医学课件第一部分概述第二部分血脂脂蛋白及载脂蛋白测定

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1、第一节第一节 概概 述述第二节第二节 血脂、脂蛋白血脂、脂蛋白 及载脂蛋白测定及载脂蛋白测定一、血脂和血浆脂蛋白一、血脂和血浆脂蛋白 自学自学二、脂蛋白代谢紊乱二、脂蛋白代谢紊乱 （一）高脂蛋白血症（一）高脂蛋白血症 血脂含量超过正常称为血脂含量超过正常称为高脂血症，由于血脂均以血浆脂蛋白的形式存高脂血症，由于血脂均以血浆脂蛋白的形式存在，故也称为高脂蛋白血症。按发病原因分为在，故也称为高脂蛋白血症。按发病原因分为两大类。两大类。1.按表型分类按表型分类 以以Fredrickson（1967）分类）分类法为基础，经法为基础，经WHO（1970）修订的分类系统，）修订的分类系统，根据血清根据血清

2、TC、TG、外观和脂蛋白电泳图谱，、外观和脂蛋白电泳图谱，将其分为将其分为6型。型。第一节第一节 概概 述述 （1）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 又称高乳糜微粒又称高乳糜微粒血症。血症。是一种常染色体隐性遗传病。由于是一种常染色体隐性遗传病。由于LPL缺损或缺损或LPL活化因子（活化因子（ApoC）缺损所）缺损所致。婴儿期即可发生，但罕见。其生化检查致。婴儿期即可发生，但罕见。其生化检查特征：特征：4冷置试验，血清上层为奶油状，冷置试验，血清上层为奶油状，下层清亮。下层清亮。血清血清TG，达，达11mmol/L以上，血清以上，血清TC正常或轻度正常或轻度。血清血清LPL活性活性。血清脂蛋白电泳

3、，血清脂蛋白电泳，CM。（2）a高脂蛋白血症高脂蛋白血症 又称高又称高-脂蛋白血脂蛋白血症或高胆固醇血症。症或高胆固醇血症。属常染色体显性遗传，有属常染色体显性遗传，有明显的家族史。病因明显的家族史。病因LPL受体缺损，杂合子型受体缺损，杂合子型发生频率为发生频率为1/500，纯合子型发生频率为，纯合子型发生频率为1/100000。其生化检查特征：。其生化检查特征：4冷置试验，血清外观清亮透明。冷置试验，血清外观清亮透明。血清血清TC，15.6mmol/L尤其是尤其是LDL-C，TG正常。正常。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，-LP。临床表现，中青年常伴有冠状动脉硬化，临床表现，中青年常伴有冠

4、状动脉硬化，结局为心肌梗塞。结局为心肌梗塞。（3）b型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 在在 a 型 基 础 上 伴 有型 基 础 上 伴 有 V L D L（高（高LDL+VLDL血症），病因不明。其生化检血症），病因不明。其生化检查特征：查特征：4冷置试验，血清外观清亮或微混。冷置试验，血清外观清亮或微混。血清血清TC，TG。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，-LP，pre-LP。（4）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 又称宽又称宽-脂蛋脂蛋白血症。白血症。属常染色体显性遗传病，发病率属常染色体显性遗传病，发病率1/10000，病因，病因，ApoE异常，与相应受体结异常，与相应受体结合率合率。其生化检

5、查特征：。其生化检查特征：4冷置试验，血清外观混浊，后形冷置试验，血清外观混浊，后形成蜡样黄色薄膜。成蜡样黄色薄膜。血清血清TC，TG。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，-LP，pre-LP，IDL。融合形成宽。融合形成宽区带。区带。（5）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 又称高前又称高前-脂蛋脂蛋白血症或家族性高甘油三脂血症白血症或家族性高甘油三脂血症。属常染色体。属常染色体显性遗传病，较常见，我国原发性高脂蛋白血显性遗传病，较常见，我国原发性高脂蛋白血症中一半属于此型。病因，症中一半属于此型。病因，ApoA2异常。其生异常。其生化检查特征：化检查特征：4冷置试验，血清外观混浊。冷置试验，血清外观

