糖化蛋白检测ppt课件

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1、LOGOCompany Logo糖化蛋白的定义糖化蛋白的定义糖化蛋白：血液中的葡萄糖可以将糖基衔接到氨基酸的糖化蛋白：血液中的葡萄糖可以将糖基衔接到氨基酸的残基上构成的物质，称糖化蛋白残基上构成的物质，称糖化蛋白葡萄糖葡萄糖 糖基糖基+氨基酸氨基酸 残基残基葡萄糖葡萄糖 糖基糖基 残基残基 氨基酸氨基酸 注：注：1.1.反响中的蛋白质有很多种，如血红蛋白、清蛋白、晶状体反响中的蛋白质有很多种，如血红蛋白、清蛋白、晶状体蛋白及胶原蛋白等蛋白及胶原蛋白等2.2.反响是一个缓慢、不可逆的非酶促反响反响是一个缓慢、不可逆的非酶促反响3.3.该反响糖化蛋白的浓度主要用于评价血糖的控制效果，并该反响糖化蛋

2、白的浓度主要用于评价血糖的控制效果，并不用于糖尿病的诊断不用于糖尿病的诊断Company Logo糖化蛋白分类糖化蛋白分类1.2.3.糖化血红蛋白糖化血红蛋白v一一.糖化血红蛋白的简介糖化血红蛋白的简介v1.1.定义：糖化血红蛋白为血红蛋白定义：糖化血红蛋白为血红蛋白两条两条链链N N端的颉氨酸与葡萄糖化合端的颉氨酸与葡萄糖化合而成。而成。v2.2.主要来源：主要来源：v 成人血红蛋白通常有成人血红蛋白通常有HbA(97%)HbA(97%)、HbA2(2.5%)HbA2(2.5%)、HbF(0.5%)HbF(0.5%)v HbA HbA的糖基化分类：的糖基化分类：糖化糖化HbAv%HbA两条两

3、条链链两条两条链链+1,6 两磷酸果糖两磷酸果糖+6 磷酸果糖磷酸果糖+丙酮酸丙酮酸+葡萄糖葡萄糖HbA1a1HbA1a2HbA1bHbA1cHbA0不能与普通不能与普通血红蛋白区分血红蛋白区分在在HbA1中主要的成分是中主要的成分是HbA1c，约占，约占80%HbA16v3.3.糖化血红蛋白的影响要素：糖化血红蛋白的影响要素：v 主要与血红蛋白和红细胞寿命时段内血糖平主要与血红蛋白和红细胞寿命时段内血糖平均均 度有关度有关v 红细胞的寿命为红细胞的寿命为120120天，其半寿期为天，其半寿期为3535天，测天，测定的糖化血红蛋白，反响定的糖化血红蛋白，反响6868周平均血糖周平均血糖v降低：

4、溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性继续性继续性 低血糖症等。低血糖症等。v增高：可以了解糖尿病人在增高：可以了解糖尿病人在2323个月的血糖控个月的血糖控制情况不佳。此外，用含葡萄糖的透析液作血透制情况不佳。此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高高v v 糖化血红蛋白的检测糖化血红蛋白的检测v二二.糖化血红蛋白的检测糖化血红蛋白的检测v 1.标本要求标本要求v 采集静脉血，用采集静脉血，用EDTA、草酸盐、草酸盐和氟化物抗凝和氟化物抗凝v 肝素抗凝标本需求在肝素抗凝标本需求在2

5、天内完成测天内完成测定，且不适定，且不适v 用于某些方法的检测，故不引荐用于某些方法的检测，故不引荐运用运用。v 全血标本可于全血标本可于4摄氏度储存一周，摄氏度储存一周，70摄氏度摄氏度 v 可以保管可以保管18周以上，普通不引荐周以上，普通不引荐 20摄氏度摄氏度 v 保管保管v 标本要求不能溶血和脂血标本要求不能溶血和脂血 v v 糖化血红蛋白糖化血红蛋白v2.2.检测方法：糖化血红蛋白检测方法很多，常检测方法：糖化血红蛋白检测方法很多，常用的有微柱法离子交换层析、亲和层析、高压用的有微柱法离子交换层析、亲和层析、高压液相、免疫凝集、离子捕获法、电泳法等。液相、免疫凝集、离子捕获法、电泳

6、法等。v 准确率最好的是高效液相层析法准确率最好的是高效液相层析法(HPLC)(HPLC)v1 1阳离子交换色谱法阳离子交换色谱法 v 原理：糖化导致血红蛋白分子外表阳离子原理：糖化导致血红蛋白分子外表阳离子丧失丧失 在弱的阳离子交换剂中，例如在弱的阳离子交换剂中，例如Biorex70Biorex70，同时伴有添加的离子浓度和或同时伴有添加的离子浓度和或pHpH下降，糖下降，糖化血红蛋白在非糖化血红蛋白前先洗脱。化血红蛋白在非糖化血红蛋白前先洗脱。糖化血红蛋白糖化血红蛋白2 2、电泳法、电泳法 原理：相比于非糖化血红蛋白，因糖化而变化的总电原理：相比于非糖化血红蛋白，因糖化而变化的总电荷和糖化

