高效液相色谱仪操作指导书

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1、高效液相色谱仪操作指导书1检测环境1. 1仪器安置房间应清洁无尘，无易燃易爆和腐蚀性气体，室内排风良好。1. 2仪器工作台应平稳，周围无强烈机械振动和电磁干扰，仪器有良好接地。1. 3环境温度为10C30C, 8小时内室温波动不超过土 3C（使用RI 检测器时温度变化不超过土 2C或用恒温水浴控制检测器），相对湿度低于 70 %。2 样品条件2. 1待测样品必须能溶解于水或其它有机溶剂中。2. 2根据试样物理化学特性，应注意试样的保存温度，吸潮挥发及光照等性能, 并米取相应有效措施保存。2. 3对剧毒试样，应专柜保管，防止发生意外事故。2. 4要求定量检测的试样，必须附有法定的检测方法或规程。

2、否则按照科研试 样处理。2. 5定量检测的试样不能少于100毫克的样品量。3 检测项目3. 1检测项目包括定性（对已知物的保留时间）及定量分析两部分。3. 2定量检测按法定检测方法或规程执行，科研试样按用户要求或协商的方法 实施。3. 3有关定量检测的标准物质，一般由用户提供，本测定结果只对样品负责，若 用户要求对产品负责，用户必须提供现场取样的方便。4 样品检测前检查4. 1检查仪器室的环境温度，湿度及电源。检查仪器各部件的运行状态，并记录 于原始记录表中。4. 2检查化学试剂的规格标准，流动相的组成，浓度等是否与分析方法一致。4. 3检查样品在保存时是否有沉淀，蒸发，变色等变质现象，若有应

3、重新提取 原来样品进行测试。5 样品检测5. 1按照法定方法选定色谱柱，流动相及检测器。待仪器稳定后，检查仪器噪 音及基线，待达标后才能开始作样品测试。5. 2检查色谱柱的分离效能，其塔板数及峰对称性应符合分析方法的规定。5. 3严格按照指定的分析方法配制标准溶液及试样浓度，制取标准物质校正曲线 或单点校正系数，其分析误差必须满足方法要求。5. 4若样品溶剂的纯度不能完全满足方法规定时，可以先征得用户同意后作适当 修改，但必须进行空白溶剂测定，并在色谱图上注明溶剂峰，而且不应存在对待 测组分峰的干扰。5. 5标准及样品溶液在注入色谱柱前必须检查其清洁程度，且与流动相混合时不 应出现沉淀，对易挥

4、发及怕光照的样品应采用密闭避光的相应措施。5. 6按照分析方法规定的计算方法，设定数据采集程序，选定峰高或峰面积计算, 按照峰面积，归一化内标，外标采集数据。5. 7严格按照法定计量单位标示分析过程及结果的有关数据。5. 8分析误差必须达到方法的要求。一般要求为定性（保留时间）测量重 复性误差小于或等于1.5 %，定量测量重复性误差小于或等于 3.0 %。6样品测试过程中异常现象处理6. 1原样品或配制的样品溶液发生沉淀，挥发，变质等异常现象时，应重新取 样或重新配制溶液.6. 2分析重复性误差大于规定值时，应检查仪器测定条件。待条件复原后，重新 配制样品，再次进行测定。6. 3在检测过程中发

5、生停电时，应按仪器操作规程依次关机,且原检测结果无效。6. 4检测仪器设备受损坏或发生人身伤亡事故时，应保护现场，及时向技术负责 人报告，待妥善处理后再进行检测。7检测样品后检查7. 1实验室的环境条件波动范围应符合规定，否则检测结果无效。7. 2仪器运行条件应符合测定方法的要求，否则检测结果无效。7. 3样品制备液发生沉淀，挥发或其它异变时，检测结果为无效。&测定结果报告8. 1按照测定方法要求计算结果，定量分析应标出分析重复性误差。8. 2测定数据及计算结果必须经过校核。8. 3原始记录，测定数据及计算结果记录必须整齐清洁，符合规范，且一并送 交中心业务办公室审核。9期间检査为了保证仪器随

