《分光光度法》PPT课件

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1、1第八章第八章吸吸 光光 光光 度度 法法2化学分析化学分析：常量组分：常量组分(1%),Er 0.1%0.2%依据化学反应依据化学反应,使用玻璃仪器使用玻璃仪器 化学分析与仪器分析方法比较化学分析与仪器分析方法比较仪器分析仪器分析：微量组分：微量组分(105为高灵敏度为高灵敏度;10104 4*选择性好选择性好*显色剂在测定波长处无明显吸收。显色剂在测定波长处无明显吸收。对照性好对照性好,maxmax60 nm.60 nm.*反应生成的有色化合物反应生成的有色化合物组成恒定，稳定组成恒定，稳定。*显色条件易于控制，显色条件易于控制，重现性好重现性好。6.2 光度分析法的设计光度分析法的设计6

2、.2.1 显色反应显色反应35：助色团助色团NH2，OH，X （孤对电子）（孤对电子）ne2.显色剂显色剂O生色团生色团：NN，NO，OC=S,N （共轭双键）（共轭双键）e无机显色剂无机显色剂:SCN-Fe(SCN)2+H2O2 TiOH2O22+有机显色剂有机显色剂:36有机显色剂有机显色剂CH3CCCH3 HON NOH NNOHCOOHSO3HOO型：型：NNNOH OHON型型：PARNH NHNSNS型型：双硫腙双硫腙NN型：型：丁二丁二酮肟酮肟邻二邻二氮菲氮菲磺基水杨酸磺基水杨酸37 实验条件包括实验条件包括:溶液酸度，显色剂用量，试剂溶液酸度，显色剂用量，试剂加入顺序，显色时间

3、，显色温度，有机络合物的加入顺序，显色时间，显色温度，有机络合物的稳定性及共存离子的干扰等稳定性及共存离子的干扰等。（1）溶液的酸度）溶液的酸度 M+HR=MR+H+*影响显色剂的平衡浓度和颜色影响显色剂的平衡浓度和颜色*影响被测金属离子的存在状态影响被测金属离子的存在状态*影响络合物的组成影响络合物的组成 pH与吸光度关系曲线确定与吸光度关系曲线确定pH 范围。范围。6.2.2 显色条件的选择显色条件的选择38（2）显色剂的用量）显色剂的用量 M(被测组分被测组分)+R(显色剂显色剂)=MR(有色络合物有色络合物)为使显色反应进行完全，需加入过量的显色剂。为使显色反应进行完全，需加入过量的显

4、色剂。但但显色剂不是越多越好。有些显色反应，显色剂加人太显色剂不是越多越好。有些显色反应，显色剂加人太多，反而会引起副反应，对测定不利。在实际工作中多，反而会引起副反应，对测定不利。在实际工作中根据实验结果来确定显色剂的用量。根据实验结果来确定显色剂的用量。c(R)c(R)c(R)39（3 3）显色反应时间显色反应时间 有些显色反应瞬间完成，溶液颜色很快达到稳有些显色反应瞬间完成，溶液颜色很快达到稳定状态，并在较长时间内保持不变定状态，并在较长时间内保持不变;有些显色反应有些显色反应虽能迅速完成，但有色络合物的颜色很快开始褪虽能迅速完成，但有色络合物的颜色很快开始褪色色;有些显色反应进行缓慢，

5、溶液颜色需经一段时有些显色反应进行缓慢，溶液颜色需经一段时间后才稳定。制作吸光度间后才稳定。制作吸光度-时间曲线确定适宜时间。时间曲线确定适宜时间。（4）显色反应温度）显色反应温度：显色反应大多在室温下进行。：显色反应大多在室温下进行。但是，有些显色反应必需加热至一定温度完成但是，有些显色反应必需加热至一定温度完成。（5）溶剂）溶剂：有机溶剂降低有色化合物的解离度，提有机溶剂降低有色化合物的解离度，提高显色反应的灵敏度。如在高显色反应的灵敏度。如在Fe(SCN)3的溶液中加的溶液中加入丙酮颜色加深。还可能提高显色反应的速率，入丙酮颜色加深。还可能提高显色反应的速率，影响有色络合物的溶解度和组成

