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1、ABO血型、 Rh（ D）抗原鉴定 遵医附院输血科 陈月宽 13984268228 8608288 ABO血型正、反定型 目的：用于 ABO血型鉴定，确保鉴定结果正确 适用范围：受血者、献血者 ABO血型鉴定 使用器材和材料：离心机、标准血清、标准红 细胞、吸管、玻片等 方法：正定型和反定型 原理 ：正定型是检测红细胞表面的抗原，用标 准抗 A和抗 B分型血清测定红细胞上有无相应 的 A抗原或（和） B抗原；反定型是检测血清 （浆）中的抗体，用标准 A型细胞和 B型细胞 测定血清中有无相应的抗 A和（或）抗 B抗体。 Rh(D)血型定型 目的：鉴定红细胞表面是否含有 D抗原。 适用范围：受血者
2、、献血者 Rh(D)血型鉴定 使用器材和材料： Rh抗 (-D)标准血清、吸管、玻片等 方法：玻片法 原理 ：根据抗 D抗体与对应红细胞抗原的凝集 反应，区分 Rh(D)阳性和 Rh(D)阴性。 ABO正定型及 Rh（ D）定型操作程序（玻片法） 取玻片 1张，用红笔将其划分为左、中、右三段，首先左端 加入 A型（抗 -B）血清 1滴，中端加入 B型（抗 -A)血清 1滴，右端 加入抗（ -D）血清 1滴，然后在左、中、右三段同时加入受检者 3 5%红细胞悬液 1滴，并分别混匀，放置一段时间后观察结果。 注 :红细胞悬液的制备 : 悬液浓度 (%) 压积红细胞 (d) 盐水 (d) 2 1 2
3、.0ml(40) 5 1 0.8ml(16) 10 1 0.4ml(8) 20 1 0.2ml(4) A型标准血清 （抗 -B） B型标准血清 （抗 -A） 左、中端红细胞凝 集说明此红细胞上 含有 A、 B两种抗原， 此血型为 AB型 抗（ -D）血清与红 细胞发生凝集， Rh （ D）阳性，反之 阴性。 抗（ -D）标准血清 受检者 3 5%红细胞悬液 左端 中端 右端 抗 (-A)、抗 (-B)、抗 (-D)标准血清与红细胞 悬液分别混匀放置一段时间后，标准血清 与红细胞表面是否含有相应的抗原而产生 不同的凝集现象，将 ABO血型分为四种 （即 A、 B、 O、 AB型）， Rh(D)血
4、型分为 阳性、阴性二种。 血型凝集示意图 抗 - B 抗 -A 抗（ -D） 血型： AB型 Rh(D)：阳性 抗 - B 抗 -A 抗（ -D） 血型： B型 Rh(D)： 阴性 抗 - B 抗 - B 抗 -A 抗 -A 抗（ -D） 抗（ -D） 血型： A型 Rh(D)：阳性 血型： O型 Rh(D)：阳性 反定法（试管法） 取小试管 2支，分别标明 A、 B，并同时加入受 检者血清各 2滴，在 A管加入 3% 5%A型红细 胞悬液 1滴； B管加入 3% 5%B红细胞悬液 1滴， 混匀， 1000r/min离心 1min或 3000r/min，离心 15秒，取出观察凝集情况。 Ac
5、Bc 首先在 A、 B管中加入受检者血清各 2滴 加入 Ac1滴 加入 Bc1滴 混匀后 离心观 察结果 离心机 反定型 （试管法） Ac Bc 无凝集 凝集 血型： A型 ABO正反定型结果判断 受检者红细胞与标 准血清（正定型） 受检者血清（浆） 与标准红细胞（反 定型） 受检者血型 抗 -A 抗 -B Ac Bc + - - + A - + + - B - - + + O + + - - AB 交叉配血试验 盐水配血法 目的 ：检测献血者与受血者之间血液是否相配，确 保输血安全。 适用范围：适用于 血清完全抗体（ IgM)的检测。 使用仪器和材料：离心机、试管、试管架、生理盐 水、显微镜
