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1、细胞爬片步骤PLL配制和处理（Sigma产品，武汉博士德分装，10ml/瓶。4C存放，有效期1年）（1）储存液：1:10稀释液可以保存在4C里，三个月内仍然可以使用。稀释、储存和吸 取多聚赖氨酸要使用塑料制品。工作液：0.1%（ w/v）PLL,用移液枪吸取0.3ml PLL+3ml无菌去离子水，混匀放于10ml 无菌塑料离心管中。封口模密封后4C存放。（2）无菌处理：PLL不可以高温消毒，故应过滤除菌分装于无菌处理的细胞冻存管内， 1ml/管,封口模密封，4C保存。另外，准备无菌去离子水50ml。多聚赖氨酸PLL包被（1）灭菌的去离子水（三蒸水）1:10稀释多聚赖氨酸溶液。（2）用之前将稀释
2、的多聚赖氨酸溶液放在室内，使其温度维持在18-26C。（3）将玻片浸在稀释的多聚赖氨酸溶液5分钟。（注意增加时间不会提高包被效果）。（4）将过滤除菌的多聚赖氨酸加入一个消毒好的培养皿（超净台内操作），然后将高压 灭菌的小玻片放到多聚赖氨酸内浸泡5min,无菌晾干即可。（底面贴紧培养皿，存在包被 PLL 不好的可能，放入培养板孔内注意正反面！）或者：铺片于培养皿中，移液枪将 PLL 工作液滴加于玻片上，室温10分钟后，用消毒好的纱布条吸取玻片上的PLL液。在超静台 内风干后使用，或者超静台内过夜晾干，次日使用。或者：在60C烘箱1小时干燥，或室 温18-26C过夜干燥待用。步骤：（1）准备24孔
3、细胞培养板（消毒好的培养皿）（2）多聚赖氨酸PLL包被（3）培养板每孔中滴1滴培养基，然后将玻片置于液滴上，压紧（通过表面张力的作 用将玻片吸附于培养板上）（4）常规细胞消化，离心，重悬，将吹打的细胞悬液分别加到每个孔盖玻片上，让其 贴壁生长，可以用移液枪加样30卩l于盖玻片上（5）24 孔板做完细胞爬片后，再小心用镊子将爬片取出，细胞面朝向载玻片，用中性 树胶封片，照相。（主张用20%-50%甘油封片，中性树胶封的不好容易“花片”）（6）PBS 洗涤，以去除血清等物质。（接着做 IC）细胞爬片方法与技巧爬片的准备：1、爬片可用一般的盖玻片，也可用专用爬片；2 、应用盖玻片，可根据自己的需要剪
4、裁成合适的大小，以备置于6孔板、 12孔板或24 孔板；3、将剪裁好的爬片，置于浓硫酸中浸泡并过夜，第二天先用自来水冲洗20遍，再用三 蒸水冲洗3遍（个人认为主要目的是冲洗干净就可以了），放在饭盒或者培养皿（一定是玻 璃的哦，要不然就 ）中烘干后进行高压消毒。培养板的准备：1、泡酸过夜2、冲洗，烘干（1、 2步骤与前大致相同）3、放入超净工作台用紫外线照12小时就可以用了（在照之前可以将爬片一并放入， 若细胞贴壁能力不强，可经多聚赖氨酸浸片后放入。贴壁能力强的话，就可以省略了，进行 紫外线消毒）注：此步自己的经验是爬片可以先浸入消毒后的PBS内，紧接着放入培养板内。目的： 浸过PBS的爬片依靠表面的液体,可以用培养板孔底贴和紧密，以利于细胞长到爬片上。自 己刚开始做的时候，经常就是细胞全都长在了爬片与培养板之间，爬片上细胞罕见。） 细胞爬片：1、胰酶消化细胞后计数2、根据自己的需要选择合适的细胞密度种入培养板内即可3、第二天即可进行干预措施
细胞爬片步骤