6、时处于良好状态，在两次仪器检定之间至少对仪器进行一次 期间检查。期间检查的主要参数包括：(1)流量准确度(2) 基线噪声(3) 基线漂移Waters高效液相色谱仪操作规程1、打开不间断电源市电输入开关，5秒钟后打开电源输出开关，待电源正常后， 按电源主机市电蓄电转换开关3秒，将电源由市电供电转为电源蓄电池供电。2、检查14号瓶，准备好实验所用流动相，并预先用超声脱气至少20分钟， 保证实验过程中各液体足用，如不足请依照实验和仪器要求配制各种流动相，并 用0.45微米相应膜过滤后使用。检查色谱柱看是否符合实验要求，否则，仔细 更换。3、接通仪器电源前应检查仪器开关是否处于正常关机状态，否则应先将

7、开关关 上再接通电源。4、打开液相色谱600泵电源开关，自动进样器电源开关，检查仪器自检情况， 根据实验要求打开486检测器或410示差检测器电源开关并观察其自检情况。5、打开在线脱气机电源开关，600泵抽气转换开关，旋松抽液口旋钮用针管吸 取23管流动相液体，排出管道中的气泡。6、关闭抽气转换开关及抽气旋钮。7、仪器各模块自检通过后，打开计算机，点击开色谱工作站，并登录，根据实 验要求建立仪器方法，设定实验方法，包括柱温、流速、柱最大压力、检测器参 数、温度参数等。8、将处理好的样品注入样品杯，用杯帽或封口膜封好杯口，将样品顺序放入样 品盘中。9、调入编辑好的仪器方法及实验方法，观察联机情况

8、，稳定一小时后开始实验。10、样品全部分析结束后，手动输入清洗程序，洗自动进样器23次。11、实验结束后，根据色谱柱类型用相应的流动相清洗柱30分钟，若使用过缓 冲液，还要用去离子水清洗管道泵头，以防堵塞。12、停泵时，注意流速应逐渐降低，不能从工作状态一下降低为零。13、退出色谱工作站，关闭各模块电源开关，清洁实验工作面。14、关闭仪器总电源开关，不间断电源开关，结束实验，填写仪器使用记录。 注意事项：1使用仪器前必须仔细阅读仪器使用说明书。2. 研究生必须在导师或熟悉仪器使用人员的指导下操作仪器。3. 按仪器使用要求准备测试样品，不得测试不符合要求的样品。4小心操作，防止样品污染和腐蚀仪器

9、。5仪器使用后按操作程序，切断电源，清理擦拭仪器，盖上仪器罩，研究生 使用仪器应由管理人员对仪器进行检查验收。6. 在操作时发生故障应停止使用，并及时通知管理人员。wters 600 型高效能液相色谱仪操作步骤 高效液相色谱仪的主要部件输液泵、进样阀、检测器和色谱处理机在电路上相互独立，各个部件的启动的 先后顺序并无特别要求，各个部件的操作如下：准备：溶剂脱气A:输液泵：1、启动通电前，进入direct，设置流动相流速，设置流动相组成。每次设置后按enter.此时泵开始工作，可以听到泵 工作的声音。2、暂停和关闭在工作当中，如要暂停或停止泵的工作，只要把flow rate设为0泵即停止工作。B

10、：检测器：接通电源，由于检测器需要一定时间后才达到稳定状态，可在其它部件未启动前先启动。达到稳定后，设 置检测波长，然后 enter。但流动相洗脱到无信号出现，基线平稳，可以开始实验。在输液泵把分析时所用的流动相压至柱子进行洗 脱直到检测器检测不到组分时，才可以第二次进样分析。C:色谱处理机：打开电脑，进入色谱处理系统。设置方法面积归一化法。当柱子洗脱结束，检测器稳定，样品被注射到系统中时，按下 “启动”，色谱工 作站开始收集数据。当所有组份从柱子中流出，按下“停止”键。工作站停止收集数据。 然后进入数据分析，打印分析结果。结束实验：按下 stop flow ，停止泵工作。关闭检测器电源。关闭

