尿酶活性度的简易鉴别法1

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1、尿酶活性度的简易鉴别法尿素酶是一种人和动物胃肠道及泌尿道细菌感染中常见的酶， 它既是人和动物中 某些致病菌的致病因子之一，又是某些氮源性腐败物转化所必须具备的酶之一 . 它是 人类首次获得晶体并发现含有 Ni 离子的金属酶。大豆饼粕是我国最常用的一种植物性蛋白质饲料，蛋白质含量42%45%,可高达47%。 但未经热处理或热处理不彻底的大豆饼粕中含有对畜禽有害的抗胰蛋白酶、脲酶、血球凝集 素、皂角苷、甲状腺肿诱发因子以及抗凝血因子等抗营养因子，其中抗胰蛋白酶的影响最大， 可导致动物胰腺肿大、胆功能异常，影响饲料蛋白质的消化、利用，降低其生物学效价，进 而影响畜禽的正常生长发育和生产性能，尤其是对

2、肉仔鸡。目前认为较好的大豆热处理方法 是120C高压处理15min或者105C蒸煮30min。若加热过渡，在灭活抗胰蛋白酶等抗营养因 子的同时，也会破坏热敏氨基酸，特别是赖氨酸、精氨酸、大大降低大豆饼粕的消化率及生 物学价值。因此，加热程度不同，加工后大豆饼粕中有毒有害物质的含量不同，其营养价值 和饲喂效果也不同。测定抗胰蛋白酶活性，可直接反映大豆饼粕中抗营养因子水平及加热程度，但该法比较 复杂，因此在生产中广泛采用间接的方法测脲酶活性法。脲酶活性与抗胰蛋白酶活性呈 高度正相关，而且脲酶活性的测定方法与测定其他抗营养因子的方法相比较有简便、快速和 经济的优点。许多国家都制定了脲酶活性标准，我国

3、规定：大豆粕的脲酶活性不得超过0.4。 （GB/T 86222006）方法一 ：一、原理通过在有苯酚红指示剂的情况下，大豆饼粕中含有的尿素酶将试剂中尿素转化成为氨气使样面呈碱性红色反应，作为变性测量。苯酚红指示剂：PH1.2 （橙）一3.0 （黄）,PH6.5（棕黄） 8.2 （紫红）二、仪器：量筒、量杯、玻璃棒、培养皿、不锈钢勺、试剂瓶、滴瓶、烧杯、天平（适量为01g）。三、试剂：1 、 0.1mol NaoH2、0.05mol H2SO43、尿素苯酚红溶液 溶解0.14g苯酚红于7ml0.1mol NaoH和35ml蒸馏水中，溶解21g尿素（分析纯）于300ml蒸馏水中。将两种溶液混合搅匀

4、备用。四、操作步骤：1、用小烧杯倒出适量尿素苯酚红溶液，滴加0.05mol H2SO4将其调至琥珀色。2、 取一小勺粗细均匀的大豆饼（粕）原样，撒在培养皿里，加入适量的苯酚红溶液 轻轻的旋动以使皿内的样品能均匀浸湿。3、 静止 5 分钟观察变色情况。五、结果判定：1、50%-70%的样品出现红点该豆饼（粕）热处理不足，为生品，根据与尿酸酶活性 定量测定结果比较，这类豆饼（粕）的尿酸酶活性值在0.5-0.8 之间。完全未经热 处理的生品，尿素酶活性在8.0 以上。2、25%左右样面出现红点该豆饼（粕）热处理适中，未熟品。尿素酶活性值在 0.05-0.4 之间。3、5-25 分钟后样面无任何红点出

5、现，该豆饼（粕）热处理过度，为焦品尿素酶活性 值在 0.05以下。六、注意事项：1、该实验为快速点滴实验，一定要掌握时间，结果判定不得超过五分钟以免造成误 差。2、在正式试验前，调整尿素苯酚红溶液的颜色时要小心，快到终点时要半滴半滴沿 着烧杯壁加入，充分要匀以免加入酸过量影响结果的测定。方法二：1、原理酚红指示剂：PH6.4 （黄）一&2 （红），大豆制品中所含的尿素酶，在室温下可 将尿素水解，产生氨，释放的氨可使酚红指示剂变红，根据变红时间长短来判断尿素 酶活性大小。2、仪器和试剂(1)粉碎装置：粉碎时应不产生强烈发热（如研体球磨机）(2)天平:感量0.01g(3)试管:直径 1.8cm，长 15cm(4)尿素:分析纯(5)酚红:分析纯、0.1%乙醇（20% ）溶液3、测定步骤将试样研细，称取0.02g试样，称准至O.Olg重，转入试管中，加入0.02g结晶 尿素及两滴酚红指示剂，加20一30mL蒸馏水，摇动10s钟。观察溶液颜色，并记下 呈粉红色的时间。4、尿素酶活性的测定结果表示：（1）1分钟内呈粉红色为活性很强。（2）15分钟内呈粉红色为活性强。（3）515分钟内呈粉红色为有点活性。（4）1530分钟内呈粉红色为没有活性。通常10分钟以上不显粉红色或红色的大豆制品，其尿素酶活性即可认为合格