oAAAm地下管线电子标识系统设计施工

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1、Communications3 3MM 地下燃气管线地下燃气管线电子信息标识系统电子信息标识系统(EMS)EMS)电子标识系统设计施工说明电子标识系统设计施工说明实现实现地下燃气管线地下燃气管线设施设施 精确定位及信息识别管理精确定位及信息识别管理Communications每年为全球近每年为全球近1010万公里的地下管线设施万公里的地下管线设施提供提供EMSEMS电子标识定位及信息管理系统电子标识定位及信息管理系统Communications降低开挖事故率降低开挖事故率提高燃气管道抢险施工效率提高燃气管道抢险施工效率有效保护地下燃气管线设施有效保护地下燃气管线设施降低燃气管线设施运维成本降低

2、燃气管线设施运维成本提高施工安全性提高施工安全性我们提供：我们提供：地下燃气管线设施安全管理方案地下燃气管线设施安全管理方案CommunicationsT形连接形连接管线交越管线交越道路交越道路交越铁路交越铁路交越接头接头深度变化深度变化转弯弧形路径，每转弯弧形路径，每间隔一米埋设一个间隔一米埋设一个护管两端护管两端管道封头管道封头路径标识器建议靠近地面明显标记物如路路径标识器建议靠近地面明显标记物如路灯、树木等，并在直线可视范围之内。灯、树木等，并在直线可视范围之内。建建议最远间距不大于议最远间距不大于50米米河流交越河流交越3 3MM 地下管线电子标识系统设计原则地下管线电子标识系统设计原

3、则Communications非金属燃气管线必须使用电子标识器。非金属燃气管线必须使用电子标识器。地下直线燃气管线标识器间距最大不超过地下直线燃气管线标识器间距最大不超过50米。米。地下燃气管线事件点必须使用地下燃气管线事件点必须使用电子信息标识器电子信息标识器，用于标识相，用于标识相对应的地下设施：对应的地下设施：所有非人井内的转弯处起始至终止位置；所有非人井内的转弯处起始至终止位置；所有与其他地下设施的交越处；所有与其他地下设施的交越处；燃气管道横过道路、河流、建筑物等公共设施两端，可以是燃气燃气管道横过道路、河流、建筑物等公共设施两端，可以是燃气管道保护管道的两端；管道保护管道的两端；管

4、线的深度变化幅度大于管线的深度变化幅度大于0.5米时，位置最高和最低处；米时，位置最高和最低处；非开挖技术敷设的地下管线的两端；非开挖技术敷设的地下管线的两端；各类地下阀门；各类地下阀门；地面以下不可见的人井盖；地面以下不可见的人井盖；预埋预放的燃气管道端头；预埋预放的燃气管道端头；3 3MM 地下管线电子标识系统设计原则地下管线电子标识系统设计原则Communications维修过的地下燃气或接头必须在覆土前安装电子信息标识维修过的地下燃气或接头必须在覆土前安装电子信息标识,记记录维修信息。录维修信息。其他市政管线开挖工程，如遇燃气管线，必须安装电子标识。其他市政管线开挖工程，如遇燃气管线，

5、必须安装电子标识。设计图纸应标注应该安装电子标识器的位置并给信息标识器预设计图纸应标注应该安装电子标识器的位置并给信息标识器预留条形码标签粘贴位置。留条形码标签粘贴位置。相应人员应根据安装电子信息标识的地下燃气管线位置建立对相应人员应根据安装电子信息标识的地下燃气管线位置建立对应的后台管理信息库。应的后台管理信息库。3 3MM 地下管线电子标识系统设计原则地下管线电子标识系统设计原则IDM电子标识器标注图示符号举例：电子标识器标注图示符号举例：普通电子标识器普通电子标识器电子信息标识器电子信息标识器Communications设计图纸标注电子标识器设计图纸标注电子标识器施工图预留电子标识器标签

6、位置施工图预留电子标识器标签位置设计图纸实例设计图纸实例（一）（一）Communications设计图纸实例（二）设计图纸实例（二）对设计图上已对设计图上已经完成安装的经完成安装的电子标识器进电子标识器进行标记，以防行标记，以防止遗漏止遗漏Communications阀门阀门V鞍式接头鞍式接头SJ法兰阀门法兰阀门FV伸缩接头伸缩接头EJ大小头大小头RED牺牲阳极牺牲阳极SA水井水井SY阴阳站阴阳站CS假水井假水井DSY内外螺丝内外螺丝BUS2加仑水井加仑水井2-GSY十字管十字管C弯管弯管B盲板盲板MBS型弯管型弯管SB法兰接头法兰接头F弯头弯头E绝缘接头绝缘接头JJ眼眼H绝缘法兰绝缘法兰JF

7、立管立管R刚塑过渡接头刚塑过渡接头PES法兰立管法兰立管FR刚塑法兰刚塑法兰PESFY字管字管Y调压室调压室G三通三通T直供调压室直供调压室ZG夹子三通夹子三通ST球墨铸铁球墨铸铁Q+口径口径管盖管盖CAP凤凰工艺凤凰工艺F+口径口径管塞管塞P塑料排管塑料排管PE+口径口径套筒套筒CR内穿塑料管内穿塑料管PEN+口径口径夹子套筒夹子套筒SCR塑料挤压式穿管塑料挤压式穿管PEJ+口径口径接头短管接头短管CP高频直缝钢管高频直缝钢管GP+口径口径管线设施信息代码举例管线设施信息代码举例Communications应用应用缩写缩写备注备注应用应用缩写缩写备注备注直埋直埋ZM弯头弯头WT交叉交叉X东分

