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1、96T大肠杆菌内毒素试剂盒使用说明书检测范围：0.03Eu/L - 0.8Eu/L使用目的：本试剂盒用于测定大肠杆菌样本中内毒素(endotoxin)含量。实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大肠杆菌内毒素(endotoxin)水平。用纯化的大肠 杆菌内毒素(endotoxin)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入内毒 素(endotoxin),再与HRP标记的内毒素(endotoxin)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合 物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作 用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的内毒素(endo
2、toxin)呈正相关。用酶标仪在 450nm波长下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大肠杆菌内毒素(endotoxin) 浓度。试剂盒组成130倍浓缩洗涤液20ml X 1 瓶7终止液6ml X 1 瓶2酶标试剂6ml X 1 瓶8标准品(1.6Eu/L)0.5ml X 1 瓶3酶标包被板12孔X8条9标准品稀释液1.5ml X 1 瓶4样品稀释液6ml X 1 瓶10说明书1份5显色剂A液6ml X 1 瓶11封板膜2张6显色剂B液6ml X 1/瓶12密封袋1个标本要求1标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20C保存
3、，但应避免反复冻融2. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。操作步骤1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。0.8Eu/L5号标准品150M的原倍标准品加入150山标准品稀释液0.4Eu/L4号标准品150M的5号标准品加入150山标准品稀释液0.2Eu/L3号标准品150M的4号标准品加入150山标准品稀释液0.1Eu/L2号标准品150M的3号标准品加入150山标准品稀释液0.05Eu/L1号标准品150山的2号标准品加入150山标准品稀释液2. 加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作
4、相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50卩1,待测样品孔中先加样品稀释液40卩1, 然后再加待测样品10卩1 (样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。3. 温育：用封板膜封板后置37C温育30分钟。4. 配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复 5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶标试剂50卩1，空白孔除外。7. 温育：操作同 3。8. 洗涤：操作同 5。9. 显色：每孔先加入显色剂A50yl，再加入显色剂B50yl，轻轻震荡混匀，3
5、7C避光显色 15 分钟.10. 终止：每孔加终止液50卩1，终止反应（此时蓝色立转黄色）。11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。操作程序总结：分钟|洗板5次，加入酶标试剂* 3丁弋反应30加入终止液洗板5次，加入显色液爪37匸显色10分钟加入准备好的样品和标准品，浙匸反应30分钟准备试剂，样品和标准品A15分钟之内读0D值计算以标准物的浓度为横坐标， OD 值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的O
6、D值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。注意事项 1试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。2浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。3各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在 5 分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。4. 请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值 大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数伍倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）o5. 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。6. 底物请避光保存。7. 严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.8. 所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。9. 本试剂不同批号组分不得混用。10. 如与英文说明书有异，以英文说明书为准。保存条件及有效期1. 试剂盒保存：；2-8C。2. 有效期： 6 个月
大肠杆菌内素试剂盒使用说明书
