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1、紫外可见分光光度法测定维生素B12含量作者 :作者：靳月琴 郭丽敏 宋建荣 杨金香 刘海林 陈文斌 作者单位：长治医学院化学综合实验室 (046000)【摘要】 目的：探讨维生素B12片剂中维生素B12的含量测定方法。方法：紫外可见分光 光度法。样品以标准曲线法为测定含量依据，在 361 nm 的波长处测定吸光度。结果：维生 素B12在5 p g/mL100 p g/mL浓度范围线性关系良好。回归方程Y=0.0193X+0.04& r=0.9937。结论：测定的5个不同批号样品其含量均在标示范围之内，该 方法简便、准确、灵敏度高。【关键词】紫外可见分光光度法；维生素B12片剂；含量测定The
2、Content Measurement of V-B12 by UV-VisJin Yueqin，Guo Limin，Shong Jianrong，et al.Department of Chemistry Complex Laboratory of Changzhi Medical CollegeAbstract Objective： The measurement method of V-B12 content in tablet is established.Methods： UV-Vis The absorption is measured at 361 nm according to
3、 calibration carve method. Results： The linear range is in 5 p g/mL100 p g/mLand the regression equation is Y=0. 0193X+0. 048， r=0. 9937. Conclusion： The measurement is done in 5 kind of lot number and the result indicate that the V-B12 content in tablet corresponds with standard range. This method
4、is simple， accurate and high sensitivity.Key words UV-Vis； V-B12 tablet； Content measurement维生素B12是含钻的有机药物，为深红色结晶，又称为红色维生素B12或氰钻胺，是唯 一含有主要矿物质的维生素。测定维生素B12片剂含量的传统方法是运用紫外可见分光光度 计，以吸光系数法为测定含量依据，但是该方法对仪器精密度要求较高。标准曲线法是紫外 可见分光光度法中最经典的方法，若认定一台仪器，固定其工作状态和测定条件，则该方法 可消除因仪器而产生的一些误差，且操作简便易行1。本文利用紫外可见分光光度计， 建立了维
5、生素B12片剂含量测定的标准曲线法，并利用该方法对山西亨瑞达制药有限公司生 产的维生素B12片剂的5个不同批号进行了 V-B12的含量测定，方法准确、简便、重复性好。1 仪器与试药1.1 仪器754 型紫外可见分光光度计(上海光谱仪器有限公司)。1.2 试药维生素 B12 对照品（中国药品生物制品检定所）；维生素 B12 片剂（山西亨瑞达制 药有限公司，批号 060801, 060701, 061002, 060902, 070303）。0.8 滤膜AUTOMATIC SCIENCE （TIANJIN） INSTRUMENT CO；LTD。2 方法与结果2.1 测定波长的选择维生素B12吸收光
6、谱上有三个吸收峰：278 nm、361 nm、550 nm。维生素B12在361 nm的吸收峰干扰因素少，吸收又最强，中国药典规定以361 nm处吸收峰的比吸光系数E1%1 cm 值（207）为计算含量依据2。本实验选择 361nm 为测定波长,以标准曲线法为计算 含量依据。2.2 溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备3：精密称定对照品维生素B12 0.0025 g,置于25 mL 容量瓶中,加水至刻度,摇匀。将溶解后的溶液放置冰箱中冷藏备用。2.2.2供试品溶液的制备：维生素B12片剂为糖衣片，取本品50片，除去糖衣，使其 呈现粉红色，研细，精密称定研磨样品，约相当于维生素B12 1.25m
7、g（每片的标示量为25.0 M g）,置50 mL容量瓶中，加水35 mL，充分振摇30 min使其溶解，加水稀释至刻度，密塞, 再用力振摇10 min,静置，取上清液，用0.8 m m的微孔滤膜滤过，滤液放置冰箱中冷藏 备用。2.3 线性关系 标准曲线的绘制：精取2.2.1项下的储备液，用水分别按1.5、 2、 4、 6、 8、 10、15、20倍稀释，摇匀。在361 nm波长处测定吸光度，结果见表1。表 1100 M g/mL 标准品稀释倍数测定结果（略）以吸光度A与质量浓度c绘制标准曲线，得回归方程Y=0.0193X+0.048, r=0.9937。结 果表明维生素B12对照品溶液在5.