11、泵 系统电源。高效液相色谱仪操作步骤 高效液相色谱仪操作步骤：1).过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。3).打开HPLC工作站(包括计 算机软件和色谱仪)，连接好流动相管道，连接检测系统。8).进样和进样后操作。9).关机时，先关计 算机，再关液相色谱。高效液相色谱仪操作步骤：1) . 过滤流动相，根据需要选择不同的滤膜。2) . 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。3) . 打开 HPLC 工作站(包括计算机软件和色谱仪)，连接好流动相管道，连接检测系统。4) .进入HPLC控制界面主菜单，点击manual，进入手动菜单。5) . 有一段时间没用，或者换了新的流动相，需要先冲洗泵和

12、进样阀。冲洗泵，直接在泵的出水口，用针 头抽龋冲洗进样阀，需要在manual菜单下，先点击purge，再点击start，冲洗时速度不要超过10 ml/min。6) . 调节流量，初次使用新的流动相，可以先试一下压力，流速越大，压力越大，一般不要超过2000。点 击injure，选用合适的流速，点击on,走基线，观察基线的情况。7) .设计走样方法。点击file，选取select user and methods，可以选取现有的各种走样方法。若需建立 一个新的方法，点击new method。选取需要的配件，包括进样阀，泵，检测器等，根据需要而不同。选 完后，点击protocol。一个完整的走样方

13、法需要包括：a.进样前的稳流，一般2-5分钟；b.基线归零；c.进 样阀的loading-inject转换；d.走样时间，随不同的样品而不同。8) .进样和进样后操作。选定走样方法，点击starto进样，所有的样品均需过滤。方法走完后，点击postrun， 可记录数据和做标记等。全部样品走完后，再用上面的方法走一段基线，洗掉剩余物。9) . 关机时，先关计算机，再关液相色谱。10) . 填写登记本，由负责人签字。注意事项：1) . 流动相均需色谱纯度，水用 20M 的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。2) . 柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。3) . 所有

14、过柱子的液体均需严格的过滤。4) . 压力不能太大，最好不要超过 2000 i。Waters 600E-2487高效液相色谱系统操作规程1. 目的规范Waters高效液相色谱系统的使用和维护。2. 范围本规程适用于Waters高效液相色谱系统的使用和维护。3. 职责质检室仪器分析员负责Waters高效液相色谱系统的日常使用和维护。4. 系统组成本系统由Waters 600E多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Waters在线脱气机、Rheodyne 7725i手动进样阀、Waters 2487双通道紫外检测器、Millennium32色谱工作站/电脑等组成，另外还包括 打印机、UPS和

15、通风柜等辅助设备。5. 程序5.1. 准备5.1.1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45pm滤膜过滤）、 样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和 定量环。5.1.2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。5.2. 开机和泵操作5.2.1. 开机5.2.1.1. 接通UPS的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E泵、2487检测器，待检测器自检结束显 示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。5.2.1.2. 打开Millennium32软件，按Login.，输入用

16、户名和密码，按OK注册进入系统主界面。 在Project档内选择所需的项目，右击Run Samples图标，选择色谱系统600_2487后打开QuickSet 窗口。5.2.2. 更换溶剂5.2.2.1.打开600E泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN位置；5222将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；522.3. 按Direct键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min （梯度配比阀在Oml/min时不工作）； 5224选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100%，其它为0%；5.2.2.5. 将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干

17、净的空瓶中；5226逆时钟转动手柄至DRAW位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂；5.2.2.7.再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；522.8.转动手柄至RUN位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。5.2.29重复5.2.245.2.2.8直至所有即将使用的溶剂更换完毕。5.2.3. 排气泡5.2.3.1. 打开参照阀，换流动相为100%超纯水，设流速为10ml/min （注意：确认参照阀是打开的，否则 可能损坏安装好的柱）；5232转动进口集合管阀手柄至DRAW位置，用启动注射器抽出约10ml水；523.3顺时钟转动手柄至INJ位置，缓慢用力使

