动物细胞培养和核移植技术

《动物细胞培养和核移植技术》由会员分享，可在线阅读，更多相关《动物细胞培养和核移植技术（32页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、 2.2.1 动物细胞培养和核移植技术动物细胞培养和核移植技术河北任丘二中 王小燕 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物细胞工程常用的技术手段有哪些？植物组织培养植物组织培养 植物体细胞杂交植物体细胞杂交原原生生质质体体番茄细胞番茄细胞原生质体融合原生质体融合再生出细胞再生出细胞壁壁杂种细胞杂种细胞脱脱分分化化愈伤组织愈伤组织杂种杂种植株植株再分再分化化马铃薯细胞标志：成功融合人工诱导去去壁壁 动物细胞培养技术动物细胞培养技术问题探讨问题探讨怎样才能获得大量的自体健康皮肤？怎样才能获得大量的自体健康皮肤？动物细胞培养的过程及条件 动物体细胞核移植技术过程学习新课学习新课 从动物机体中取出相关

2、的从动物机体中取出相关的 ，将，将它分散成它分散成 ，然后，放在适宜的培，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞养基中，让这些细胞 。一、动物细胞培养1、概念：动物胚胎或动物胚胎或幼龄动物的组织、器官幼龄动物的组织、器官如：肾、肺等如：肾、肺等细胞生命力旺盛，分裂能力强细胞生命力旺盛，分裂能力强组织组织单个细胞单个细胞生长和增殖生长和增殖原理：细胞增殖2 2、过程、过程幼龄动物幼龄动物剪碎组织剪碎组织取动物器官取动物器官和组织和组织细胞悬液细胞悬液胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理单个细胞单个细胞胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理单个细胞单个细胞细胞贴壁 一、动物细胞培养原代原代细胞培养细胞培养细胞培养细胞培养传代

3、传代u 细胞接触抑制细胞接触抑制 细胞在贴壁生长过程中，随着细胞分裂，数量不断增加，最后形成一个单层，此时细胞间相互接触，细胞分裂和生长停止，数量不再增加。一、动物细胞培养p原代培养原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第原代细胞。一般培养的第1 1代细胞与传代细胞与传1010代以代以内内的细胞称为原代细胞培养。的细胞称为原代细胞培养。p传代培养传代培养：将原代细胞（将原代细胞（10代以后代以后）从培）从培养瓶中取出，配制成细胞悬液，分装到两个养瓶中取出，配制成细胞悬液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代或两个以上的培养瓶中继续培养

4、，称为传代培养。培养。u细胞株：细胞株：原代细胞一般传至原代细胞一般传至1010代左右细胞代左右细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞生长停滞，大部分细胞衰老死亡，少数细胞存活到存活到40504050代代，这种传代细胞为细胞株。，这种传代细胞为细胞株。u细胞系细胞系：细胞株传代至细胞株传代至5050代后代后又出现细胞生又出现细胞生长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改长停滞状态，只有部分细胞由于遗传物质的改变，使其在培养条件下可以变，使其在培养条件下可以无限制传代无限制传代，这种，这种传代细胞为细胞系。传代细胞为细胞系。遗传物质改变遗传物质改变具癌细胞特点具癌细胞特点遗传物质未改变2、过

5、程、过程取取 的组织、器官的组织、器官细胞悬液细胞悬液 酶酶 单个细胞单个细胞加入加入 液液动物胚胎或幼龄动动物胚胎或幼龄动物物胰蛋白胰蛋白 培养培养原代原代培养培养1-10代细胞代细胞4050代细胞代细胞传代传代培养培养胰蛋白酶胰蛋白酶特点特点细胞贴壁细胞贴壁细胞接触抑制细胞接触抑制50代以后失去接触抑制接触抑制动物细胞生长特性部分细胞突变，获得不死性，向癌细胞方向发展，糖蛋白减少。培养器皿3 3、条件：、条件：1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 2、营养、营养3、温度和、温度和PH 4、气体环境：、气体环境：补充合成培养基补充合成培养基中缺乏的物质中缺乏的物质一动物细胞培养（抗生素、抗

6、生素、定期更换培养液）定期更换培养液）36.5+0.5度；PH为7.2-7.4。O2：进行：进行 呼吸呼吸 CO2：维持培养液的：维持培养液的PH值值（95%空气和空气和5%CO2）（葡萄糖葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清动物血清、血浆、血浆）有氧有氧（1 1）蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、）蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。单克隆抗体等。（2 2）自身皮肤细胞）自身皮肤细胞（3 3）检测有毒物质）检测有毒物质（4 4）生理、病理、药理等方面的研究。）生理、病理、药理等方面的研究。4、应用一动物细胞培养 不能，高度分化的植物细胞仍保持着全能

7、性，而不能，高度分化的植物细胞仍保持着全能性，而动物细胞的全能性会随细胞分化程度的提高逐渐受动物细胞的全能性会随细胞分化程度的提高逐渐受到限制，分化潜能逐渐变弱。到限制，分化潜能逐渐变弱。全能性高低：全能性高低：植物细胞植物细胞动物细胞动物细胞能不能用高产奶牛的一个体细胞，培育出一头高产奶牛呢？能不能用高产奶牛的一个体细胞，培育出一头高产奶牛呢？根据动物细胞核仍具有全能性根据动物细胞核仍具有全能性的特点的特点,怎样将动物细胞的全能性怎样将动物细胞的全能性表达表达?利用动物体细胞核移植技术利用动物体细胞核移植技术二、动物细胞核移植技术二、动物细胞核移植技术 将动物的一个细胞的细胞核，移入到一个将

