杂质检查方法的方法学验证各项指标分析

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1、杂质检查方法的方法学验证各项指标分析学号： 姓名：王芳药物分析中药品检验基本程序包括：鉴别、检查、含量测定、写实验报告等步骤。检查项下包括反映药品安全性有效性的试验方法和限度、均一性、纯度等制备工艺要 求等内容。药物的杂质是指药物中存在的无治疗作用或者影响药物的稳定性、疗效,甚至对 人体的健康有害的物质。杂质的来源可由生产和贮藏过程中引入：生产过程中主要是由 于所用原料不纯或者原料反应过程中反应未完全，以及反应的中间产物、反应的副产物等 造成药品原料中杂质的存在；或者是由原料生产过程中反应的溶媒、催化剂等溶剂的残留 所造成的药物的杂质。贮藏过程引入主要是受温度、湿度、日光、空气等外界条件的 影

2、响或者受微生物的作用产生的杂质。在药物的研究、生产、贮存和临床应用等方面,必 须保持药物的纯度,降低药物的杂质,这样才能保证药物的有效性和安全性。原料药和制剂主要是对药物中的微量杂质进行纯度检查，以判断药物纯度是否符合杂 质限量的规定要求，而生物制品的杂质检查除包括一般杂质检查，特殊杂质检查外还应对 其进行安全性检查。杂质定量、定性检查方法主要是根据药物和特殊杂质在理化性质上的 差异来进行的，可以采用容量分析法，光谱法分析法，色谱分析法等，各种检测方法所需 的方法学验证的指标包括准确度，精密度，专属性，线性，范围，检测线、定量线，耐用 性八项指标，但采用不同方法所需的指标不尽相同，杂质限量检查

3、一般需要验证专属性， 检测线，耐用性。而杂质定量分析方法除检测限外其它指标一般都需验证4。不同实验应该根据不同实验目的对对各项指标进行验证，下面就杂质种类及近年来检 测杂质最常用的检测方法进行分析：1、 特殊杂质特殊杂质是指在药物制备和贮存过程中 , 由于药物性质不稳定而产生的降解产物 , 或合成过程中产生的副产物等,多指有机杂质,也包括残留溶剂和手性化合物中无特殊毒 性的对映体。HPLC法测定萘普生缓释片有关物质的含量：该缓释片主药是荼普生，特殊杂质为(6 甲氧基一2 荼乙酮)，方法采用高效液相色谱法(HPLC)法；色谱柱：以十八烷基硅烷键 合硅胶为填充剂；以/L的磷酸二氢钾一甲醇-乙腈(4

4、0: 25: 35)磷酸调节PH至为流动相；检测波长为240nm;流速：/min;进样量：10ul .1.1.1系统适应性：首先针对高效液相色谱法应进行系统适应性指标（理论塔板数、 分离度、重复性、拖尾因子）验证，该实验得出萘普生主峰与已知杂质峰（6-甲氧基-2- 萘乙酮）分离良好，萘普生主峰理论半数大于5000，符合规定。1.1.2精密度考察:精密度考察主要有三个层次包括日内精密度，日间精密度以及重 现性考察，一般受条件限制只进行前两者的指标验证。本实验针对色谱条件对样品对照品 及杂质对照品进行检测是对日内精密度的一个考察，也可以看成是对高效液相法色谱条件 系统适应性实验的一个指标验证。取萘

5、普生对照品和已知杂质对照品适量，加流动相溶解并稀释制成每1ml约含萘普 生 和已知杂质口g的混合对照品，取上述混合对照品溶液10口1,注入液相色谱仪，连 续进样6次，记录色谱图，结果萘普生与已知杂质主峰面积的RSD分别为%和,说明该 色谱条件精密度良好。1.1.3重复性考察:如上同样是对日内精密度进行指标验证，但是此处重复性考察是 对包括已知杂质在内的所有杂质以及主药进行的一个方法学指标验证。取地奥集团成都制药有限公司的萘普生缓释片细粉（约相当于含萘普生25mg） 6份 及已知杂质对照品适量，配制供试品溶液和对照溶液，精密量取供试品溶液和对照溶液各 101，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，已知