6、混浊。血清血清TG，TC正常或稍正常或稍。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，pre-LP。临床表现，多见于中年人易发生冠心病。临床表现，多见于中年人易发生冠心病。（6）型高脂蛋白血症型高脂蛋白血症 属常染色体属常染色体显性遗传病，病因不详，可能由几种遗传显性遗传病，病因不详，可能由几种遗传缺陷所致，较罕见。生化检查特征：缺陷所致，较罕见。生化检查特征：4冷置试验，血清上层为奶油状，冷置试验，血清上层为奶油状，下层混浊。下层混浊。血清血清TG，TC。血清脂蛋白电泳，血清脂蛋白电泳，CM，pre-LP。2.按是否继发于全身性疾病分类按是否继发于全身性疾病分类 分分为原发性和继发性高脂血症。常继发于糖

7、为原发性和继发性高脂血症。常继发于糖尿病、肝病、肾病、肥胖以及过量饮酒，尿病、肝病、肾病、肥胖以及过量饮酒，成人发病率为成人发病率为3%5%。3.高脂血症的基因分型法高脂血症的基因分型法 一部分高一部分高脂血症患者存在单一或多个遗传基因的缺脂血症患者存在单一或多个遗传基因的缺陷，具有明显的家族聚集性，有明显的遗陷，具有明显的家族聚集性，有明显的遗传倾向。传倾向。（二）低脂蛋白血症（二）低脂蛋白血症 主要有四种类型主要有四种类型 1.低低LDL血症血症 是一种常染色体显性遗传病，是一种常染色体显性遗传病，病因病因ApoB100低下，血浆低下，血浆LDL减少，减少，TC。2.无无LDL血症血症 罕

8、见的常染色体隐性遗传病，罕见的常染色体隐性遗传病，病因病因ApoB100、B48缺损，血浆中无缺损，血浆中无LDL，TC。3.低低HDL血症血症 病因不详，血清病因不详，血清TG，动脉，动脉粥样硬化、冠心病的发病率高。粥样硬化、冠心病的发病率高。4.无无HDL血症（血症（Tangier病）病）罕见的常染色体罕见的常染色体隐性遗传病，隐性遗传病，ApoA、A缺损，血浆缺损，血浆TC，HDL-C。血脂测定方法很多，目前临床实验血脂测定方法很多，目前临床实验室室基本检验项目基本检验项目有：有：血清外观分析，血清外观分析，TC，TG，HDL-C，LDL-C测定。测定。进一步进一步可可做做HDL亚组分，

9、亚组分，IDL，Apo（如（如ApoA、ApoB100），），Lp（a）及脂蛋白电泳，）及脂蛋白电泳，LPL，LCAT测定，为保证分析结果的测定，为保证分析结果的可靠性，标本的采集应在餐后可靠性，标本的采集应在餐后12h以上。以上。第二节第二节 血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定一、血清外观分析（血清冷置试验）一、血清外观分析（血清冷置试验）混浊混浊（TG增高）增高）下层浊（下层浊（VLDL增高）增高）型型下层清（下层清（VLDL正常）正常）型型均匀混浊均匀混浊（VLDL）TC正常正常 型型上层奶油样上层奶油样（CM）TC增高增高 a型型TC正常正常 正常人正常人清亮清亮（T

10、G正常）正常）TC b，型型空空腹腹血血清清 测测TC 4过夜过夜 测测TC二、血清总胆固醇测定二、血清总胆固醇测定 胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重胆固醇是人体重要的脂类成分，具有重要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素要的生理功能，如合成类固醇激素，维生素D3胆汁酸，并构成细胞膜成分，胆汁酸，并构成细胞膜成分，TC包括包括FC（1/3）和）和CE（2/3），胆固醇与动脉粥样硬），胆固醇与动脉粥样硬化有密切关系，故胆固醇测定是最常用的实化有密切关系，故胆固醇测定是最常用的实验室检测项目之一。验室检测项目之一。TC测定方法很多，约测定方法很多，约200多种，分为化多种，分为化学测定法、酶法、

11、气相色谱法、高效液相色学测定法、酶法、气相色谱法、高效液相色谱法、核素稀释质谱法（决定性方法）。谱法、核素稀释质谱法（决定性方法）。（一）化学测定法（一）化学测定法 主要有两类主要有两类 1.Liberman-Burchard反应反应 简称简称L-B反反应，胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成应，胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成3.5-胆胆烷二烯阳离子，然后被醋酐，浓硫酸氧化生烷二烯阳离子，然后被醋酐，浓硫酸氧化生成绿色的胆烷六烯磺酸。呈色稳定性差。成绿色的胆烷六烯磺酸。呈色稳定性差。2.Zak反应反应 胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱胆固醇经冰醋酸，浓硫酸脱水生成水生成3.5-胆烷二烯阳离子，然后在胆烷二烯