8、支箱东分支箱DX户内接头户内接头1779南分支箱南分支箱NX户外接头户外接头1776西分支箱西分支箱XX中间接头中间接头1076北分支箱北分支箱BX1 1号中间接头号中间接头1076-1常用常用CY2 2号中间接头号中间接头1076-2备用备用BY联纸头联纸头1325电业站电业站DY水泥管水泥管CP150150为直径电站电站DZ铁管铁管WP150150为直径站用电站用电ZY无缝钢管无缝钢管IP150150为直径低压低压DV工房工房GF高压高压GV箱变箱变XB电压等级电压等级.40.4KV=380V管线设施信息代码举例管线设施信息代码举例Communications标识器标签条形码：000012

9、345标签描述说明CompanyGHRQ港华燃气港华燃气AppT三通三通DepthDepth1 11 1米相对深度米相对深度UtlXingUtlXingWaterWater与水管交越与水管交越PSI11公斤压力公斤压力信息模板举例信息模板举例也可在标识器内只记录被标识物在整体系统或也可在标识器内只记录被标识物在整体系统或GIS系统数据库中的系统数据库中的识别代码，如：识别代码，如：标识器标签条形码：标识器标签条形码：000054321标签标签描述描述说明说明CompanyGHRQ港华燃气港华燃气Record#32576第第32576号记录号记录Communications信息模板下载至定位仪信

10、息模板下载至定位仪计算机连接计算机连接全中文软件界面全中文软件界面Communications标识器标识牌标识器标识牌标识器识别标签标识器识别标签（用户自制）（用户自制）告知属性并保护标识告知属性并保护标识器不受无意破坏损毁器不受无意破坏损毁Communications管线开挖管线开挖管线敷设管线敷设编辑信息并写入标识器编辑信息并写入标识器标识器安装放置标识器安装放置记录标识器编码、地形描述及深度记录标识器编码、地形描述及深度人工回填探测验收探测验收3 3MM 电子标识系统施工步骤电子标识系统施工步骤按设计选择标识器按设计选择标识器机械回填信息整理归档信息整理归档Communications3

11、 3MM 施工步骤标识器信息输入施工步骤标识器信息输入按设计图纸，在办公室预先写按设计图纸，在办公室预先写入标识器信息，并在标识器外入标识器信息，并在标识器外作明显区分标记作明显区分标记现场编辑并写入标识器信息现场编辑并写入标识器信息或或Communications只记录信息标识器的只记录信息标识器的ID代码，并描述其属性代码，并描述其属性3 3MM 施工步骤标识器信息输入施工步骤标识器信息输入不对标识器写信息，简化工作不对标识器写信息，简化工作Communications最大埋深：最大埋深：1.5 m（使用（使用3M探测仪），不建议按最大埋深安装。探测仪），不建议按最大埋深安装。为增加标识器

12、信息读取的可靠性及有效探测区域，建议标识球放置为增加标识器信息读取的可靠性及有效探测区域，建议标识球放置深度为额定深度的一半，约深度为额定深度的一半，约0.8米。米。如果地面在完成后预计会填高，标识器一般埋深如果地面在完成后预计会填高，标识器一般埋深0.5 米（视回填量多米（视回填量多少而定）少而定）如果地面在完成后预计会削低，标识器一般埋深如果地面在完成后预计会削低，标识器一般埋深1.2 米米如考虑标识器在覆土填埋后还要写入信息，则标识球埋深不应超过如考虑标识器在覆土填埋后还要写入信息，则标识球埋深不应超过0.3 米。米。标识器安装于被标识物的正上方，距被标识物至少标识器安装于被标识物的正上

13、方，距被标识物至少10 厘米。厘米。10cm3 3MM 施工步骤安装位置及深度施工步骤安装位置及深度Communications3 3MM 施工步骤标识器固定施工步骤标识器固定电子标识与电子信息标识建议使用扎带或扎线等相同功能的联结工具进行电子标识与电子信息标识建议使用扎带或扎线等相同功能的联结工具进行固定。如果现场条件限制，无法进行联结固定，在确保其位置准确的前提固定。如果现场条件限制，无法进行联结固定，在确保其位置准确的前提下可采用直接敷设或其它方式安装。下可采用直接敷设或其它方式安装。Communications3 3MM 施工步骤标识器固定施工步骤标识器固定香港电力的标香港电力的标识器

14、固定附件识器固定附件上海电力的上海电力的扎带捆扎扎带捆扎随警示带随警示带直接敷设直接敷设Communications将电子标识将电子标识 条形码贴在图纸上条形码贴在图纸上3 3MM 施工步骤现场信息记录施工步骤现场信息记录对比设计图纸，记录标识器序列号对比设计图纸，记录标识器序列号及其他描述信息；及其他描述信息；对于普通标识器，在图纸上标注大对于普通标识器，在图纸上标注大致位置，并记录位置描述信息致位置，并记录位置描述信息Communications施工人员将标识器条形码贴于记录单上施工人员将标识器条形码贴于记录单上3 3MM 施工步骤现场信息记录施工步骤现场信息记录Communication

15、s3 3MM 施工步骤信息记录表施工步骤信息记录表标识序列号标识序列号标识标识 描述描述管径管径维护单位维护单位位置位置备注备注0000091646三通500X200上海市自来水市南有限公司纪鹤路新华路口东0000091660三通500X150上海市自来水市南有限公司纪鹤路2487号人行道旁0000091649三通500X200上海市自来水市南有限公司北马港桥西30米0000091771三通500X100上海市自来水市南有限公司纪鹤路2473号门口西侧0000091642三通500X150上海市自来水市南有限公司实业交通电器东南对面0000091778三通500X200上海市自来水市南有限公司

