙酮1，3,21X10-4g/ml,1X10-7g/ml 的萘甲醇溶液133 紫外波长标准溶液2 校正方法2，1 梯度误差G的校正C2，1，1进行梯度洗脱程序，A溶剂为水，B溶剂为0.1%丙酮的水溶液，B经5个阶段从0变到100%, 20%40%60%80%100%，重复测量两次，取平均值，求各段梯度误差Gci,取最大作为仪器梯度误 差，公式：Gci= （LiLm）/LmX100%Li：第i段信号值的平均值；Lm ：各段输出信号平均值的平均值可接受标准：-3%WGciW3%22 泵
3、流量设定值误差Ss、流量稳定性误差S的校正R221 将仪器的输液系统、进样器、色谱柱和检测器联接好，以甲醇为流动相，按表一设定流量，待流速稳定后，在流动相排出口用事先清洗称重过的容量瓶收集流动相，同时用秒表计时，准确的收集10-25分钟，称重，按下式计算流动相流量设定值误差Ss和流动相流量稳定性误差S。公式：Ss=（Fm-F ） /FsRS100%可接受标准：-2%WSsW2%S= （Fmax-Fmin）/FX100%R可接受标准：-2%WSW2%RSs： 流量设定值误差（%）；Fm= （W - W ） /p t.t：流量实测值（ml/min）21W :容量瓶+流动相的重量（g）； W :容量
4、瓶的重量（g）； Fs：流量设定值（ml/min）； 21p t：实验室温度下流动相的密度（g/cm3）； t：收集流动相的时间（min）；S :流量稳定性误差（%）； Fmax为同一组测量中流量最大值（ml/min）；RFmin:同一组测量中流量最小值（ml/min）； F为同一组测量值的算术平均值（ml/min）表一：Ss和S的校正R流量设定值（ml/min）1.01.5测量次数33收集流动相时间（min）1510允许误差S2%2%SR2%2%2.3 基线噪声和漂移2.3.1选用C18的色谱柱，以波长254nm,流动相为100%甲醇，流速l.Oml/min,仪器稳定后记录基线 30min，
5、求基线噪声N。可接受标准：N W5X10-4AUdd2.3.2基线漂移用1h内基线偏离原点的值（AU/h）表示。可接受标准：DW5X10-3AU/h2.4 最小检测浓度2.4.1以上述色谱条件下，进样20ul的lX10-7g/ml的萘甲醇溶液，计算最小检测浓度CL。公式:2 N CX20dHVN :基线噪声，mm；C：标准溶液浓度，g/ml；dH：标准溶液色谱峰的峰高，mm； V进样体积，ul。2.4.2可接受标准：CWlX10-7g/ml2.5 定量测定重复性的校正将仪器联接好，使之处于正常工作状态，波长254nm,流动相为100%甲醇，流速1.0ml/min,用萘的甲醇溶 液连续进样6次记
6、录下峰面积，按下式计算相对标准偏差：nRSD = E（Xi- X ） 2/ （n-1）X（1/ X ）X100%I=1RSD:相对标准偏差（）； n测量次数；Xi：第I次测量的峰面积X - n次进样的峰面积算术平均值可接受标准：RSDW1.5%2.6 波长示值误差2.6.1用注射器将紫外波长标准溶液（标准波长为235nm, 257nm, 313nm和350nm）从检测器入口注入样品池冲洗，并将池充满，将波长调到低于标准波长5nm处，到标准波长+4nm处，测得的最大吸 收值处对应的波长与标准波长之差为波长示值误差；目前仪器可以在1ml/min的流量下，直接用空管连 接检测器，每隔2min改变1n
7、m,连续进标准样10ul，同样可得波长示值误差。262可调波长紫外可见光检测器波长示值误差（此项只适用于HP1100高效液相色谱仪且带有HP工 作站）。263打开HP1100液相色谱仪和HP工作站，打开输液泵和检测器，用纯水冲洗系统直至稳定，进入 Diagnosis 窗口，点击氘灯图标，进入 show module tests 状态，点击 VWD VL calibration test 点击 start ，系统自动进入校正状态，待校正完毕，将校正结果打印归档。2-6-4可接受标准：2W2nm3 性能确认31 使用标准品或供试品，确认仪器性能符合使用要求；32 先进行色谱柱的性能确认，内容包括：
8、分离度，对称因子，理论塔板数和峰面积标准偏差。33 液相色谱柱的确认3.3.1测试标准样配制：称量1000mg苯酚，100mg联苯加入到100ml容量瓶中，移入邻苯二甲酸二甲 酯、邻苯二甲酸二乙酯各1ml，然后用甲醇定容到100ml，混匀，从中移取1ml该溶液，用乙腈：水=70： 30 定容至 100ml。332方法：流动相为乙腈：水=70： 30, 流速为1.0ml/min，波长为254nm,温度为30C，进样量为： 10ul, 运行 10min。333 色谱柱： Extend-C18 Analytical, 5um,46*250mm。334连续进行5次分析，分离度均R1.5；邻苯二甲酸二乙酯对称因子S在0.801.50范围内；邻苯二甲酸二乙酯柱效3000m-1邻苯二甲酸二乙酯峰面积的标准偏差应W1.5%。34 按照性能确认方法逐步进行，并记录谱图； 根据性能测试的结果，评价仪器是否符合性能要求。4 校正结果处理和校正周期41 校正结果全部项目均符合技术要求者，判为合格，方可使用。若某些指标达不到要求，关于仪器 情况，仪器负责人以维修报告的形式报于QC经理，由QC经理批准维修方案。液相色谱仪的校正周期为一年。
高效液相色谱仪校正方法