6、杂质按杂质对照品法计算含量，其他杂质 以萘普生主成分自身对照法计算含量，由试验结果表明，6 份供试品溶液中总杂质的平均 值为%，RSD为,最大杂质的平均值为%，RSD为,同时未检出已知杂质，说明拟定的色 谱条件重复性好。1.1.4专属性实验：专属性试验主要是验证空白液与供试品有无杂峰，及出峰时间， 得分离度是否符合要求；供试品与杂质对照品出峰时间，计算分离度是否符合要求；已知 杂质与其他杂质出峰时间及分离度是否符合要求。辅料干扰试验：取供试品溶液和空白辅料溶液各10口1,分别注入液相色谱仪， 试验结果显示辅料不干扰样的有关物质检查。破坏性试验:分别用酸、碱、氧化、高温、 光照条件对供试品进行破

7、坏性试验。由试验结果得，供试品经破坏后，主峰与各杂质峰之 间， 已知杂质与其他杂质峰之间分离度均大于，说明该方法专属性较好。专属性试验主亜阜1.1.5检测限实验：检测限是定性分析指标，无限稀释对照品，直至信噪比S/N=3时 的最低浓度或量，主要用来验证该方法的灵敏度。该实验分别对萘普生对照品及已知杂质 对照品进行方法指标验证取萘普生对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml含0. 0103 口 g的 溶液，作为萘普生检测限溶液。取已知杂质（6-甲氧基-2 -萘乙酮）对照品适量，配置口 g/mL的溶液，作为已知杂质（6-甲氧基-萘乙酮）检测限溶液，精密量上述两溶液各10 口1,分别注入

8、液相色谱仪，得两者检测限和。1.1.6溶液稳定性考察:耐用性考察是指在测定条件有小的变动时，测定结果不受影 响的承受程度，一般包括对溶液的稳定性，样品提取时间、次数以及仪器型号和条件（流 动相组成，比例，柱温，流速等）的改变进行考察，该实验是对溶液的稳定性来实现：取同批号的萘普生缓释片细粉（ 约相当于含萘普生 25mg） 及已知杂质对照品适量， 精密称定，配制供试品溶液和对照溶液，精密量取供试品溶液和对照溶液各10口1,在 0、2、4、8小时，分别注入液相色谱仪，记录色谱图，结果供试品溶液放置8h，其 最大杂质含量的 RSD 为%，总杂质含量的 RSD 为%，同时未检出已知杂质，表明供试品溶

9、液在8小时内基本稳定。药典对萘普生样品对照品及已知杂质对照品的含量测定方法均有记载，然而该实验无 需载进行线性和范围及定量限的方法学验证。但是该实验未对准确度考察是方法学指标验 证的不完整性。苯磺酸左旋氨氯地平片中右旋杂质的检查:该实验验证专属性，标准曲线、范围、检测限及定量限，稳定性实验（耐用性），精 密度与重复性实验，回收率实验八项指标，虽然在未在指标验证中做系统适应性实验，但 在讨论中提到最佳检测波长，最佳色谱条件1.2.1专属性试验：分别以空白辅料C :20 口 L，左旋体B: 20 口 L，含1%右旋体A :20 口 L,注入色谱仪，由AB得左旋体保留时间，右旋异构体，两色谱峰的分离