16、纪鹤路新益路口西8米0000091636三通500X150上海市自来水市南有限公司纪鹤路新苗路口东16米0000091644三通500X150上海市自来水市南有限公司纪鹤路2289号制革厂东15米0000091635三通500X150上海市自来水市南有限公司纪鹤路新府路口东20米纪鹤路2228号对面工作人员对标识器描述信息列表，工作人员对标识器描述信息列表，仅用标识器序列号，仅用标识器序列号，易于信息更新。易于信息更新。Communications3 3MM 施工步骤信息记录表施工步骤信息记录表标识器内数据信息列表，记录管线属性。标识器内数据信息列表，记录管线属性。Communications

17、3 3MM 施工步骤人工回填施工步骤人工回填建议在机械回填之前先人工回填细土至标识器上方建议在机械回填之前先人工回填细土至标识器上方5厘米以厘米以固定标识器，确保其位置在机械回填时不受外力影响而变固定标识器，确保其位置在机械回填时不受外力影响而变动，另外防止受到剧烈外力的挤压和碰撞如石块等。动，另外防止受到剧烈外力的挤压和碰撞如石块等。Communications3 3MM 施工步骤普通标识器安装回填施工步骤普通标识器安装回填普通电子标识器用于直线管普通电子标识器用于直线管线的标记，不需要进行存储线的标记，不需要进行存储信息的验收，其埋设安装也信息的验收，其埋设安装也可在机械回填时进行投入式可

18、在机械回填时进行投入式安装，提高工作效率，降低安装，提高工作效率，降低人员成本。但其位置必须在人员成本。但其位置必须在图纸上标注清楚。图纸上标注清楚。Communications3 3MM 施工步骤探测验收施工步骤探测验收对安装埋设的电子标识对安装埋设的电子标识器进行探测验收。器进行探测验收。普通电子标识器：验证普通电子标识器：验证其可探测性和位置与图其可探测性和位置与图纸标注是否统一。纸标注是否统一。电子信息标识器：除上电子信息标识器：除上述普通电子标识器的验述普通电子标识器的验收外，还要进行数据可收外，还要进行数据可读性验证及准确性比对读性验证及准确性比对，现场读取序列号及存，现场读取序列

19、号及存储信息并确认与安装时储信息并确认与安装时记录信息一致。记录信息一致。Communications接近 锁定 获得存储数据和深度信息电子标识器电子标识器定位定位和读取信息的过程和读取信息的过程3 3MM 施工步骤探测验收施工步骤探测验收Communications3 3MM 施工步骤探测验收施工步骤探测验收Communications3 3MM 信息整理归档信息整理归档将标有电子标识器位置及序列号的竣工图纸整理归档将标有电子标识器位置及序列号的竣工图纸整理归档CommunicationsSerial IDFrequency TypePlacement Date&Time Comments

20、CompanyDescriptionJob NumberPrint-Location000-000-3791TelephoneBall06/26/02 09:44:50 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9156Location:2-2.2 000-000-3811TelephoneBall06/26/02 09:54:11 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9157Location:2-2.2 000-000-3798TelephoneBall06/26/02 10:17:40 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJ

21、ob#:C9158Location:2-2.3000-000-3772TelephoneBall06/26/02 10:27:00 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9159Location:2-2.3000-000-3797TelephoneBall06/26/02 10:48:28 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9160Location:3-3.1 000-000-3814TelephoneBall06/26/02 10:59:24 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9161Location:3-

22、3.3 000-000-4113TelephoneBall06/26/02 11:31:35 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9162Location:4-4.1 000-000-3813TelephoneBall06/26/02 11:45:58 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9163Location:4-4.1 000-000-3769TelephoneBall06/26/02 13:24:51 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9164Location:5-5.2 000-000-3768Te

23、lephoneBall06/26/02 13:36:06 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9165Location:5-5.2 000-000-3816TelephoneBall06/26/02 13:49:55 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9166Location:7-7.2 000-000-3773TelephoneBall06/26/02 14:09:01 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9167Location:7-7.2 000-000-4151TelephoneBall06/26/0

24、2 14:25:17 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9168Location:13-13.2 000-000-3826TelephoneBall06/26/02 14:34:10 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9169Location:13-13.2 000-000-4150TelephoneBall06/26/02 14:47:12 M/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9170Location:17-17.1 000-000-4148TelephoneBall06/26/02 14:49:34 M

25、/D/YCompany:Descrptn:BOREJob#:C9171Location:17-17.1 ID编号频率类型放置日期/时间备注公司描述工作编号位置3 3MM 信息整理归档信息整理归档将所有电子信息标识器数据信息收集整理，并进行相关将所有电子信息标识器数据信息收集整理，并进行相关处理以便于后期的管理及查询。处理以便于后期的管理及查询。Communications电子标识电子标识器定位器定位CAD/GIS 数据库数据库(电子地图电子地图)数据上传到数据上传到GIS系统系统GPS现场现场位置信息位置信息3 3MM GIS应用应用Communications3 3MM GIS应用应用电子标