18、水通过泵头从参照阀出口管排出（注意不要将气泡注入 泵中）；5234按Stop flow屏幕键停泵，关上参照阀。523.5. 如按以上方法不能排尽气泡，从柱入口处拆下泵出口管，用塑料管连接至塑料烧杯中，设流速为 10ml/min，冲洗25min （或更长时间）后停泵，重新接上柱。5.3. 平衡系统（分两种情况进行）5.3.1. 等度模式5.3.1.1. 每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min,以超纯水冲洗系统10min。5.3.1.2. 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。5.3.1.3. 观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的510%以内。如超出此范

19、围，可初步判断为 柱前管路仍有气泡，重复5.2.3下的步骤。5.3.1.4. 压力波动平稳后，换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前，让最少56倍 柱体积的流动相通过系统。5.3.1.5. 在QuickSet窗口下的Instrument Method档内选择所需的仪器方法，按Monito门（此后泵由软 件控制），观察基线和压力变化。如果冲洗至基线漂移10-3Au/min，噪声为10-4Au数量级，且压力平稳 时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。5.3.1.6. 按Abort图标（左上第五个），停止监视基线。5.3.2. 梯度模式5.3.2.1. 按检验方法规定的条件冲洗平衡

20、系统，并注意压力波动变化和排气泡。5.3.22在进样前运行12次空白梯度。5.4.进样541.在QuickSet窗口内左下部选（Single标签，在Sample Name档内填写试样名称；在Function档 内选择试样类型（标准选Inject Standards；样品选Inject Samples）；在Method Set档内选择所需的 方法组；在Injection Volume档内输入进样体积；在Run Time档内输入记录时间。5.4.2. 用针头滤器过滤试样溶液（注射液可不必过滤），用试样溶液清洗注射器，并排除气泡后抽取适量。5.4.2.1. 如按部分装液法，用微量注射器定容进样时，进

21、样量应不大于定量环体积的50%，并要求每次进 样体积准确、相同；5422如按完全装液法,用定量环定容进样时，进样量应不小于定量环体积的3倍（510倍准确性更佳）。5.4.3. 按Single标签内右边的进样（Inject）按钮，等待窗口底部状态档内显示“Waiting”后，方可进样。 5.4.4. 将进样阀手柄转动至Load位置，将注射器针完全插入进样阀入口中，平稳地注入试样溶液，除另 有规定外，让注射器留在进样阀上，将进样阀手柄快速转动至Inject位置，系统将自动运行，采集数据并 记录图谱。545.让进样阀手柄保持在Inject位置，到下次进样前12min切换回Load位置，将注射器从进样

22、阀中拔 出。5.4.6. 先用水再用试样溶液清洗注射器后，按以上程序继续进样，直至完成。5.5.数据处理（外标法）和打印5.5.1. 右击系统主界面下的Browse Project图标，选择相应的项目，按OK进入Project窗口，选 （Channels标签。5.5.2. 建立处理方法 选择一个待积分的标准，右击后选“Review”进入Review窗口。按Processing Method Wizard图标（左边第一个）进入New Processing Method向导窗口，按OK。5.5.2.1. 划入一个感兴趣的最窄的峰，按Next；5.5.2.2. 划入一段包含噪声的基线，按Next；5

23、.5.2.3. 划入一段要积分的区间，按Next；5.5.2.4. 根据情况选择最小峰面积和最小峰高，按Next、Next；5.525.在Name档内输入各组分峰的名称，按Next、Next；5.5.26 在Method Name档内填写方法名称，按Finish。退出Review窗口。环保商贸网5.5.3.修改标准 选中所有标准，右击后选“Alter Sample”进入Alter Sample窗口。5.5.3.1. 在 Sample Type 档内将 Unknown 改成 Standard；5.5.3.2. 按Amount图标（左上第六个）进入Component Editor窗口；5.5.3.