6、等。影响有色络合物的溶解度和组成等。40邻二氮菲亚铁反应完全度与邻二氮菲亚铁反应完全度与pH的关系的关系 Fe2+3RR(H)Fe(A)33333FeR FeR 33Fe(A)R(H)FeR lglglg3lg3lgRFe HHA柠檬酸柠檬酸c(R)R=10-4molL-13103FeR3413FeR lgFe pH38为适宜为适宜的酸度范围的酸度范围42（6 6）干扰及其消除方法）干扰及其消除方法a.控制溶液酸度控制溶液酸度b.加入掩蔽剂加入掩蔽剂 选取的条件是掩蔽剂不与待测离子作选取的条件是掩蔽剂不与待测离子作用，掩蔽剂以及它与干扰物质形成的络合物的颜色用，掩蔽剂以及它与干扰物质形成的络合

7、物的颜色应不干扰待测离子的测定。应不干扰待测离子的测定。c.利用氧化还原反应，改变干扰离子的价态利用氧化还原反应，改变干扰离子的价态 d.利用校正系数利用校正系数e.用参比溶液消除显色剂和某些共存有色离子的干扰。用参比溶液消除显色剂和某些共存有色离子的干扰。f.选择适当的波长选择适当的波长g.当溶液中存在有消耗显色剂的干扰离子时，可通过当溶液中存在有消耗显色剂的干扰离子时，可通过增加显色剂的用量来消除干扰。增加显色剂的用量来消除干扰。h.分离分离 以上方法均不奏效时，采用预先分离的方法。以上方法均不奏效时，采用预先分离的方法。43测量波长和吸光度范围的选择测量波长和吸光度范围的选择（1 1）测

8、 量 波 长 的 选 择测 量 波 长 的 选 择 为 了 使 测 定 结 果 有 较为 了 使 测 定 结 果 有 较高 的 灵 敏 度，应 选 择 被 测 物 质 的 最 大 吸 收 波高 的 灵 敏 度，应 选 择 被 测 物 质 的 最 大 吸 收 波长的光作为入射光，这称为长的光作为入射光，这称为“最大吸收原则最大吸收原则”（maximum absorption）。选用这种波长的）。选用这种波长的光 进 行 分 析，不 仅 灵 敏 度 高，且 能 减 少 或 消光 进 行 分 析，不 仅 灵 敏 度 高，且 能 减 少 或 消除由非单色光引起的对朗伯除由非单色光引起的对朗伯-比尔定律

9、的偏离。比尔定律的偏离。但 是，在 最 大 吸 收 波 长 处 有 其 他 吸 光 物但 是，在 最 大 吸 收 波 长 处 有 其 他 吸 光 物质 干 扰 测 定 时，则 应 根 据 入 射 光 波 长 吸 收 最质 干 扰 测 定 时，则 应 根 据 入 射 光 波 长 吸 收 最大，干扰最小的原则。大，干扰最小的原则。44例例 丁二酮肟光度法测钢中镍，丁二酮肟光度法测钢中镍，络合物丁二酮肟镍的最大吸收络合物丁二酮肟镍的最大吸收波长为波长为470 nm，但试样中的铁，但试样中的铁用酒石酸钠掩蔽后，在用酒石酸钠掩蔽后，在470 nm处也有一定吸收，干扰镍的测处也有一定吸收，干扰镍的测定。为

10、避免铁的干扰，可以选定。为避免铁的干扰，可以选择波长择波长 520 nm进行测定，虽然进行测定，虽然测镍的灵敏度有所降低，但酒测镍的灵敏度有所降低，但酒石酸铁不干扰镍的测定。石酸铁不干扰镍的测定。45（2）吸光度范围的选择）吸光度范围的选择 从仪器测量误差的角度来看，为使测量从仪器测量误差的角度来看，为使测量结果得到较高的准确度，一般应控制标准结果得到较高的准确度，一般应控制标准溶液和被测试液的吸光度在范围内。可通溶液和被测试液的吸光度在范围内。可通过控制溶液的浓度或选择不同厚度的吸收过控制溶液的浓度或选择不同厚度的吸收池来达到目的。池来达到目的。466.2.4 6.2.4 参比溶液的选择参比