26、识器与电子标识器与GIS的结合应用是地的结合应用是地下管线管理的革命性飞跃。下管线管理的革命性飞跃。Communications谢谢！谢谢！Communications5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2 mRNA表达的影响Communications5-Aza-CdR对人食管癌细胞株生物学行为及对人食管癌细胞株生物学行为及TFPI-2 mRNA表达的表达的影响影响 作者：杜雅冰，邵应举，樊青霞，孙桢，王琳，赵培荣 作者单位：(郑州大学第一附属医院肿瘤内科，河南郑州450002)【摘要】目的探讨5-氮杂-2-脱氧胞苷(5-Aza-2-deoxycytidine,5-Aza

27、-CdR)干预对食管鳞癌细胞株Eca9706生长增殖及其组织因子途径抑制物2(tissue factor pathway inhibitor-2，TFPI-2)基因表达的影响。方法选取食管鳞癌细胞株Eca9706，并用不同浓度的5-Aza-CdR处理该细胞株。MTT法检测干预前后细胞增长率的变化，FCM法检测干预前后细胞凋亡率的变化，RT-PCR技术检测干预前后Eca9706细胞TFPI-2基因mRNA的表达，免疫组化检测干预前后Eca9706细胞TFPI-2蛋白的表达。结果食管鳞癌细胞株Eca9706存在TFPI-2基因超甲基化状态，经5-Aza-CdR处理后，超甲基化状态解除，细胞增殖受到

28、抑制，细胞凋亡率明显提高(P0.05);细胞中TFPI-2蛋白表达明显增强，同时mRNA的表达水平也较处理前明显提高(P0.05)。结论食管癌细胞系TFPI-2基因超甲基化可抑制其mRNA表达，当其超甲基化解除后，细胞增殖受到抑制，同时细胞凋亡率相应提高。Communications 【关键词】食管癌;组织因子途径抑制物-2;5-氮杂-2-脱氧胞苷;甲基化;免疫组化;逆转录聚合酶链反应;凋亡 ABSTRACT：ObjectiveTo explore the effects of 5-Aza-2-deoxycytidine(5-Aza-CdR)intervention on the growth

29、 and proliferation of Eca9706 cell line and protein expression of tissue factor pathway inhibitor-2(TFPI-2).MethodsEca9706 cell line was treated by 5-azaCdR of different concentrations;MTT，flow cytometry，immunohistochemistry and RT-PCR were used to determine the cell growth，apoptosis，and the express

30、ion of TFPI-2 gene and its protein.ResultsEca9706 cell line had hypermethylation of TFPI-2.After demethylation by 5-Aza-CdR treatment，the proliferation of Eca9706 was inhibited，the apoptosis rate was also increased significantly in the concentration-dependent manner.RT-PCR detected that mRNA express

31、ion of TFPI-2 gene in Eca9706 cell line recovered significantly(P0.05).Conclusion5-Aza-CdR can slow the growth of Eca9706 cell，increase the apoptosis rate，reactivate the TFPI-2 gene transcription and protein expression by demethylation.KEY WORDS：esophageal carcinoma;tissue factor pathway inhibitor-2

32、;5-Aza-CdR;methylation;immunohistochemistry;RT-PCR;apoptosisCommunications 组织因子途径移植物2(tissue factor pathway inhibitor，TFPI-2)是丝氨酸蛋白酶抑制物，在调控肿瘤细胞浸润转移方面起着重要作用。目前，关于TFPI-2在食管癌中的基因表达情况的分析研究尚少。本研究旨在探讨TFPI-2基因的失活机制，并寻找食管癌治疗的新靶点。1材料与方法 1.1材料 RPMI-1640培养基购自北京索莱宝生物科技有限公司;标准胎牛血清购自天津市灏洋生物制品科技有限公司;Trizol试剂购自MBI公

33、司;RT-PCR试剂盒购自MBI公司;5-Aza-CdR购自Sigma公司;人食管癌细胞株Eca9706由郑州大学肿瘤生物学研究室惠赠。1.2细胞培养和药物处理 人食管癌细胞Eca9706以含10 mL/L胎牛血清的RPMI-1640培养基，37、50 mL/L CO2培养箱培养，每23 d消化传代1次。1.3MTT法检测干预前后细胞增长率的变化 取对数生长期细胞，调整密度至5104/mL接种于96孔板，按5-Aza-CdR浓度分为6组：0、0.4、1.6、6.4、25.6、102.4 mol/L，每组复设5个孔。待细胞贴壁后，分别于24、48、72 h后加入MTT液，4 h后弃去上清液，每孔

34、加DMSO 150 L，在490 nm波长测定各孔吸光度值(absorbance，A)。细胞增殖抑制率(cellular proliferation inhibition rate，CPIR)按公式计算：CPIR=(1-实验组A均值/对照组A均值)100%。Communications 1.4流式细胞仪(FCM)检测干预前后细胞凋亡率的变化 取对数生长期细胞，按5105/mL的密度接种于6孔板内，待细胞贴壁后加药，分组如下：对照组(0 mol/L),1.6 mol/L 5-Aza-CdR组，25.6 mol/L 5-Aza-CdR组，102.4 mol/L 5-Aza-CdR组。每组均于5-A

35、za-CdR作用48 h后消化收集细胞，700 mL/L冰乙醇固定，流式细胞仪进行细胞凋亡测定。1.5RT-PCR技术检测TFPI-2基因mRNA的表达 分组同FCM，每组细胞均5-Aza-CdR作用48 h。TFPI-2的上、下游引物分别为5-GTCGATTCTGCTGTTTTCC-3和5-ATGGAATTTTC TTTGGTGCG-3，合成产物为440 bp;-actin作为内参照，上下游引物分别为5-AGGCATTGTGATGGACTCCG-3和5-AGTGATGACCTGGCCGTCAG-3，合成产物为301 bp。按照试剂盒说明书，用Trizol试剂提取细胞总RNA，经紫外分光光度计