7、血红蛋白的等电点变化是琼脂糖凝胶或者荷和糖化血红蛋白的等电点变化是琼脂糖凝胶或者pHpH梯梯度度5.05.06.56.5的凝胶等电聚焦电泳分别的根底。的凝胶等电聚焦电泳分别的根底。3 3、亲和层析法、亲和层析法 原理：硼酸结合顺式原理：硼酸结合顺式-羟基。商品化的羟基。商品化的m-m-氨基苯硼酸琼氨基苯硼酸琼脂糖共价结合的亲和柱已可用于微柱分析检测。将血样脂糖共价结合的亲和柱已可用于微柱分析检测。将血样本中的血红蛋白加到层析柱后，一切的糖化血红蛋白与本中的血红蛋白加到层析柱后，一切的糖化血红蛋白与硼酸结合而非糖化血红蛋白经过层析柱可被丈量。在参硼酸结合而非糖化血红蛋白经过层析柱可被丈量。在参与

8、高浓度也包含顺式与高浓度也包含顺式-羟基的多羟基复合物，例如山梨羟基的多羟基复合物，例如山梨醇后，糖化血红蛋白与硼酸的结合被交换而从柱子上洗醇后，糖化血红蛋白与硼酸的结合被交换而从柱子上洗脱下来。脱下来。糖化血红蛋白控制规范糖化血红蛋白控制规范v3.控制规范控制规范v 糖化血红蛋白可以反映过去糖化血红蛋白可以反映过去23个月血糖控制个月血糖控制的平均程度，它不受偶尔一次血糖升高或降低的影的平均程度，它不受偶尔一次血糖升高或降低的影响，因此对糖化血红蛋白进展测定，可以比较全面响，因此对糖化血红蛋白进展测定，可以比较全面地了解过去一段时间的血糖控制程度地了解过去一段时间的血糖控制程度v 世界权威机

9、构对于糖化血红蛋白有着明确的控制世界权威机构对于糖化血红蛋白有着明确的控制目的：目的：v ADA美国糖尿病学会建议糖化血红蛋白控制美国糖尿病学会建议糖化血红蛋白控制在小于在小于7v IDF国际糖尿病联盟建议糖化血红蛋白控制国际糖尿病联盟建议糖化血红蛋白控制规范为小于规范为小于6.5。v 目前我国将糖尿病患者糖化血红蛋白的控制规范目前我国将糖尿病患者糖化血红蛋白的控制规范定为定为6.5以下。以下。糖化血红蛋白与血糖的控制情况糖化血红蛋白与血糖的控制情况v4%4%6%6%：血糖控制正常。：血糖控制正常。v6%6%7%7%：血糖控制比较理想。：血糖控制比较理想。v7%7%8%8%：血糖控制普通。：血

10、糖控制普通。v8%8%9%9%：控制不理想，需加强血糖控制，多留：控制不理想，需加强血糖控制，多留意饮食构造及运动，并在医生指点下调整治疗意饮食构造及运动，并在医生指点下调整治疗方案。方案。v9%9%：血糖控制很差，是慢性并发症发生开展：血糖控制很差，是慢性并发症发生开展的危险要素，能够引发糖尿病性肾病、动脉硬的危险要素，能够引发糖尿病性肾病、动脉硬化、白内障等并发症，并有能够出现酮症酸中化、白内障等并发症，并有能够出现酮症酸中毒等急性合并症。毒等急性合并症。v4.糖化血红蛋白测定的临床意义：糖化血红蛋白测定的临床意义：v1、是糖尿病患者血糖总体控制情况的目的、是糖尿病患者血糖总体控制情况的目

11、的 v2有助于糖尿病慢性并发症的认识有助于糖尿病慢性并发症的认识 v3指点对血糖的调整指点对血糖的调整 v4对判别糖尿病的不同阶段有一定的意义对判别糖尿病的不同阶段有一定的意义 v5区别应激性血糖增高和妊娠糖尿病区别应激性血糖增高和妊娠糖尿病(GDM)中的检测意义中的检测意义 果糖胺果糖胺v一、果糖胺一、果糖胺v1.定义：果糖胺是血清葡萄糖与血清蛋白定义：果糖胺是血清葡萄糖与血清蛋白分子末端的氨基发生非酶促糖化反响，构分子末端的氨基发生非酶促糖化反响，构成高分子的酮胺构造。成高分子的酮胺构造。v2.主要来源：主要来源：v 葡萄糖与其他蛋白清蛋白、膜蛋白和葡萄糖与其他蛋白清蛋白、膜蛋白和晶状体结