12、阳离子，然后在Fe3+存在存在下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子，灵敏度下氧化生成紫红色胆烷四烯阳离子，灵敏度较较L-B反应高反应高7倍，且呈色稳定性好，但试剂倍，且呈色稳定性好，但试剂腐蚀性极大，不能用于自动化分析。腐蚀性极大，不能用于自动化分析。（二）酶法（二）酶法胆固醇酯胆固醇酯 胆固醇胆固醇 脂肪酸脂肪酸胆固醇胆固醇 O2 胆烷胆烷-4-烯烯-3酮酮 H2O2H2O2 4AAP 酚酚 红色亚胺醌红色亚胺醌 H2OCEHChODPOD 试剂中除上述三种酶外，还有胆酸钠和表面活试剂中除上述三种酶外，还有胆酸钠和表面活性剂及稳定剂，胆酸钠用于激活性剂及稳定剂，胆酸钠用于激活CEH，表面活性，表面

13、活性剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。剂促进胆固醇从脂蛋白中释放。酶法操作简便，快速，试剂无腐蚀性，适合酶法操作简便，快速，试剂无腐蚀性，适合于自动化分析，但也存在有一些不足，于自动化分析，但也存在有一些不足，CEH对胆对胆固醇水解不完全，表面活性剂影响固醇水解不完全，表面活性剂影响CEH活性，黄活性，黄疸血清中过高的胆红素可还原疸血清中过高的胆红素可还原H2O2使结果偏低。使结果偏低。【参考范围】【参考范围】3.105.70mmol/L 【临床意义】【临床意义】血清血清TC含量受年龄、性别、含量受年龄、性别、饮食和运动等因素的影响。饮食和运动等因素的影响。20岁以上随年岁以上随年龄龄而而，70岁以

14、后则有下降趋势。岁以后则有下降趋势。2040岁阶段男性高于女性，但女性绝经后则高于岁阶段男性高于女性，但女性绝经后则高于男性。男性。城市人群高于农村人群，与饮食和城市人群高于农村人群，与饮食和运动有关。运动有关。脑力劳动者高于体力劳动者。脑力劳动者高于体力劳动者。病理性高胆固醇血症病理性高胆固醇血症 原发性高胆固醇原发性高胆固醇血症，糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲血症，糖尿病、胆道阻塞、肾病综合症、甲状腺功能减退。状腺功能减退。病理性低胆固醇血症病理性低胆固醇血症 严重贫血、甲亢、严重贫血、甲亢、营养不良。营养不良。三、血清甘油三脂测定三、血清甘油三脂测定 TG是有一分子甘油与三分子脂肪酸是

15、有一分子甘油与三分子脂肪酸组成的化合物，主要存在于组成的化合物，主要存在于VLDL和和CM中，中，临床化学中往往以测定甘油代表临床化学中往往以测定甘油代表TG的含量。的含量。TG的测定方法很多，如气相色谱法、高效的测定方法很多，如气相色谱法、高效液相色谱法、红外分光光度法。但上述方液相色谱法、红外分光光度法。但上述方法需特殊的仪器设备和技术，故一般只用法需特殊的仪器设备和技术，故一般只用于研究工作中。临床实验室主要用化学法于研究工作中。临床实验室主要用化学法和酶法。和酶法。（一）化学法（一）化学法 基本步骤可归纳为四步基本步骤可归纳为四步 1.提取：提取：甘油三脂的提取甘油三脂的提取 采用合适

16、的溶采用合适的溶剂，使脂蛋白变性提取剂，使脂蛋白变性提取TG，同时去除干扰物，同时去除干扰物质质(磷脂、游离甘油、葡萄糖等磷脂、游离甘油、葡萄糖等),常用方法有：常用方法有：（1）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭）异丙醇抽提，沸石合剂（沸石、高岭土）吸附。土）吸附。（2）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。）异丙醇抽提，氧化铝吸附磷脂。（3）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提，）正壬烷、异丙醇、稀硫酸分溶抽提，免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替免去吸附磷脂的操作，后用价廉的正庚烷代替正壬烷。应用较广。正壬烷。应用较广。2.皂化：皂化：甘油三脂的水解甘油三脂的水解 一般都采一般都采用用KOH乙醇或乙醇