11、溶液的选择 利用参比溶液来调节仪器的零点，可消除利用参比溶液来调节仪器的零点，可消除由吸收池壁及溶剂对入射光的反射和吸收带由吸收池壁及溶剂对入射光的反射和吸收带来的误差，扣除干扰的影响。参比溶液选择：来的误差，扣除干扰的影响。参比溶液选择：a 试液及显色剂均无色，蒸馏水作参比溶液。试液及显色剂均无色，蒸馏水作参比溶液。b 显色剂为无色，被测试液中存在其他有色显色剂为无色，被测试液中存在其他有色离子，用不加显色剂的被测试液作参比溶离子，用不加显色剂的被测试液作参比溶液。液。c 显色剂有颜色，可选择不加试样溶液的试显色剂有颜色，可选择不加试样溶液的试剂空白作参比溶液。剂空白作参比溶液。47d 显色

12、剂和试液均有颜色，可将一份试液加入适显色剂和试液均有颜色，可将一份试液加入适当掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与当掩蔽剂，将被测组分掩蔽起来，使之不再与显色剂作用，而显色剂及其他试剂均按试液测显色剂作用，而显色剂及其他试剂均按试液测定方法加入，以此作为参比溶液，这样就可以定方法加入，以此作为参比溶液，这样就可以消除显色剂和一些共存组分的干扰。消除显色剂和一些共存组分的干扰。e 改变加入试剂的顺序，使被测组分不发生显色改变加入试剂的顺序，使被测组分不发生显色反应，可以此溶液作为参比溶液消除干扰。反应，可以此溶液作为参比溶液消除干扰。48 0 1 2 3 4 mg/mlA。*0.80.60.4

13、0.20溶液浓度的测定溶液浓度的测定A bc工作曲线法工作曲线法(校准曲线校准曲线)6.2.5 标准曲线的制作标准曲线的制作(p229)496.3 6.3 光度分析法的误差光度分析法的误差1 1 对朗伯对朗伯-比尔定律的偏离比尔定律的偏离 在吸光光度分析中，经常出现标准曲线不呈直线在吸光光度分析中，经常出现标准曲线不呈直线的情况，特别是当吸光物质浓度较高时，明显地看到的情况，特别是当吸光物质浓度较高时，明显地看到通过原点向浓度轴弯曲的现象通过原点向浓度轴弯曲的现象(吸光度轴弯曲吸光度轴弯曲)。这种。这种情况称为偏离朗伯情况称为偏离朗伯-比尔定律。若在曲线弯曲部分进行比尔定律。若在曲线弯曲部分进

14、行定量，将会引起较大的误差。定量，将会引起较大的误差。偏离朗伯比尔定律偏离朗伯比尔定律的原因主要是仪器或溶液的原因主要是仪器或溶液的实际条件与朗伯的实际条件与朗伯-比尔定比尔定律所要求的理想条件不一致。律所要求的理想条件不一致。50（1）非单色光引起的偏离）非单色光引起的偏离 *朗伯朗伯-比尔定律只适用于单色光，但由于单色器比尔定律只适用于单色光，但由于单色器色散能力的限制和出口狭缝需要保持一定的宽色散能力的限制和出口狭缝需要保持一定的宽度，所以目前各种分光光度计得到的入射光实度，所以目前各种分光光度计得到的入射光实际上都是具有某一波段的复合光。由于物质对际上都是具有某一波段的复合光。由于物质

15、对不同波长光的吸收程度的不同，因而导致对朗不同波长光的吸收程度的不同，因而导致对朗伯比尔定律的偏离伯比尔定律的偏离。51*克服非单色光引起的偏离的措施克服非单色光引起的偏离的措施 使用比较好的单色器，从而获得纯度较高的使用比较好的单色器，从而获得纯度较高的 “单色光单色光”，使标准曲线有较宽的线性范围。，使标准曲线有较宽的线性范围。人射光波长选择在被测物质的最大吸收处，保证人射光波长选择在被测物质的最大吸收处，保证测定有较高的灵敏度，此处的吸收曲线较为平坦，测定有较高的灵敏度，此处的吸收曲线较为平坦，在此最大吸收波长附近各波长的光的在此最大吸收波长附近各波长的光的值大体相等，值大体相等，由于非

16、单色光引起的偏离要比在其他波长处小得由于非单色光引起的偏离要比在其他波长处小得多。多。测定时应选择适当的浓度范围，使吸光度读数测定时应选择适当的浓度范围，使吸光度读数在标准曲线的线性范围内。在标准曲线的线性范围内。52（2 2）介质不均匀引起的偏离介质不均匀引起的偏离 朗伯比尔定律要求吸光物质的溶液是朗伯比尔定律要求吸光物质的溶液是均匀的。如果被测溶液不均匀，是胶体溶均匀的。如果被测溶液不均匀，是胶体溶液、乳浊液或悬浮液时，入射光通过溶液液、乳浊液或悬浮液时，入射光通过溶液后，除一部分被试液吸收外，还有一部分后，除一部分被试液吸收外，还有一部分因散射现象而损失，使透射比减少，因而因散射现象而损