6、等。 原理 ：在电解质（生理盐水）溶液中，带正 电荷的 Na 能降低红细胞表面的负电荷，减 少了红细胞的排斥力而发生抗原抗体结合 使红细胞凝集，从而发现配血不合。 聚凝胺配血法 目的：与盐水法相同 适用范围：适用于 血清中不完全抗体 (IgG) 的检测 仪器与材料：离心机、试管、试管架、聚凝 胺试剂、吸管等。 原理 ：聚凝胺是一种高价阳离子聚合物，溶解后能 产生很多正电荷，能中和红细胞表面带有的负电 荷，降低红细胞 Zeta电位，并缩短红细胞之间的 距离，使红细胞产生非特异性凝集，这种凝集是 可逆的。最后加入悬浮液，它具有中和凝聚胺阳 离子的作用，使正常的红细胞非特异性凝集散开， 试验结果阴性
7、；如果红细胞被相应的抗体致敏， 则会被凝聚胺凝结，凝集不会散开，试验结果为 阳性。 盐水法操作程序 ： 1、 取小试管 2支，标明主、次侧。主侧：受血者血清 2滴 加供血者 3 5%生理盐水红细胞悬液 1滴；次侧：供血 者血清 2滴加受血者 3 5%生理盐水红细胞悬液 1滴。 2、混匀，以 1000r/min，离心 1min，取出，先目测上层液 体是否溶血，再轻轻摇动试管，检查红细胞是否凝集。 3、结果判断 ： 主、次两侧无凝集、无溶血，表示配血相 合，可以输血；主、次侧有一侧凝集或溶血，表示配血 不相合，不能输血。 缺点： 1、只能检测出完全抗体（抗 -A、抗 -B）引起的血 型不合，对免疫
8、性抗体引起的血型不合不能检出， 有输血史或不明输血史及妊娠史不能用该法。 2、本实验中的生理盐水对血清（浆）中的抗体有 稀释作用，易导致配血结果假阴性。 3、易受冷凝集素的干扰。 聚凝胺配血法 1、 在盐水配血法操作完后，主、次侧加入低离子强度 溶液（ LISS） 0.6ml，混匀，置室温 1min。 2、主、次两侧加聚凝胺 2d，混匀，置室温 15s， 3400r/min，离心 10s，弃上清液后留 0.1ml液体 ,轻摇 试管 ,目测红细胞是否凝集，如不凝集必须重做。如 果凝集，再加重悬液 2滴，轻摇试管，仔细观察有无 凝集，如有怀疑应在显微镜下观察结果。 结果判断：与盐水法相同。 注意事
9、项： 1、用 EDTA抗凝血浆代替血清配血，但不能用肝 素抗凝血配血，因为肝素对聚凝胺有中和作用。 2、病人使用肝素后要加双倍量聚凝胺。 3、聚凝胺试剂使用前应恢复至室温。 4、和试剂比例要恰当，增加血清（浆）和红细胞 量时， LISS及聚凝胺、重悬液的量也要增加，否 则，灵敏度会降低 4 8倍。 5、病人使用止血敏药物后干扰聚凝胺配血，该干 扰是不能排出的。克服办法：不用酚磺乙胺后， 重抽血液再配。 6、血清蛋白、高球蛋白血症可降低聚凝胺的灵敏 度引起凝集不稳定。 7、聚凝胺配血最适温度 22 ,温度降低灵敏度下降。 盐水配血法： 主 侧 次侧 主侧加患者血清 2 滴、次侧加供血者 血清 2
10、滴 主侧 次侧 主侧加供者红细胞 1滴、次侧加患者 红细胞 1滴，再各 加生理盐水 1滴。 混匀离心 后观察结 果 主 侧 次 侧 溶血 无凝集 患者血清 供者血清 患者红细胞 供者红细胞 配血不合 凝集 聚凝胺配血法操作示意图 : 主 侧 次侧 主侧加患 者血清 2 滴、次侧 加供血者 血清 2滴 主 侧 次 侧 主侧加供 者红细胞 1滴、次 侧加受血 者红细胞 1滴 主 侧 次 侧 第一步 第二步 第三步 两侧同时 加入低离 子悬液 0.6ml，再 加入聚凝 胺各 2滴。 第四步 主 侧 次 侧 第五步 混匀， 3400r/ min， 离心 10S。 倒掉上清 液，两侧 各加重悬 液 2滴， 轻摇试管， 观察结果。 无 凝 集 红 细 胞 均 匀 散 开 凝 集 红 细 胞 凝 集 成 团
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