17、或KOH异丙醇溶液，异丙醇溶液，60，515min可使可使TG完全水解。完全水解。3.氧化：氧化：甘油的氧化甘油的氧化 最常用的氧化最常用的氧化剂是剂是HIO4，甘油在酸性条件下被氧化成，甘油在酸性条件下被氧化成甲醛、甲酸。反应受甲醛、甲酸。反应受-磷酸甘油、葡萄糖、磷酸甘油、葡萄糖、丝氨酸的干扰，故抽提时应尽量除去此类丝氨酸的干扰，故抽提时应尽量除去此类物质的干扰。物质的干扰。4.显色：显色：显色测定甲醛。常用方法显色测定甲醛。常用方法有：有：（1）甲醛与）甲醛与变色酸变色酸（4.5-二羟二羟-2.7-萘萘二磺酸）在硫酸溶液中加热生成紫红色二磺酸）在硫酸溶液中加热生成紫红色化合物。（化合物。

18、（570nm）（2）甲醛与）甲醛与乙酰丙酮乙酰丙酮在氨的存在下在氨的存在下缩合成黄色的缩合成黄色的3.5-二乙酰二乙酰-1.4-二氢二氢-2.6-二二甲基吡啶。（甲基吡啶。（420nm）（二）酶法（二）酶法 常用的有常用的有：1.磷酸甘油氧化酶法（磷酸甘油氧化酶法（GK-GPOD-POD法）法）TG H2O 甘油甘油 FA 甘油甘油 ATP 3-磷酸甘油磷酸甘油 ADP 3-磷酸甘油磷酸甘油 O2 磷酸二羟丙酮磷酸二羟丙酮 H2O2 H2O2 4-AAP 酚酚 红色亚胺醌红色亚胺醌 H2O 试剂较稳定，灵敏度高，线性范围宽，试剂较稳定，灵敏度高，线性范围宽，胆红素、维生素胆红素、维生素C可消耗

19、可消耗H2O2使结果偏低。使结果偏低。LPLGK GPOD POD 2.乳酸脱氢酶法（乳酸脱氢酶法（GK-PK-LDH 法）法）TG H2O 甘油甘油 FA甘油甘油 ATP 3-磷酸甘油磷酸甘油 ADPADP 磷酸烯醇式丙酮酸磷酸烯醇式丙酮酸 ATP 丙酮酸丙酮酸 丙酮酸丙酮酸 NADHH+乳酸乳酸 NAD+3.甘油氧化酶法甘油氧化酶法第一步消除血清中原有的甘油：第一步消除血清中原有的甘油：LPLGPOD PKLDH 游离甘油游离甘油 O2 甘油醛甘油醛 H2O2GlyODH2O2 EMAE 无色物质无色物质 EMAE称称N-乙基乙基-N-（3-甲基）甲基）-N-乙酰乙二乙酰乙二胺。是一种还原

20、剂，灵敏度比酚高。第二步测定胺。是一种还原剂，灵敏度比酚高。第二步测定甘油三脂水解释放的甘油：甘油三脂水解释放的甘油：TG H2O 甘油甘油 FA 甘油甘油 O2 甘油醛甘油醛 H2O2 H2O2 4-AAP EMAE 有色化合物有色化合物 POD GlyODLPL POD 【参考范围】【参考范围】0.561.70mmol/L 【临床意义】【临床意义】血清血清TG一般随年龄增长一般随年龄增长而升高，体重超标者往往偏高。而升高，体重超标者往往偏高。1.病理性增高病理性增高 原发性高脂蛋白血症、原发性高脂蛋白血症、肥胖症、糖尿病、肾病综合症、脂肪肝、妊肥胖症、糖尿病、肾病综合症、脂肪肝、妊娠后期。