17、失，使透射比减少，因而实测吸光度增加，便标准曲线偏离直线向实测吸光度增加，便标准曲线偏离直线向吸光度轴弯曲。故在光度法中应避免溶液吸光度轴弯曲。故在光度法中应避免溶液产生胶体或混浊。产生胶体或混浊。53（3 3）由于溶液本身的化学反应引起的偏离由于溶液本身的化学反应引起的偏离 溶液中的吸光物质常因解离、缔合、形成新化溶液中的吸光物质常因解离、缔合、形成新化合物或互变异构等化学变化而改变其浓度，因而合物或互变异构等化学变化而改变其浓度，因而导致偏离朗伯导致偏离朗伯比尔定律。比尔定律。A 解离解离 大部分有机酸碱的酸式、碱式对光有不同的大部分有机酸碱的酸式、碱式对光有不同的吸收性质，溶液的酸度不同

18、，酸吸收性质，溶液的酸度不同，酸(碱碱)解离程度不解离程度不同，导致酸式与碱式的比例改变，使溶液的吸光同，导致酸式与碱式的比例改变，使溶液的吸光度发生改变。度发生改变。54 B 络合络合 显色剂与金属离子生成的是多级络合物，显色剂与金属离子生成的是多级络合物，且各级络合物对光的吸收性质不同，例如在且各级络合物对光的吸收性质不同，例如在Fe()与与SCN-的络合物中，的络合物中，Fe(SCN)3颜色最深，颜色最深，Fe(SCN)2+颜色最浅，故颜色最浅，故SCN-浓度越大，溶液颜浓度越大，溶液颜色越深，即吸光度越大。色越深，即吸光度越大。c 缔合缔合 例如在酸性条件下，例如在酸性条件下，CrO4

19、2-会缔合生成会缔合生成Cr2O72-，而它们对光的吸收有很大的不同。，而它们对光的吸收有很大的不同。在分析测定中，要控制溶液的条件，使被测在分析测定中，要控制溶液的条件，使被测组分以一种形式存在，以克服化学因素所引起的组分以一种形式存在，以克服化学因素所引起的对朗伯比尔定律的偏离。对朗伯比尔定律的偏离。552 2 吸光度测量的误差吸光度测量的误差 在吸光光度分析中，仪器测量不准确也是误差在吸光光度分析中，仪器测量不准确也是误差的主要来源。任何光度计都有一定的测量误差。这的主要来源。任何光度计都有一定的测量误差。这些误差可能来源于光源不稳定，实验条件偶然变动，些误差可能来源于光源不稳定，实验条

20、件偶然变动，读数不准确等。读数不准确等。在光度计中，透射比的标尺刻度均匀。吸光度标在光度计中，透射比的标尺刻度均匀。吸光度标尺刻度不均匀。对于同一仪器，读数的波动对透射尺刻度不均匀。对于同一仪器，读数的波动对透射比为一定值；而对吸光度读数波动则不再为定值。比为一定值；而对吸光度读数波动则不再为定值。吸光度越大，读数波动所引起的吸光度误差也越大吸光度越大，读数波动所引起的吸光度误差也越大56 透射比很小或很大时，浓度测量误差都较大，即透射比很小或很大时，浓度测量误差都较大，即光度测量最好选吸光度读数在刻度尺的中间而不落两光度测量最好选吸光度读数在刻度尺的中间而不落两端。待测溶液的透射比端。待测溶

21、液的透射比T在在15%65%之间，或使吸光之间，或使吸光度度A在之间，才能保证测量的相对误差较小。在之间，才能保证测量的相对误差较小。当当A=0.434(或透射比或透射比T=36.8%)时，测量的相对误时，测量的相对误差最小。差最小。TTTTTErln1%100ln576.4 其他吸光光度法及吸光光度法应用其他吸光光度法及吸光光度法应用1 示差吸光光度法示差吸光光度法2 双波长吸光光度法双波长吸光光度法3 弱酸和弱碱解离常数的测定弱酸和弱碱解离常数的测定4 络合物组成的测定络合物组成的测定58（1）示差吸光光度法的原理）示差吸光光度法的原理 吸光光度法一般仅适用于微量组分的测定，当吸光光度法一