36、分析后，按Sigma公司RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit说明书操作。先逆转录制备单链cDNA，再以逆转录产物为模板，用上、下游产物进行PCR反应扩增目的基因。反应条件为：94 预变性3 min，然后94 变性30 s,51 退火30 s,72 延伸30 s，循环30次，最后72 延伸5 min,4 保温。扩增片段经20 g/L琼脂糖凝胶电泳鉴定。Communications 1.6免疫组化方法检测TFPI-2蛋白的表达 取对数生长期细胞，按5104/mL的密度接种于经预处理的盖玻片上，待细胞贴壁后加药(分组同RT-PCR)。培养48 h后加入4

37、0 g/L多聚甲醛溶液固定30 min,30 mL/L H2O2封闭内源性过氧化物酶，室温下10 min,100 mL/L动物血清封闭，室温下10 min，滴加1 100的稀释的TFPI-2抗体4 过夜，二抗室温下1 h，滴加辣根酶标记链霉卵白素，37 孵育30 min，DAB显色，苏木精复染，脱水透明封片。另取爬片滴加PBS 液代替一抗作为阴性对照。结果判定：TFPI-2蛋白阳性信号均呈棕黄色颗粒样物质，位于细胞质内。光镜下随机选取10个视野(每个视野观察细胞数不少于100个)，按阳性细胞所占百分比进行结果判定。阳性率=(阳性细胞数/1 000)100%。1.7统计学处理 应用SPSS16.

38、0软件进行统计学处理。实验数据采用均数标准差(x-s)表示，采用单因素方差分析加LSD两两比较法进行分析。检验水准=0.05。2结果 2.1干预前后细胞增长率的变化 经MTT检测，结果显示，实验组细胞抑制率明显高于未加药组，且随着作用时间的延长和浓度的增加而增加(表1)。表1不同浓度的5-aza-CdR对Eca9706细胞增殖的影响Communications 2.2干预前后细胞凋亡率的变化 流式细胞仪分析可见，经不同浓度5-Aza-CdR诱导48 h后，Eca9706细胞各处理组凋亡率分别为(13.760.47)%、(26.970.39)%、(41.030.19)%，与5-Aza-CdR诱导

39、浓度成正比。与对照组(1.390.27)%比较差异有统计学意义(P0.05)，且各浓度组间比较差异亦有统计学意义(P0.05，图1)。以上实验重复5次。2.3干预前后Eca9706细胞mRNA的表达情况 扩增产物经琼脂糖凝胶电泳显示，Eca9706细胞中TFPI-2 mRNA表达在各用药组和未用药组之间有明显差异，TFPI-2 mRNA在未用药组细胞中未见表达。经1.6、25.6、102.4 mol/L 5-Aza-CdR处理后可见TFPI-2 mRNA表达，表明在一定范围内随5-Aza-CdR药物浓度的增加TFPI-2 mRNA表达逐渐增强(图2)。图1各组流式细胞凋亡散点图A：对照组;B：

40、1.6 mol/L 5-Aza-CdR组;C：25.6 mol/L 5-Aza-CdR组;D：102.4 mol/L 5-Aza-CdR组。图25-Aza-CdR处理前后Eca9706细胞TFPI-2 mRNA的表达M：DNA marker;-actin：301 bp;TFPI-2：440 bp;1：对照组;2：102.4mol/L组;3：25.6 mol/L组;4：1.6 mol/L组;5：H2O对照组。,2.4干预前后TFPI-2蛋白的表达情况免疫组化结果显示，经5-Aza-CdR作用Eca9706细胞48 h，CommunicationsTFPI-2蛋白的阳性表达率增加，对照组、1.6

41、mol/L组、25.6 mol/L组、102.4 mol/L组TFPI-2蛋白的阳性表达率分别为(2.101.42)%、(9.312.70)%、(14.723.50)%、(68.203.20)%，不同浓度组之间以及用药组与对照组之间的差异均有统计学意义(P0.05，图3)。图3各组TFPI-2蛋白的表达情况 3讨论 人TFPI-2(hTFPI-2)基因定位于7q22区域，全长由8164个碱基组成，其cDNA全长为1 222 kb。其mRNA的启动子具有典型的管家基因特征，没有典型的TATA盒或CAAT盒，在推定的转录起始位点区域GC含量超过80%1。TFPI-2可在体内多种组织广泛表达，在这些

42、组织内一旦出现肿瘤，TFPI-2的表达水平也会随之显著下降2。有研究证实，在绒毛膜癌、乳腺癌、前列腺癌、神经胶质细胞瘤、纤维肉瘤和胸部恶性肿瘤组织中，与肿瘤产生相关的TFPI-2表达水平减少可能与其启动子的甲基化密切相关1,3-5。启动子区cpG岛高甲基化在肿瘤形成机制中的确切作用尚不清楚，然而众多证据表明，肿瘤抑癌基因CpG岛异常的甲基化导致基因失活和转录抑制是肿瘤发生的重要机制之一6-8。Communications 目前，有体外实验表明，DNA甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR通过去甲基化作用可使多种含有CpG岛的高甲基化抑癌基因重新表达，从而恢复抑癌功能9。本实验RT-PCR结果显示，