21、娠后期。2.病理性降低病理性降低 甲亢、肾上腺皮质功能甲亢、肾上腺皮质功能减退、严重肝功能损伤。减退、严重肝功能损伤。四、血清（浆）脂蛋白测定四、血清（浆）脂蛋白测定 （一）血清脂蛋白电泳（一）血清脂蛋白电泳 临床实验室常用的支持介质有醋酸纤临床实验室常用的支持介质有醋酸纤维薄膜和琼脂糖凝胶。维薄膜和琼脂糖凝胶。1.血清脂蛋白醋酸纤维薄膜电泳血清脂蛋白醋酸纤维薄膜电泳 以醋以醋酸纤维薄膜为支持介质，血清脂蛋白经电酸纤维薄膜为支持介质，血清脂蛋白经电泳分离，然后用臭氧氧化，使脂蛋白中的泳分离，然后用臭氧氧化，使脂蛋白中的不饱和脂肪酸的双键断裂生成醛，再用亚不饱和脂肪酸的双键断裂生成醛，再用亚硫酸

22、品红染色，即生成紫红色区带。硫酸品红染色，即生成紫红色区带。2.血清脂蛋白预染琼脂糖电泳血清脂蛋白预染琼脂糖电泳 血清脂蛋血清脂蛋白经饱和苏丹黑白经饱和苏丹黑B预染后，以琼脂糖凝胶为支预染后，以琼脂糖凝胶为支持介质，进行电泳分离，即可得到清晰的兰色持介质，进行电泳分离，即可得到清晰的兰色区带。区带。凝胶浓度一般为凝胶浓度一般为0.5%，超过，超过1%，-Lp与与pre-Lp不易分开，不易分开，0.5%，凝胶机械强度太，凝胶机械强度太低。低。血清：染料为血清：染料为9：1，染料过多稀释标本，染料过多稀释标本，而且染料中乙醇会引起蛋白质变性，影响分离而且染料中乙醇会引起蛋白质变性，影响分离效果。效

23、果。结果判断，直观区带的着色深浅，结果判断，直观区带的着色深浅，宽窄，用浅染，稍浅染，深染及消失加宽窄，用浅染，稍浅染，深染及消失加以描述；或用光密度扫描仪测定。以描述；或用光密度扫描仪测定。【参考范围】【参考范围】-Lp 30%40%pre-Lp 13%25%-Lp 50%60%CM（）（）（二）血清高密度脂蛋白测定（二）血清高密度脂蛋白测定 常以测定常以测定HDL-C含量代表含量代表HDL水平。水平。测定步骤包括测定步骤包括HDL的分离的分离；测定测定HDL中胆固醇中胆固醇。HDL的分离方法有：的分离方法有：超速离心法、凝超速离心法、凝胶过滤法、免疫化学法、电泳法、沉淀法胶过滤法、免疫化学

24、法、电泳法、沉淀法。临床临床实验室常用沉淀法实验室常用沉淀法。沉淀剂一般为二。沉淀剂一般为二价阴离子和多价阴离子。如：肝素价阴离子和多价阴离子。如：肝素-Mg2+、硫酸葡聚糖硫酸葡聚糖-Mg2+、磷钨酸、磷钨酸-Mg2+、聚乙二、聚乙二醇（醇（PEG）等。）等。如：磷钨酸如：磷钨酸-Mg2+选择性地沉淀血清选择性地沉淀血清中的中的LDL和和VLDL，经离心上清液中保留，经离心上清液中保留HDL，然后用酶法测定上清液中的胆固醇，然后用酶法测定上清液中的胆固醇含量，即代表含量，即代表HDL中的胆固醇。中的胆固醇。【参考范围】【参考范围】男男 1.280.33mmol/L 女女 1.370.33mm

25、ol/L 【临床意义】【临床意义】HDL-C与冠心病发病呈与冠心病发病呈负相关，负相关，HDL-C低于低于0.9mmol/L是冠心病危是冠心病危险因素。险因素。（三）血清高密度脂蛋白亚组分测定（三）血清高密度脂蛋白亚组分测定 HDL有三个亚类（有三个亚类（HDL1、HDL2、HDL3）最近的研究工作表明，）最近的研究工作表明，HDL2亚类亚类与冠心病危险度的相关程度比总与冠心病危险度的相关程度比总HDL-C更更密切密切。HDL2 d=1.0631.125g/ml HDL3 d=1.1251.210g/ml HDL2脂类脂类60%蛋白质蛋白质40%；HDL3脂类脂类45%蛋白质蛋白质55%高密度