22、般仅适用于微量组分的测定，当待测定组分浓度过高或过低，会引起很大的测量待测定组分浓度过高或过低，会引起很大的测量误差，导致准确度降低。示差吸光光度法可克服误差，导致准确度降低。示差吸光光度法可克服这一缺点。目前，主要有高浓度示差吸光光度法、这一缺点。目前，主要有高浓度示差吸光光度法、低浓度示差吸光光度法和使用两个参比溶液的精低浓度示差吸光光度法和使用两个参比溶液的精密示差吸光光度法。它们的基本原理相同，且以密示差吸光光度法。它们的基本原理相同，且以高浓度示差吸光光度法应用最多，仅介绍高浓度高浓度示差吸光光度法应用最多，仅介绍高浓度示差吸光光度法。示差吸光光度法。6.4.1 6.4.1 示差吸光

23、光度法示差吸光光度法59 吸光度差与这两种溶液的浓度差成正比。以把吸光度差与这两种溶液的浓度差成正比。以把空白溶液作为参比的稀溶液的标准曲线作为空白溶液作为参比的稀溶液的标准曲线作为A和和c的标准曲线，根据测得的的标准曲线，根据测得的A求出相应的求出相应的c值，值，从从cx=co+c可求出待测试液的浓度，这就是示差吸可求出待测试液的浓度，这就是示差吸光光度法定量的基本原理。光光度法定量的基本原理。相对相对bccbccbAAAAxx)(00 xxAc b（空白溶液作参比）00Ac b（空白溶液作参比）60（2）示差吸光光度法的误差）示差吸光光度法的误差 c(即即cxco)，测量误差为，测量误差为

24、x%，结果为结果为cx(cx-co)x%；普通光度法的结果为普通光度法的结果为cxcxx%。因。因cx只只是稍大于是稍大于co，故，故cx总是远大于总是远大于c，故示差吸光光度，故示差吸光光度法的准确度高。参比溶液的浓度越接近待测试液法的准确度高。参比溶液的浓度越接近待测试液的浓度，测量误差越小，最小误差可达的浓度，测量误差越小，最小误差可达0.3%。61（1）双波长吸光光度法的原理）双波长吸光光度法的原理 使两束不同波长的单色光以一定的时使两束不同波长的单色光以一定的时间间隔交替地照射同一吸收池，测量并记间间隔交替地照射同一吸收池，测量并记录两者吸光度的差值。这样就可以从分析录两者吸光度的差

25、值。这样就可以从分析波长的信号中扣除来自参比波长的信号，波长的信号中扣除来自参比波长的信号，消除各种干扰，得待测组分的含量。分析消除各种干扰，得待测组分的含量。分析方法的灵敏度、选择性及测量的精密度高。方法的灵敏度、选择性及测量的精密度高。被广泛用于环境试样及生物试样的分析被广泛用于环境试样及生物试样的分析。6.4.2 双波长吸光光度法双波长吸光光度法62 A与吸光物质浓度成正比。这是定量的理论依与吸光物质浓度成正比。这是定量的理论依据。只用一个吸收池，以试液本身对某一波长的光据。只用一个吸收池，以试液本身对某一波长的光的吸光度为参比，消除了因试液与参比液及两个吸的吸光度为参比，消除了因试液与

26、参比液及两个吸收池之间的差异引起的测量误差，提高测量的准确收池之间的差异引起的测量误差，提高测量的准确度。度。bcAAA)(212163（2）双波长吸光光度法的应用）双波长吸光光度法的应用*混浊试液中组分测定混浊试液中组分测定：一般选择待测组分的最大：一般选择待测组分的最大吸收波长为测量波长吸收波长为测量波长(l)，选择与其相近而两波长，选择与其相近而两波长相差在相差在4060 nm范围内且有较大的范围内且有较大的A值的波长值的波长为参比波长。为参比波长。*单组分的测定单组分的测定：进行单组分的测定，以络合物吸：进行单组分的测定，以络合物吸收峰作测量波长，参比波长的选择有：以等吸收收峰作测量波