43、TFPI-2在Eca9706细胞中无表达，经过不同浓度的5-Aza-CdR处理Eca9706细胞后，TFPI-2亦重新出现表达，且在一定范围内随药物诱导浓度的增大表达逐渐增强。MIZUNO等10研究表明，肿瘤细胞中DNMT的表达较正常的高412倍，也证实DNMT上调参与肿瘤发生。这与我们的实验结果一致。根据MTT实验可知，经过5-Aza-CdR干预处理过的Eca9706细胞增殖明显受抑制，且随着药物浓度的增加，抑制作用越明显。从本实验结果分析，DNA启动子区去甲基化能较明显地抑制食管癌细胞增殖，并与其诱导剂量呈正相关，推测这种抑制作用与去甲基化后重新激活TFPI-2基因的转录和表达有着直接关系

44、;此外可能与去甲基化后诱导细胞凋亡有关。进而通过流式细胞仪分析，结果显示，经不同浓度5-Aza-CdR干预的Eca9706的细胞中，用药组与对照组相比细胞凋亡率凋亡率有所增加，并且与5-Aza-CdR诱导剂量有依赖性关系。BENDER等11在同等条件下用5-Aza-CdR处理恶性肿瘤细胞系和正常纤维细胞系时，发现肿瘤细胞增殖均被抑制，而纤维细胞增殖不被抑制。因此，5-Aza-CdR对Eca9706细胞增殖的抑制及凋亡的增加不是药物的毒性影响，可能是因为使TFPI-2重新表达的结果。Communications 目前，国外以TFPI-2为药物研究靶点，就TFPI-2在肿瘤治疗、肿瘤临床诊断、促进

45、伤口愈合和动脉粥样硬化治疗等领域中的应用，也正在进行广泛深入的研究。本研究用甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR处理人食管癌Eca9706细胞株，检测TFPI-2基因表达的变化及其对细胞增殖和凋亡的影响，以期寻找治疗肿瘤的新靶点。【参考文献】1HUBE F，REBERDIAU P，IOCHMANN S，et al.Characterization and functional analysis of TFPI-2 gene promoter in a human choriocarcinoma cell line J.Thromb Res，203，109(4)：207-215.2MIYAGIi

46、Y，KOSHIKAWA N，YASUMITSU H，et al.cDNA cloning and mRNA expression of a serine protein 5 and tissue factor pathway inhibitor-2 J.J Biochem，1994，116(5)：939-942.3RAO CN，SEGAWA T，NAVARI JR，et al.Methylation of TFPI-2 gene is not the sole cause of its silencing J.Int J Oncol，2003，22(4)：843-848.4KONDURI SD

47、，SRIVENUGOPAL KS，YANAMANDRA N，et al.Promoter methyl and silencing of the tissue factor pathway inhibitor-2(TFPI-2)，a gene encoding an inhibitor of matrix metalloproteinases in human glioma cells J.Oncogene，2003，22(29)：4509-416.Communications 5STEINER FA，HONG JA，FISCHETTE MR，et al.Sequential5-Aza-2-d

48、eoxycytidi-ne/depsipeptide FK228 treatment induces tissue factor pathway inhibitor 2(TFPI-2)expression in cancer cells J.Oncogene，2005，24(14)：2386-2397.6HERMAN JG，BAYLIN SB.Promoter-region hypermethylation and gene silencing in human cancer J.Curr Top Microbiol Immunol，2000，249：35-54.7JONES PA，BAYLI

49、N SB.The fundamental role of epigenetic events in cancer J.Nat Rev Genet，2002，3(6)：415-428.8EHRLICH M.DNA methylation in cancer：too much，but also too little J.Oncogene，2002，21(35)：5400-5413.9PAZ MF，FRAGA MF，AVILA S，et al.A systematic profile of DNA methylation in human cancer cell lines J.Cancer Res

50、，2003，63(5)：1114-1121.Communications 10MIZUNO S，CHIJIWA T，OKAMURA T，et al.Expression of DNA methyltransferases DNMT1，3A，and 3B in normal hematopoiesis and in acute and chronic myelogenous leukemia J.Blood，2001，97(5)：1172-1179.11BENDER CM，PAO MM，JONES PA.Inhibition of DNA methylation by 5-Aza-2-deoxy

51、cytidine suppresses the growth of human tumor cell lines J.Cancer Res，1998，58(5)：95-101.申明：本论文版权归原刊发杂志社所有，我们转载的目的是用于学术交流与讨论，仅供参考不构成任何学术建议。Communications幻灯片放映结束！谢谢Communications请您提出宝贵意见！再见CommunicationsO(_)O谢谢各位！OKCommunications“做做”论文的智慧和思论文的智慧和思维维广州市第广州市第6565中学中学 王建春王建春20142014年年4 4月月Communications“

52、做做”论文的智慧和思论文的智慧和思维维n为何提为何提“做论文做论文”，而不是，而不是“写论文写论文”？n学术论文的四大属性学术论文的四大属性n如何使论文具有创新性？如何使论文具有创新性？n做论文真的需要智慧和思维？做论文真的需要智慧和思维？n智慧和思维的源泉：阅览文献，做有心人智慧和思维的源泉：阅览文献，做有心人n智慧和思维的张力：逻辑的基本魅力智慧和思维的张力：逻辑的基本魅力n关于提高论文投稿发表率关于提高论文投稿发表率Communications一、为何提一、为何提 “做论文做论文”，而不是，而不是“写论写论文文”？n做论文做论文强调论文产生的过程：选题强调论文产生的过程：选题资料的搜集、