10、度符合要求;表 明在右旋体保留时间处无杂峰，说明对测定无干扰。见图1。图11.2.2标准曲线、范围、定量限、检测线：取6个不同浓度梯度左旋标准品测A值， 以A横坐标，浓度为纵坐标得线性回归，r=，说明线性好。线性与范围相辅相成，以此得 范围。同时在此条件下S/N=3时检测线为5ng，S/N=10时检测线为15ng。.3稳定性实验：由于操作从溶液配置到检测需要较长时间，且药物中含其他杂质，药 物也可能随时间降解，因而需进行稳定性验证。对配置好标准混合液，在8小时内每2小 时测定一次，得右旋RSD=%，左旋RSD=%1.2.4 精密度、重复性：高效液相法测定左旋、右旋结构需要对其精密度考察。同 样

11、也要对有辅料及杂质存在的片剂粉末进行重复性指标验证。1.2.5 回收率：含量测定回收率实验必不可少，证明该方法的准确度。在粉末中定量 加入右旋杂质3个浓度，分别检测3次，检测平均回收率%。RSD=%。说明该实验准确度好。高效毛细管电泳法用于环丙沙星原料药的杂质限量分析：杂质限量分析指标验证了线 性、范围、检测限、精密度指标，而由分析条件得杂质与环丙沙星的出峰时间无干扰，专 属性强；离子对HPLC法测定盐酸倍他司汀注射中药物与有关物质含量八项指标全都验证； 丙泊酚甲磷酸钠盐的含量测定及其杂质检查:该实验是对药丙泊酚甲磷酸钠的丙泊酚杂质 进行检查，采用高效液相法，除准确度其他指标均验证。针对不同实

12、验目的，对药典中已记载的检测方法进行优化时，可以不对八项指标在此 验证:辛伐他汀原料中杂质检查方法探讨，采用自制TLC板与进口板参照美国药典对辛伐他 汀原料药中杂质检查，无需在对方法各项指标一一验证，但是需对最低检测线进行考察以 确定方法的可靠性及可用性。毗呱酸杂质检查方法的研究，该实验主要是对杂质种类的考察，因板吸附剂的活性或 含水量影响分离，杂质的Rf值决定分离度，最小检测线决定杂质能被检出的最小量，不需 要对杂质定量测定，所以只需对其进行耐用性，最小检测线，分离度进行验证。单硝酸异山梨酯缓释胶囊（W）中异山梨醇的薄层色谱杂质检查:该实验目的是对胶囊 中异山梨醇的杂质限量，供试品中的杂质斑

13、点颜色不得深于杂质对照品主斑点。杂质斑点 与其他斑点不重合，无拖尾，专属性强；能定性检测的最低检测限指标需验证，通过对照品进行多次考察，确定可检查的检测限浓度；重复多次试验验证方法重现性好。对于杂质检查方法的选择比较中对八项指标得验证要求也较为严格：甲芬那酸中2, 3 -二甲基苯胺杂质限量控制方法的研究，比较了比色法、薄层色谱法、高效液相色谱法测定 甲芬那酸中2, 3 -二甲基苯胺杂质的方法各项指标，主要包括更换仪器的耐用性，回收率 测定的准确度试验，精密度实验，最低检测性，专属性试验等，线性、范围的比较意义不 大因而无需进一步验证物理法检查是利用药物与杂质性状上的差异，一般采用的方法是建立在

14、专属性之上， 无需专属性试验。如蒲黄杂质检查方法的研究采用显微镜法检查蒲黄中杂质量，仅需记录 显微视野中杂质的个数,不存在含量测定中的线性等指标2.一般杂质检查一般杂质自然界中分布广泛，在多种药物的生产贮藏过程中易引入，中国药典附录 中规定氯化物、硫酸盐、硫化物、重金属盐、酸碱度、澄清度、有机残留等项目的检查方 法16。一般杂质考察的方法大多参考中国药典的记载，方法学指标验证一般较少,很多都 不进行指标验证17-参考文献：1许润娟.药物的杂质及杂质检查J.中医药学刊，2005, 23 (7)： 1323-13252宋丽，臧志和,廖洪利，谢静，曹丽萍,王静.药物中有关物质检查方法研究进展J.西

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