27、长，参比波长的选择有：以等吸收点为参比波长点为参比波长;以有色络合物吸收曲线下端的某以有色络合物吸收曲线下端的某一波长作为参比波长；以显色剂的吸收峰为参比一波长作为参比波长；以显色剂的吸收峰为参比波长。波长。64*两组分共存时的分别测定两组分共存时的分别测定：当两种组分的吸收光谱当两种组分的吸收光谱有重叠时，要测定其中一个组分就必须消除另一组有重叠时，要测定其中一个组分就必须消除另一组分的光吸收。对于相互干扰的双组分体系，它们的分的光吸收。对于相互干扰的双组分体系，它们的吸收光谱重叠，选择参比波长和测定波长的条件是吸收光谱重叠，选择参比波长和测定波长的条件是:待测组分在两波长处的吸光度之差待测

28、组分在两波长处的吸光度之差A要足够大，要足够大，干扰组分在两波长处的吸光度应相等，这样用双波干扰组分在两波长处的吸光度应相等，这样用双波长法测得的吸光度差只与待测组分的浓度成线性关长法测得的吸光度差只与待测组分的浓度成线性关系，与干扰组分无关，从而消除了干扰系，与干扰组分无关，从而消除了干扰。65 测定苯酚测定苯酚(X)与与2，4，6-三氯苯酚三氯苯酚(Y)混合物中的混合物中的苯酚时就可用这种方法。苯酚时就可用这种方法。当选择当选择2为测量波长，三为测量波长，三氯苯酚在此波长处也有较氯苯酚在此波长处也有较大吸收，产生干扰。选择大吸收，产生干扰。选择波长波长1或或1（等吸收点）（等吸收点）作为参

29、比波长，则可以消作为参比波长，则可以消除三氯苯酚对苯酚测定的除三氯苯酚对苯酚测定的干扰。干扰。663 弱酸和弱碱解离常数的测定弱酸和弱碱解离常数的测定 HB=H+B-pHAAAApKBHBa)()(lg676.4.4 络合物组成的测定络合物组成的测定（1）饱和法）饱和法(又称摩尔比法又称摩尔比法)固定一种组分固定一种组分(通常是金通常是金属离子属离子M)的浓度，改变络合的浓度，改变络合剂剂(R)的浓度，得到一系列的浓度，得到一系列R/M比值不同的溶液，比值不同的溶液，并配制相应的试剂空白作并配制相应的试剂空白作参比液，分别测定其吸光度。参比液，分别测定其吸光度。以吸光度以吸光度A为纵坐标，为纵

30、坐标，R/M为横坐标作图。为横坐标作图。68（2）连续变化法）连续变化法(又称等摩尔系列法又称等摩尔系列法)cM+cR=c，改变，改变cM和和cR的相对量，的相对量，配制一系列溶液，在有色络合物配制一系列溶液，在有色络合物的最大吸收波长处测量这一系列的最大吸收波长处测量这一系列溶液的吸光度。当溶液中络合物溶液的吸光度。当溶液中络合物MRn浓度最大时，浓度最大时，cR/cM比值为比值为n。当当cM/c为时，络合比为为时，络合比为1:1；当当cM/c为，络合比为为，络合比为1:2；当当cM/c时，络合比为时，络合比为1:3。691 了解分子对光的吸收与溶液颜色的关系了解分子对光的吸收与溶液颜色的关

31、系.吸收曲线吸收曲线定定性分析的基础。性分析的基础。定量分析的基础定量分析的基础朗伯朗伯-比尔定律：比尔定律：A=bc=-lgT 式中各参式中各参数的物理意义，定量计算。数的物理意义，定量计算。2 了解目视比色法、分光光度法的特点，分光光度计的基了解目视比色法、分光光度法的特点，分光光度计的基本部件。本部件。3 灵敏度的表示灵敏度的表示摩尔吸光系数的意义和计算摩尔吸光系数的意义和计算；准确度准确度适宜的测量范围、偏离比尔定律的原因。适宜的测量范围、偏离比尔定律的原因。4 显色反应及条件的确定显色反应及条件的确定:显色剂用量、酸度、时间、温显色剂用量、酸度、时间、温度、干扰及消除。度、干扰及消除。5 应用应用:单一组分测定示例、多组分测定、光度滴定、络单一组分测定示例、多组分测定、光度滴定、络合物组成的测定、酸碱离解常数的测定。合物组成的测定、酸碱离解常数的测定。第六章第六章 小小 结结