26、脂蛋白亚组分的分析方法有超速高密度脂蛋白亚组分的分析方法有超速离心法、柱层析法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、离心法、柱层析法、聚丙烯酰胺凝胶电泳法、多价阴离子分级沉淀法。多价阴离子分级沉淀法。其中其中多价阴离子分级沉淀法具有快速、多价阴离子分级沉淀法具有快速、经济、简便更为实用，是目前临床实验室最经济、简便更为实用，是目前临床实验室最常用的方法常用的方法。常用的沉淀剂有硫酸葡聚糖。常用的沉淀剂有硫酸葡聚糖-Mg2+、聚乙二醇（、聚乙二醇（PEG）。）。【原理】【原理】用用PEG做沉淀剂，以不同浓度的做沉淀剂，以不同浓度的PEG在不同在不同pH条件下分别将条件下分别将VLDL和和LDL（沉（沉淀剂淀剂

27、 95g/L PEG，pH6.5）HDL2（沉淀剂（沉淀剂 170g/L PEG，pH7.5）沉淀，上清液中只含有）沉淀，上清液中只含有HDL（沉淀剂（沉淀剂）和）和HDL3（沉淀剂（沉淀剂），然后），然后用酶法测定用酶法测定HDL-C和和HDL3-C，并以，并以HDL-C减减去去HDL3-C的差即为的差即为HDL2-C的含量。的含量。【参考范围】【参考范围】HDL2-C 男男 0.530.17mmol/L 女女 0.620.22mmol/L HDL3-C 男男 0.750.17mmol/L 女女 0.750.16mmol/L （四）低密度脂蛋白测定（四）低密度脂蛋白测定 低密度脂蛋白水平通常

28、以低密度脂蛋白水平通常以LDL-C含量表含量表示。示。LDL-C测定方法很多，常用的有：测定方法很多，常用的有：1.Friedewald公式法公式法 LDL-C TCHDL-C 式中的浓度单位是式中的浓度单位是mmol/L，在一般情，在一般情况下能得到可被临床接受的近似结果，但况下能得到可被临床接受的近似结果，但TG4.25mmol/L时不能应用此公式计算，时不能应用此公式计算，否则结果偏差太大。否则结果偏差太大。TG2.2 2.聚乙烯硫酸盐沉淀法聚乙烯硫酸盐沉淀法 聚乙烯硫酸聚乙烯硫酸（PVS）能选择性沉淀血清中）能选择性沉淀血清中LDL，再以血，再以血清清TC减去上清液（含减去上清液（含H

29、DL和和VLDL）胆固）胆固醇，即得醇，即得LDL-C值。试剂中加入值。试剂中加入EDTA去除去除两价阳离子，避免两价阳离子，避免VLDL共沉，辅以聚乙二共沉，辅以聚乙二醇独甲醚（醇独甲醚（PEGME）可加速沉淀。）可加速沉淀。3.直接测定法直接测定法 匀相的匀相的LDL-C直接测定直接测定法是以不同的表面活性剂的双试剂使非法是以不同的表面活性剂的双试剂使非LDL-C与与LDL-C分两步水解，因先消除非分两步水解，因先消除非LDL-C，故也称为消除法。，故也称为消除法。【参考范围】【参考范围】LDL-C3.12mmol/L 【临床意义】【临床意义】LDL-C增高是动脉粥样硬化增高是动脉粥样硬化

30、发生发展的主要危险因素。发生发展的主要危险因素。（五）脂蛋白（五）脂蛋白（a）测定）测定 脂蛋白脂蛋白(a)是由载脂蛋白是由载脂蛋白(a)与载脂蛋白与载脂蛋白B100通过二硫键连接所形成的特殊蛋白。脂蛋白通过二硫键连接所形成的特殊蛋白。脂蛋白(a)测定的方法目前常用的是测定的方法目前常用的是ELISA法。法。血清中的脂蛋白血清中的脂蛋白(a)与单克隆抗与单克隆抗Lp(a)抗体抗体结合，再与过氧化物酶结合，形成结合，再与过氧化物酶结合，形成Lp(a)-单克单克隆抗体隆抗体-酶复合物，然后与底物孵育显色。酶复合物，然后与底物孵育显色。【参考范围】【参考范围】120180mg/L 【临床意义】【临床