8、00 m g/mL100.00 m g/mL范围内质量浓度与吸收程度 呈良好的线性关系。见图 1。2.4 精密度试验精取浓度为100 M g/mL的对照品溶液在361 nm连续测定5次，测得维生素B12的 平均吸光度为2.087, RSD为0.7% （n=5）。RSD数值较小，说明该方法精密度好。2.5 稳定性试验取同一供试品溶液，在冰箱中冷藏2 h、4 h、8 h、12 h、24 h后，按2.7项下含 量测定法测定，结果见表2,计算得平均吸光度为0.468, RSD为0.99% （n=5）。结果表明 供试品溶液在冷藏温度下 24 h 内基本稳定。表 2 供试品溶液冷藏温度下 24 h 内测定
9、值（略）2.6 重复性试验 精取同一批号样品，分别按2.2.2项的方法制备一式5份的供试品溶液，按2.7项 下含量测定法测定，计算得维生素B12的平均含量为22.6 p g/mL （批号为070303）, RSD 为1.08% （n=5），说明该方法有较好的重复性。2.7 含量测定以水为空白，取2.2.2项下的滤液，摇匀，设定吸收波长为361 nm测定吸光度，按 标准曲线法为计算含量依据。结果见表3。表3维生素B12片剂含量测定结果（略）维生素B12片剂的标示量为25.0 p g,由以上测定结果可知，山西亨瑞达制药有限公 司生产的维生素B12片剂含量均在标示范围90.0%110.0%之内。RS
10、D较小，说明该厂生产 的药品含量稳定。3 讨论3.1. 维生素 B12 主要来源是动物性食物，存在于动物肝脏、牛肉、猪肉、蛋、牛奶和 奶酪中。在吸收时需与钙结合才能有利于人体的机能活动。维生素B12能促进红血球的形成 和再生，防止贫血；促进儿童发育，增进食欲；增强体力；维持神经系统的正常功能；促使 注意力集中，增强记忆力与平衡感。能使脂肪、碳水化合物、蛋白质适宜地为体内所利用。 维生素B12为细胞分裂和维持神经组织髓鞘完整所必须4。主要用于治疗恶性贫血，与 叶酸合用治疗因抗叶酸药、脂肪泻等引起的巨幼红细胞性贫血。也用于多发性神经炎、肝炎、 肝硬化、白细胞减少症等的辅助治疗，目前疗效有争议5。口
11、服维生素B12仅用于已证 实维生素B12吸收正常的营养性维生素B12缺乏】6。3.2本实验采取紫外可见分光光度法考察了片剂维生素B12的含量，将对照品按不同 比例用水稀释，在361 nm波长处进行紫外可见吸收测定，得到标准曲线。将维生素B12片 剂研磨，精密称定并加水溶解，利用微孔滤膜过滤得到滤液，作为供试品溶液。利用该方法 得到的样品溶液，按中国药典规定波长361nm测定吸光度，以标准曲线法为测定含量依据， 结果表明，经紫外可见吸收测定，所测片剂含量均在标示范围之内。3.3本实验需避光操作。维生素B12片剂为糖衣片，呈水溶性，除去糖衣时要刮净， 研细，减小干扰，使溶解度增高。3.4 因紫外可
12、见分光光度法所需样品量少，本实验采用注射器过滤器进行过滤，得到 供试品溶液。3.5本方法简便、准确、灵敏度高，可作为测定维生素B12片剂含量的方法。【参考文献】1 李发美分析化学M 第5版北京：人民卫生出版社，2003, 6： 210.2 中国药典2005年版S.二部.北京：化学工业出版社，2005： 668669.3 李发美分析化学实验指导M 北京：人民卫生出版社，2004： 9899.4 杨宝峰，苏定冯药理学M.第6版北京：人民卫生出版社，2003，7： 303304.5 徐叔云中华临床药物学M 下册人民卫生出版社，2003, 5： 1 141.6 陆晓和实用临床用药监护M 北京：人民卫生出版社，2003，10： 384.
紫外可见分光光度法测定维生素B12含量