24、3. 按Copy from Process Method图标（左上第五个），选择刚建立的处理方法，按Open，在Value和Units档内分别输入标准所含各组分的数值和单位，完成后按OK回到Alter Sample窗口；5.5.34 按Save图标存盘，退出Alter Sample窗口。5.5.4. 积分 先选中所有标准，再选中所有未知样品，右击后选“Process”进入Background Processing & Reporting窗口，选Use specified processing methods，在右边档内选择刚建立的处理方法，按OK。5.5.5. 打印 在Project窗口下选R

25、esults标签。5.5.5.1.选中要打印的标准/样品，右击后选“Preview”进入Open Report Method窗口，选合适的打印方法, 按OK进入Report Publisher （Preview）窗口，预览打印的结果。按打印（Print）图标（左上第二个）即可 打印结果。5.5.52按Close可进入Report Publisher窗口对报告方法进行修改，完成后按Print图标（右数第 二个）即可打印结果。5.5.6. 数据处理完成后，关闭所有窗口，在主界面下按Logout退出系统，关闭Millennium32软件，再 依次关闭电脑主机、显示器、打印机。 5.6. 清洗系统和关

26、机5.6.1. 数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗10min后，换水冲洗。5.6.2. 清洗进样阀5.6.2.1. 用启动注射器吸10ml超纯水；5622将注射针导入口冲洗头（Rheodyne部件号7125-054）连接到注射器出口上（不要针），并将它 们一起接到进样口上；5.6.2.3. 使进样阀保持在 Inject 位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和 注射针密封圈，由样品溢出管排出。5.6.3. 清洗柱5.6.3.1. C18柱先用超纯水以1ml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙腈冲洗20min。5.6.3.2. Protein PAK60

27、柱先用超纯水冲洗90min以上，再用甲醇或乙腈冲洗40min。5.6.4. 用水冲洗柱后，分别用 20ml 超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。5.6.5. 清洗完成后，先将流速降到0,再依次关闭泵、脱气机、UPS,断开电源。5.6.6. 填写使用记录。2007-09-14 12:50:03作者：佚名来源：网络转载浏览次数：141文字大小：【大】【中】【小】 关键字：色谱仪操作规程 、开机前准备1. 实验室温度应保持在1030C之间，湿度小于80%。2. 根据实验要求，选择合适的柱子，按装柱子，准备相应的流动相并过滤脱气。二、开机1. 依次打开510泵、检测器和计算机电源开关，设定合适的波长和

28、AUFS值。2. 双击桌面上的HS V4.0图标，进入工作站系统。三、编辑LC分析方法1. 双击“方案”图标，输入初始参数。2. 双击HS V1.0图标，设定合适的流速和梯度。3保存所编辑的方法。四、样品分析与采集数据1. 在文件栏中选择分析方法文件。2. 手动进样:在方案栏中依提示输入文件名称、样品名称、操作者等信息。进标准样并按下 进样器手柄，即开始样品分析与数据采集。3. 根据标准色谱图进行归一化法、外标法或内标法校正。4. 输入样品进行分析与数据采集。 五扌艮告输出1. 在界面栏的方案栏中选择打印项。2. 选择所要选用的报告格式，输出报告。六、关机1. 关机前先用100%甲醇冲洗系统3

29、0分钟，关闭泵控系统，退出主界面。2. 依次关闭计算机电源，510泵电源，检测器电源。3. 关闭电源。4. 在记录本记录使用情况。【分享】BECKMAN 125型高效液相色谱仪使用的标准操作程序（SOP）目的：规范BECKMAN 125型高效液相色谱仪的使用操作，保证高效液相测量结果的准确性。1. 适用范围本标准适用于BECKMAN 125型高效液相色谱仪的使用操作。2. 目的与意义规范BECKMAN 125型高效液相色谱仪的使用操作，保证高效液相测量结果的准确性。3. 责任 质量分析人员全面负责本 SOP 的实施。4. 仪器的组成本系统由 SYSTEM GOLD 125 溶剂输送泵、SYST