31、意义】Lp（a）动脉粥样硬化、）动脉粥样硬化、冠心病的独立危险因素，与动脉粥样硬化冠心病的独立危险因素，与动脉粥样硬化成正相关，成正相关，血清血清Lp（a）浓度）浓度300mg/L时，时，其冠心病的发病率高于健康人的其冠心病的发病率高于健康人的25倍。倍。血清血清Lp（a）水平主要决定于遗传，个体）水平主要决定于遗传，个体间间Lp（a）水平差异很大，但同一个体血）水平差异很大，但同一个体血浆浆Lp（a）水平的变化较小，环境、饮食、）水平的变化较小，环境、饮食、药物对它的影响不明显。药物对它的影响不明显。五、血清载脂蛋白五、血清载脂蛋白A及及B测定测定 脂蛋白中的蛋白质部分称为载脂蛋白脂蛋白中的

32、蛋白质部分称为载脂蛋白（apolipoprotein，Apo），可分为），可分为A、B、C、D、E、F、G、H八类，其中八类，其中ApoA，B，C还有亚类。还有亚类。ApoA是是HDL的主要蛋白质的主要蛋白质，占，占HDL蛋白质的蛋白质的85%左右，它的血清浓度可代表左右，它的血清浓度可代表HDL水平，水平，ApoB是是LDL的主要蛋白质的主要蛋白质，占，占LDL蛋白质的蛋白质的97%左右，左右，ApoB浓度主要反浓度主要反映映LDL水平。水平。Apo的测定方法主要有三类：的测定方法主要有三类：层析层析分离分离，然后再按一般蛋白质定量；，然后再按一般蛋白质定量；电泳电泳分离分离后经染色光密度扫

33、描定量；后经染色光密度扫描定量；各种免各种免疫分析法疫分析法。层析法操作麻烦，一般只用于研究；层析法操作麻烦，一般只用于研究；电泳法简便灵敏，但各类电泳法简便灵敏，但各类Apo染色性能不染色性能不一致，重复性不好；免疫法特异性好，灵一致，重复性不好；免疫法特异性好，灵敏度高，不需预先分离脂蛋白，适合临床敏度高，不需预先分离脂蛋白，适合临床实验室的应用，但需特异抗血清。实验室的应用，但需特异抗血清。目前常用的免疫学方法有：目前常用的免疫学方法有：1.单向免疫扩散法（单向免疫扩散法（RID）方法简单，方法简单，但需时间长，灵敏度较低。但需时间长，灵敏度较低。2.火箭免疫电泳法（火箭免疫电泳法（IE

34、）比比RID快速、快速、灵敏，抗血清用量少。灵敏，抗血清用量少。3.免疫比浊法免疫比浊法 测定抗原抗体复合物形测定抗原抗体复合物形成而产生的混浊，方法简便、快速，适合成而产生的混浊，方法简便、快速，适合于自动分析仪，灵敏度高于火箭电泳法，于自动分析仪，灵敏度高于火箭电泳法，免疫比浊法又分为：散射比浊法和透射比免疫比浊法又分为：散射比浊法和透射比浊法。浊法。4.酶联免疫吸附法（酶联免疫吸附法（ELISA）需制备需制备指示酶与指示酶与Apo或其抗体的交联物（现有商或其抗体的交联物（现有商品化试剂盒）和酶标仪。品化试剂盒）和酶标仪。5.放射免疫法（放射免疫法（RIA）用核素标记抗用核素标记抗原作为示

35、踪物，灵敏度可达原作为示踪物，灵敏度可达35g。6.荧光免疫分析法（荧光免疫分析法（FIA）7.化学发光免疫法（化学发光免疫法（CLIA）【参考范围】【参考范围】Apo A 1.001.50g/L Apo B 0.801.00g/L 【临床意义】【临床意义】Apo A是是HDL的主要结的主要结构蛋白，构蛋白，Apo B 是是LDL的主要结构蛋白，的主要结构蛋白，因此，因此，Apo A和和Apo B 可直接反映可直接反映HDL和和LDL的含量。但在某些病理情况下，的含量。但在某些病理情况下，Apo A与与HDL和和Apo B与与LDL并非成正相并非成正相关，临床上常将关，临床上常将 Apo A和和Apo B 比值作比值作为冠心病的危险指标。为冠心病的危险指标。