53、资料的搜集、整理整理实证操作实证操作(数据数据)整理整理结论结论形成形成文本的书写与修改。文本的书写与修改。n写论文：侧重文本的书写与修改写论文：侧重文本的书写与修改何者厚重与严肃何者厚重与严肃?何者单薄与应付？何者单薄与应付？一目了然一目了然Communications一、为何提一、为何提 “做论文做论文”，而不是，而不是“写论写论文文”？为写论文而论文：为写论文而论文：感叹：书到用时方很少感叹：书到用时方很少状态：没有头绪，无从下笔状态：没有头绪，无从下笔结果：生的伟大，憋的难受结果：生的伟大，憋的难受 产物：胡乱拼凑，美丽垃圾产物：胡乱拼凑，美丽垃圾 根源：缺乏自己的思想或观点根源：缺乏

54、自己的思想或观点所以，不太喜欢说所以，不太喜欢说“写论文写论文”，喜欢，喜欢听别人说听别人说“做论文做论文”Communications二、学术论文的四大属性二、学术论文的四大属性（一）学术性（一）学术性n首先要明白什么是首先要明白什么是“学术学术”，所谓学术，是指较为专，所谓学术，是指较为专门、系统的学问。所谓学术性，就是指研究、探讨的内门、系统的学问。所谓学术性，就是指研究、探讨的内容具有专门性和系统性，即是以科学领域里某一容具有专门性和系统性，即是以科学领域里某一专业专业性性问题作为研究对象。问题作为研究对象。n从从内容上内容上看，学术论文更是富有明显的专业性。学术看，学术论文更是富有明

55、显的专业性。学术论文是作者运用他们系统的专业知识，去论证或解决专论文是作者运用他们系统的专业知识，去论证或解决专业性很强的学术问题。业性很强的学术问题。n从从语言表达语言表达来看，学术论文是运用来看，学术论文是运用专业术语和专业性专业术语和专业性图表符号图表符号表达内容的，它主要是写给同行看的，所以不表达内容的，它主要是写给同行看的，所以不在乎其他人是否看得懂，而是要把学术问题表达得在乎其他人是否看得懂，而是要把学术问题表达得简洁、简洁、准确、规范准确、规范，因此，专业术语用得很多。，因此，专业术语用得很多。学习一门学科本质上是掌握专业概念、术语和符号学习一门学科本质上是掌握专业概念、术语和符

56、号Communications二、学术论文的四大属性二、学术论文的四大属性（二）科学性：（二）科学性：科学性是学术论文的特点，也是学术论文的生命和价值所科学性是学术论文的特点，也是学术论文的生命和价值所在。开展学术研究，写作学术论文的目的，在于揭示事物在。开展学术研究，写作学术论文的目的，在于揭示事物发展的客观规律，探求客观真理，从而促进科学的繁荣和发展的客观规律，探求客观真理，从而促进科学的繁荣和发展，这就决定了学术论文必须具有科学性。发展，这就决定了学术论文必须具有科学性。所谓科学性，就是指研究、探讨的内容准确、思维严密、所谓科学性，就是指研究、探讨的内容准确、思维严密、推理合乎逻辑。推理

57、合乎逻辑。Communications二、学术论文的四大属性二、学术论文的四大属性（三）创新性（三）创新性创新性被视为学术论文的特点之一，这是由科创新性被视为学术论文的特点之一，这是由科学发展的需要决定的。学发展的需要决定的。科学研究是对新知识的探求。如果科学研究只科学研究是对新知识的探求。如果科学研究只作继承，没有创造，那么人类文明就不会前进。人作继承，没有创造，那么人类文明就不会前进。人类的历史就是不断发现、不断发明也就是不断创新类的历史就是不断发现、不断发明也就是不断创新的历史。的历史。n一个民族如果没有创新精神，这个民族就要衰亡。一个民族如果没有创新精神，这个民族就要衰亡。n同样，同样

58、，一篇论文如果没有创新之处，它就毫无价一篇论文如果没有创新之处，它就毫无价值。值。Communications二、学术论文的四大属性二、学术论文的四大属性（四）理论性（四）理论性学术论文与科普读物、实践报告、科技情报之间学术论文与科普读物、实践报告、科技情报之间最大的区别就是具有理论性的特征。最大的区别就是具有理论性的特征。所谓理论性就是指论文作者所谓理论性就是指论文作者思维的理论性、论文思维的理论性、论文结论的理论性和论文表达的论证性。结论的理论性和论文表达的论证性。Communications三、如何使论文具有创新性？三、如何使论文具有创新性？论文最基本的要求是新颖，具有独创性论文最基本的

59、要求是新颖，具有独创性，所以一，所以一篇学术论文的内容绝不应是空泛的、陈旧的、拾篇学术论文的内容绝不应是空泛的、陈旧的、拾人牙慧的。人牙慧的。一篇教育科研论文的赖以生存的属性：一篇教育科研论文的赖以生存的属性：创新性创新性否则，就是美丽的垃圾否则，就是美丽的垃圾Communications三、如何使论文具有创新性？三、如何使论文具有创新性？（一）说人家没说过的（一）说人家没说过的例：例：“根对矿质元素吸收根对矿质元素吸收”教学中对学生逻辑思维的训练教学中对学生逻辑思维的训练（20032003年年1111月月生物学通报生物学通报）高中生物史例教学中对学生科学思维的训练高中生物史例教学中对学生科学

