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1、实验四实验四肝糖原的提取与鉴定肝糖原的提取与鉴定刘曼刘曼：15201929769：manna_liu126实验报告问题：实验报告问题：字如其人字如其人结果无分析结果无分析照抄照抄糖原的构造特点糖原的构造特点 糖原是一种高分子化合物(分子量约为400万)。微溶于水，无复原性，与碘作用生成红色。1.葡萄糖单元以-1,4-糖苷 键形生长链。2.约10个葡萄糖单元处构成分枝，分枝处葡萄糖以-1,6-糖苷键衔接，分支添加，溶解度添加。实验原理v肝糖原是糖在体内的重要储存方式之一，储存量虽然不多，但在代谢过程中，它是维持血糖平衡及体内糖的重要来源之一，其合成或分解，对血糖浓度的调理起着重要的作用。肝脏肝脏
2、蛋白质蛋白质(沉淀沉淀)糖原糖原(上清上清)糖原沉淀糖原沉淀与碘液反响与碘液反响斑氏试剂斑氏试剂三氯乙酸三氯乙酸95%乙醇，离心乙醇，离心HCl水解水解加加H2O溶解溶解肝糖原：棕红色砖红色沉淀实验试剂10w/v三氯乙酸溶液三氯乙酸溶液1w/v三氯乙酸溶液三氯乙酸溶液295v/v乙醇乙醇3浓盐酸浓盐酸4实验试剂20%w/vNaOH溶液溶液1碘液碘液2斑氏试剂斑氏试剂3实验器材洗净的石英砂洗净的石英砂1研钵研钵2离心机离心机3电磁炉电磁炉4实验步骤一、肝糖原的提取称取肝组织称取肝组织2g两个组用，置研钵两个组用，置研钵中。参与洗净的石英砂少许及中。参与洗净的石英砂少许及10三三氯醋酸氯醋酸2ml
3、，然后研磨。，然后研磨。再加再加5三氯乙酸三氯乙酸4ml，继续研磨，至，继续研磨，至肝脏组织已充分磨成肉糜状为止。然肝脏组织已充分磨成肉糜状为止。然后以后以2500rmin离心离心10min。将上清液转入另一离心管中，丈量其将上清液转入另一离心管中，丈量其体积。体积。参与等体积的参与等体积的95乙醇。混匀后，静乙醇。混匀后，静置置10min，此时可见糖原呈絮状析出，此时可见糖原呈絮状析出。将此混合物以将此混合物以2500rmin离心离心10min。弃去上清液，并将离心管倒置于滤。弃去上清液，并将离心管倒置于滤纸上纸上12min。向沉淀内参与蒸馏水向沉淀内参与蒸馏水2ml，再用玻璃，再用玻璃棒搅
4、拌沉淀至溶解，即得糖原溶液。棒搅拌沉淀至溶解，即得糖原溶液。分两份分两份实验步骤二、肝糖原的鉴定糖原的颜色反响：在白瓷盘的两个凹糖原的颜色反响：在白瓷盘的两个凹槽内，一个滴加槽内，一个滴加3滴肝糖原溶液，一滴肝糖原溶液，一个滴加个滴加3滴蒸馏水。滴蒸馏水。在两个凹槽内各加在两个凹槽内各加1滴滴I2-KI溶液，在溶液，在桌面上来回晃动白瓷盘。桌面上来回晃动白瓷盘。比较两凹槽内溶液颜色有何不同，并比较两凹槽内溶液颜色有何不同，并解释之。解释之。取出冷却，然后以取出冷却，然后以20NaOH溶液中和至溶液中和至中性中性(用用pH试纸检验，参与约试纸检验，参与约3滴滴)。在上述溶液内，参与斑氏试剂在上述
5、溶液内，参与斑氏试剂2ml2ml。再将该试管置沸水浴加热再将该试管置沸水浴加热5min5min，取出，取出冷却。察看沉淀的生成，并解释之。冷却。察看沉淀的生成，并解释之。肝糖原水解实验：将剩余的糖原溶液肝糖原水解实验：将剩余的糖原溶液转入转入1支试管内，参与浓盐酸支试管内，参与浓盐酸3滴后，滴后，将之放在沸水浴中加热将之放在沸水浴中加热10 min。本卷须知v取肝脏组织时，吸去其附着血液，因血液能够含复原性葡萄糖，会影响后面糖原的鉴定。v研磨应充分，使细胞破裂，肝糖原释放出来。研磨不充分会得不到糖原或含量很少，影响后面的鉴定。v研磨后匀浆转入离心管离心可用滴管转移，假设采用倒入，不能洒落管外，
6、应尽量转移干净。v离心时与另一组的离心管平衡，对称放入离心机。v上清液参与95乙醇后，留意混匀，防止分层，可用滴管吹吸混匀，或玻璃棒搅拌混匀。v调理pH，必需调至中性。糖原会在浓盐酸在沸水浴下分解成小分子化合物，其中有复原性的麦芽糖和葡萄糖。复原性糖会在碱性条件下，班氏试剂与其在沸水浴下生成砖红色Co2O沉淀。班氏试剂为碱性溶液，所以须用20%NaOH溶液中和至中性。过酸，Cu2+会变得较为稳定，不容易发生反响，所以不能进展实验。假设溶液中复原糖含量较低，产生的氧化亚铜便会相应减少，因此实验后能够只会出现绿色、混浊的黄色或橙色沉淀物。班氏试剂中有CuSO4，NaCO3和柠檬酸钠。CO32-提供
7、碱性环境，柠檬酸钠为络合物，协助Cu2+与葡萄糖反响，沸水浴下，Cu2+变为Cu+，即Cu2O，Cu2O为砖红色沉淀。葡萄糖被氧化为糖酸，麦芽糖亦如此。v糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白量变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保管于上清液中，从而使糖原与蛋白质等其它成分别分开来。糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。v糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。这是糖原中葡萄糖长链构成的螺旋中，依托分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反响和葡萄糖的复原性，可断定肝组织中糖原的存在。v
8、CuSO4十2NaOH Na2 SO4+Cu(OH)2v2Cu(OH)2十C6H12O6 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2Ov2CuOH Cu2O(红色)+H2OvCu(OH)2 CuO(黑色)+H2Ov提取糖原时，首先将新颖的肝组织与石英砂及三氯乙酸共同研磨。这样当肝组织被充分破碎后，其中的蛋白质会被三氯乙酸所沉淀。而糖原仍留在溶液中。然后离心除去沉淀，滤液中的肝糖原可经过参与乙醇而沉淀下来。将乙醇沉淀的糖原溶于水，一部分用做碘的颜色反响，另一部分经酸水解成葡萄糖后，用斑氏试剂进展检验。v糖原中葡萄糖螺旋链吸附碘产生的颜色与葡萄糖残基数的多少有关。葡萄糖残基在20个以下的会使碘呈现红色，2030个之间使碘呈现紫色，60个以上的会使碘呈现蓝色。淀粉中分枝链较长，故呈蓝色，而肝糖原分枝中的葡萄糖残基在20个以下通常812个葡萄糖残基，吸附碘后呈现红棕色。
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