12、合构成酮胺，而清蛋白是血清晶状体结合构成酮胺，而清蛋白是血清蛋白质中含量最多的组分，所以测定果糖蛋白质中含量最多的组分，所以测定果糖胺主要是测定糖化清蛋白。胺主要是测定糖化清蛋白。v3.清蛋白的半寿期约清蛋白的半寿期约20天，测定果糖胺天，测定果糖胺只能反映只能反映23周血糖的情况周血糖的情况果糖胺果糖胺v二、果糖胺的测定二、果糖胺的测定v1.标本要求标本要求v不溶血的血清标本，也可用肝素抗凝血浆。不溶血的血清标本，也可用肝素抗凝血浆。标本在标本在28可保管一周，不引荐冰冻保管测可保管一周，不引荐冰冻保管测定标本。定标本。v2.测定方法测定方法v果糖胺的测定方法有光度法、果糖胺的测定方法有光度

13、法、HPLC、以及单、以及单克隆抗体等克隆抗体等v常用的是：常用的是：果糖胺果糖胺v果糖胺果糖胺 eneaminol 碱性缓冲液碱性缓冲液+硝基四氮唑蓝硝基四氮唑蓝甲赞甲赞生成的甲赞在生成的甲赞在530nm处的吸光度变化值与果糖胺的浓度成正比处的吸光度变化值与果糖胺的浓度成正比此方法的优点：快速、经济，已用于自动化分析，不受红细胞此方法的优点：快速、经济，已用于自动化分析，不受红细胞 寿命和血红蛋白异体的影响寿命和血红蛋白异体的影响 缺陷：受血浆总蛋白浓度的影响，白蛋白浓度缺陷：受血浆总蛋白浓度的影响，白蛋白浓度1g/d,丈量结果不可靠，同时受中度丈量结果不可靠，同时受中度 溶血，胆红素和维生

14、素溶血，胆红素和维生素c干扰干扰果糖胺果糖胺v3.3.参考范围参考范围v 安康成人：安康成人：205205285umol/L285umol/Lv 糖化清蛋白：糖化清蛋白：191191265umol/L265umol/Lv4.4.丈量的临床意义丈量的临床意义v果糖胺果糖胺(FRUCT)(FRUCT)的测定反映糖化血清蛋白程的测定反映糖化血清蛋白程度可了解患者过去度可了解患者过去1 12 2周内平均血糖的程度。周内平均血糖的程度。增高那么阐明为糖尿病。增高那么阐明为糖尿病。晚期糖基化终末产物晚期糖基化终末产物v一、一、AGE简介简介v1.定义定义v葡萄糖与长寿蛋白如胶原衔接构成的产物葡萄糖与长寿蛋

15、白如胶原衔接构成的产物v2.构成过程构成过程v 葡萄糖与长寿蛋白如胶原衔接，早期构成葡萄糖与长寿蛋白如胶原衔接，早期构成可逆的可逆的Schiff碱，后者经构造重排构成较稳定碱，后者经构造重排构成较稳定的酮胺化合物的酮胺化合物Amadori产物，再经过脱产物，再经过脱水、氧化和缩合等反响，最后构成稳定的、不水、氧化和缩合等反响，最后构成稳定的、不可逆的可逆的AGEs。晚期糖基化终末产物晚期糖基化终末产物v3.3.测定方法测定方法v1 1放射免疫分析法放射免疫分析法v 它检测它检测AGEsAGEs的灵敏度高，但对抗的灵敏度高，但对抗AGEsAGEs抗体纯度的抗体纯度的要求很严厉；要求很严厉；v2

16、2放射受体分析法放射受体分析法v 本方法的特异性、准确性和反复性均很好，但检本方法的特异性、准确性和反复性均很好，但检测时须用较大量放射性同位素，易呵斥环境污染，测时须用较大量放射性同位素，易呵斥环境污染，故在普通实验室难以运用故在普通实验室难以运用v3 3荧光光谱法荧光光谱法v AGEs AGEs在在Ex370/Em440nmEx370/Em440nm有特征性吸收光谱，荧光有特征性吸收光谱，荧光光谱分析是测定光谱分析是测定AGEsAGEs较常用的方法较常用的方法194.AGE对机体的影响对机体的影响 糖基化反响在正常机体即缓慢进展，糖基化反响在正常机体即缓慢进展，AGEs程程度随年龄增长而缓慢添加。但在老化过程，特度随年龄增长而缓慢添加。但在老化过程，特别是在糖尿病继续高血糖情况下，这一反响的别是在糖尿病继续高血糖情况下，这一反响的速度显著加快，速度显著加快，AGEs构成量明显增多。现已构成量明显增多。现已证明，证明，AGEs在动脉粥样硬化、糖尿病肾病、在动脉粥样硬化、糖尿病肾病、糖尿病视网膜病变、早老性痴呆糖尿病视网膜病变、早老性痴呆Alzheimer氏病和老化性病变的发生中起重要作用氏病和老化性病变的发生中起重要作用5.临床意义临床意义作为作为DM的长期控制目的的长期控制目的LOGO