60、思维的训练 （20042004年年6 6月月生物学教学生物学教学）年级委员会制：大规模普通高中学校有效的年级委员会制：大规模普通高中学校有效的“扁平化扁平化”管管理（理（20102010年年7 7月月校长引领与教师专业发展校长引领与教师专业发展）创新相对容易，鬼很好画，人不太好画，但往往写作难度创新相对容易，鬼很好画，人不太好画，但往往写作难度最大，相关文献不多，抄都没得抄最大，相关文献不多，抄都没得抄 Communications三、如何使论文具有创新性？三、如何使论文具有创新性？（二）说人家说的不全、不系统（二）说人家说的不全、不系统 针对针对“盲人摸象盲人摸象”现象，综合客观看待，例：现

61、象，综合客观看待，例：提高生物课堂教学有效性的系统化研究（提高生物课堂教学有效性的系统化研究（20062006年年1010月月广州市中小学、中等职业学校特约教研员广州市中小学、中等职业学校特约教研员论文选编论文选编第八集）第八集）有效教学的理论与实践概略有效教学的理论与实践概略 也比较容易，只要功夫深、铁杵磨成针，功也比较容易，只要功夫深、铁杵磨成针，功到自然成到自然成Communications三、如何使论文具有创新性？三、如何使论文具有创新性？（三）说人家说的不同一方向（三）说人家说的不同一方向例：例：生物实验设计在培养学生科学思维中的作用生物实验设计在培养学生科学思维中的作用（20022

62、002年年6 6月月中学生物学教学中学生物学教学）；）；中学生的生物实验设计能力培养的迫切性；中学生的生物实验设计能力培养的迫切性；培养中学生生物实验设计能力的策略与措施培养中学生生物实验设计能力的策略与措施讲究灵性和运气，机会总是为有准备的人准备的讲究灵性和运气，机会总是为有准备的人准备的Communications三、如何使论文具有创新性？三、如何使论文具有创新性？（四）说人家说得不太对或不准确的（四）说人家说得不太对或不准确的谈高中生物新课程课堂教学生成性的正确把握谈高中生物新课程课堂教学生成性的正确把握（20082008年年4 4月月教育导刊教育导刊）需要相关领域资料的积累，更需要判断

63、的勇气和需要相关领域资料的积累，更需要判断的勇气和敏锐，真理往往在少数人手中敏锐，真理往往在少数人手中Communications三、如何使论文具有创新性？三、如何使论文具有创新性？（五）说人家说过，但随时代变化赋予新价值和新内涵（五）说人家说过，但随时代变化赋予新价值和新内涵例：例：在初中生物教学中运用在初中生物教学中运用“掌握学习教学模式掌握学习教学模式”的新视点的新视点 （20002000年年1 1月月广州市中学生特约教研员论文选编（第广州市中学生特约教研员论文选编（第六集）六集）新课程背景下中学德育的新发展（新课程背景下中学德育的新发展（20092009年年6 6月月中小学中小学德育研

64、究德育研究）需要传承与创新的精神，不太容易说好需要传承与创新的精神，不太容易说好Communications四、做论文真的需要智慧和思维？四、做论文真的需要智慧和思维？那怎么会是需要？那怎么会是需要？那家伙是相当需要！那家伙是相当需要！Communications四、做论文真的需要智慧和思维？四、做论文真的需要智慧和思维？天下文章一大抄，看你会抄不会抄天下文章一大抄，看你会抄不会抄会抄不会抄的根本区别在哪里？会抄不会抄的根本区别在哪里？在于有没有自己的思想和方法在于有没有自己的思想和方法所以，我说所以，我说教育科研的本质是智慧与思维的较量教育科研的本质是智慧与思维的较量Communicatio

65、ns四、做论文真的需要智慧和思维？四、做论文真的需要智慧和思维？所谓做论文，即是做学问。必须：所谓做论文，即是做学问。必须：n基于现实基于现实n兼顾过去兼顾过去n瞄准未来瞄准未来 处理好处理好“来龙来龙”与与“去脉去脉”的关系问题的关系问题Communications四、做论文真的需要智慧和思维？四、做论文真的需要智慧和思维？n不基于现实问题不基于现实问题没有实用价值，面临生存问题没有实用价值，面临生存问题n不兼顾过去不兼顾过去容易贻笑大方，犯低级错误容易贻笑大方，犯低级错误n不瞄准未来不瞄准未来容易成为应时顺景文章，谈不上具有容易成为应时顺景文章，谈不上具有学术的沉淀价值学术的沉淀价值Com

66、munications四、做论文真的需要智慧和思维？四、做论文真的需要智慧和思维？其实，对某一问题的历史、现实和未来的关注其实，对某一问题的历史、现实和未来的关注这哪里仅仅是做学问这哪里仅仅是做学问涉及的是做人的智慧和道理涉及的是做人的智慧和道理所以，我说所以，我说教育科研的本质是智慧与思维的较量教育科研的本质是智慧与思维的较量Communications四、做论文真的需要智慧和思维？四、做论文真的需要智慧和思维？以以有效教学的理论与实践概略有效教学的理论与实践概略为例：为例：处理处理“来龙来龙”与与“去脉去脉”的关系的关系有效教学提出的背景有效教学提出的背景（回顾过去）（回顾过去）有效教学的含义有效教学的含义（兼顾过去、基于现实）（兼顾过去、基于现实）关于有效教学认识上的整体把握关于有效教学认识上的整体把握（兼顾过去、基于现实）（兼顾过去、基于现实）摈弃传统教学的摈弃传统教学的“有效有效”经典陋习经典陋习（兼顾过去、基于现实）（兼顾过去、基于现实）高度警惕高度警惕“美丽错误美丽错误”：新课程理念下的低效、无效教学：新课程理念下的低效、无效教学（基于现实、瞄准未来）（基于现实、瞄准未来