8、动物的一个细胞的细胞核，移入到一个已经已经 中中，使其重组并发育成，使其重组并发育成一个新的胚胎，该胚胎最终发育成完整的一个新的胚胎，该胚胎最终发育成完整的动物动物个体。个体。去掉细胞核的卵母细胞去掉细胞核的卵母细胞克隆动物克隆动物类型类型1.胚胎细胞核移植胚胎细胞核移植2.体细胞核移植体细胞核移植细胞分化程度低，恢复全能性细胞分化程度低，恢复全能性 容易容易 。细胞分化程度高，恢复全能性细胞分化程度高，恢复全能性 困难困难 。容易容易困难困难二、动物细胞核移植技术二、动物细胞核移植技术胚胎移植细胞核移植体细胞核移植的过程体细胞核移植的过程（高产奶牛）（高产奶牛）体细胞体细胞培养培养取出核取出

9、核甲牛甲牛乙牛乙牛M卵卵母细胞母细胞去除核去除核去核卵去核卵母细胞母细胞重组重组卵细胞卵细胞核植入核植入卵裂卵裂早期早期胚胎胚胎代孕母牛丙代孕母牛丙移植移植体细胞群体细胞群克隆牛克隆牛细胞核移植细胞核移植胚胎移植胚胎移植物理或化学方法激活物理或化学方法激活显微操作法无性生殖 克隆动物克隆动物DNA主要来自于供体细胞核，但其主要来自于供体细胞核，但其核外还有少量的核外还有少量的DNA，即线粒体中的，即线粒体中的DNA是来是来自于受体卵母细胞。所以用体细胞核移植方法自于受体卵母细胞。所以用体细胞核移植方法克隆的动物并不是供核动物完全相同的复制。克隆的动物并不是供核动物完全相同的复制。供体细胞（供核

10、）供体细胞（供核）细胞培养细胞培养体细胞细胞核体细胞细胞核卵巢卵母细胞（卵巢卵母细胞（M中期中期：供质）：供质）去核去核无核卵母细胞无核卵母细胞注入注入细胞细胞融合融合重组重组细胞细胞重组胚胎重组胚胎胚胎移植胚胎移植代孕母体代孕母体生出与供体奶牛遗传生出与供体奶牛遗传基本相同的犊牛基本相同的犊牛归纳归纳:1.两阶段：两阶段：核移植核移植和和胚胎移植胚胎移植2.取卵细胞作受体细胞的取卵细胞作受体细胞的原因原因是是:它是最大的细胞它是最大的细胞,易操作易操作,它发育可直接表达性状它发育可直接表达性状3.严格来说新个体有卵母细胞的细胞质所以有严格来说新个体有卵母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状两个亲

11、本的性状卵细胞C母绵羊子宫母绵羊母绵羊乳腺细胞细胞质细胞核细胞核移植胚胎移植早期胚胎多莉羊分娩卵裂融合后的卵细胞妊娠多莉羊的培育过程应用前景应用前景1.1.加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育；加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育；2.2.保护濒危物种；保护濒危物种；3.3.克隆转基因动物，生产医用蛋白；克隆转基因动物，生产医用蛋白；4.4.作为异种移植的供体作为异种移植的供体二、动物细胞核移植技术二、动物细胞核移植技术5.5.人的核移植胚胎干细胞经诱导分化，形成相应人的核移植胚胎干细胞经诱导分化，形成相应的组织、器官后，可用于组织器官的移植。的组织、器官后，可用于组织器官的移植。存在的问

12、题存在的问题1.克隆动物存活率低，遗传缺陷多等；克隆动物存活率低，遗传缺陷多等；2.克隆动物食品的安全性问题。克隆动物食品的安全性问题。二、动物细胞核移植技术二、动物细胞核移植技术细胞的全能性细胞的全能性细胞株、细胞系细胞株、细胞系植物体或组织植物体或组织培养结果培养结果获得细胞获得细胞或细胞分泌蛋白或细胞分泌蛋白快速繁殖、培育快速繁殖、培育无病毒植株等无病毒植株等培养目的培养目的葡萄糖、动物血清葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素蔗糖、植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织

13、培养比较项目比较项目 1 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞（）、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞（）A A细胞系细胞系 B B细胞株细胞株 C C原代细胞原代细胞 D D传代细胞传代细胞 2 2、动物细胞工程技术的基础是、动物细胞工程技术的基础是-（）A.A.动物细胞融合动物细胞融合 B.B.单克隆抗体单克隆抗体 C.C.胚胎移植胚胎移植 D.D.动物细胞培养动物细胞培养AD 3.3.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于-（）A.A.培养基不同；培养基不同；B.B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行；动物细胞培养不需要在无菌条

14、件下进行；C.C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能；D.D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。养成植株。A教学反馈教学反馈4、下列有关动物细胞培养的叙述，不正确的是 A 用于培养的细胞大部取自胚胎 或幼龄动物的组织或器官 B 将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞 C 在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液 D动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞全部衰老死亡D小结动物细胞培养动物体细胞核移植动物胚胎、幼龄动物组织动物胚胎、幼龄动物组织 单个细胞单个细胞 胰蛋白酶胰蛋白酶 原代培养原代培养 传代培养传代培养 细胞贴壁细胞贴壁 细胞接触抑制细胞接触抑制 供体核供体核 受体质受体质 核移植核移植 胚胎移植胚胎移植 克隆动物克隆动物