30、EM GOLD 166 检测器（190360 nm）、Rheodyne 7725i手动进样阀、HT-330柱温箱、BECKMAN色谱工作站、打印机等组成。5. 操作步骤5.1. 准备5.1.1准备所需的流动相，用合适的0.45pm滤膜过滤，超声脱气20min。 5.1.2根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向）。5.1.3配制样品和标准溶液，用合适的0.20pm滤膜过滤。5.2. 开机接通电源，依次开启泵、检测器开关，打开计算机进入win2000操作系统，双击桌面的32 Karat图标进入 主菜单对话框，双击 Instrument 图标进入色谱分析界面（包括 Direct Control

31、、 Det166、 Instrument Setup 等界面）。5.3. 创建分析方法可在Direct Control界面直接点击各设备单元的图像进行流动相比例、流速、最大压力限、最小压力限、检 测波长以及检测器开启与关闭等参数的设定，亦可点击 “Methed/Instrument Setup” 进行相应的设定，然 后点击File/Methed/Save As保存设定的方法。5.4. 更换流动相并排气泡将管路的吸滤器放入装有流动相的储液瓶中，逆时针转动排液阀90-180，打开排液阀；设流速为5ml/min, 冲洗 3min 后设流速为 0 停泵，将排液阀顺时针旋转到底，关闭排液阀。如管路中没有

32、气泡，则排气泡操 作可省略；如管路中仍有气泡，则重复以上操作直至气泡排尽。5.5. 平衡系统用流动相冲洗至基线漂移0.001AU/min,噪声为0.0005 AU时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。5.6. 输入样品信息点击Control/Single Run,在 Sanple ID （样品名称）、Method （方法）、Data path （保存路径）、Data file （文件名）输入相应的信心，然后点击 Submit 提交。5.7. 进样在“Direct Control”界面点击AutoZero键调零；用进样针定量吸取样品溶液，在进样阀处于INJECT状态下 插入进样针;逆时针转动进

33、样阀手柄，在LOAD状态下推针进样,再顺时针转动进样阀手柄使其回至INJECT 状态即完成进样操作。5.8. 报告输出与打印在主菜单对话框内右击Instrument图标，点击“open offline进入离线分析界面。5.8.1系统默认报告格式：点击“File/Data/New ”打开相应文件后，点击“Report/View/Area%”。5.8.2自定义报告格式：点击“File/Data/New”打开相应文件后，在该界面中单击鼠标右键，点击“Graphical programming/Define Peaks”，在色谱图中单击自定义峰的起始和终点位置，点击“File/Method/Save”

34、进行 方法保存；点击“Report/Analyze”，进行自定义报告的分析；点击Method/Custom Report,在弹出的界面 中分别点击“Insert field”、Insert Graph/Data Graph和“Insert Report/Run Report即可分别插入常规信息、 图谱、数据，从而完成自定义报告。完成报告输出后，点击“Report/Print/Area% ”或者“Report/Print/ Custom Report即可打印报告。5.9 关机5.9.1测定完毕后，在Direct Control界面点击检测器图标关闭紫外灯。5.9.2色谱柱的冲洗5.9.2.1反相

35、柱（C8、C18）：流动相含盐的（可将加酸、加三乙胺等情况并入），以乙腈一水（5： 95）（乙 腈可用甲醇代替，下同）冲洗30min （可视具体情况增加冲洗时间，下同），然后以乙腈冲洗20 min以上； 流动相不含盐的，以流动相冲洗10 min以上，然后以甲醇冲洗20 min以上；流动相添加离子试剂的，以 乙腈一水（5： 95）冲洗45 min以上，然后以乙腈冲洗20 min以上。流速一般设为1ml/min。5.922正相柱：流动相含盐的，以不含盐流动相冲洗30 min以上，再以正己烷冲洗20 min以上（如流动 相极性与正己烷有较大差异，可在流动相冲洗后，以异丙醇低速冲洗进行过渡，注意以异丙

36、醇为流动相流 速不得超过0.5ml/min,下同）；流动相不含盐的，以流动相冲洗20 min以上，再以正己烷冲洗20 min以 上。5.9.3 停泵，逐级关闭工作站窗口，关闭计算机及仪器各部件电源开关。5.10 填写仪器使用记录6. 注意事项6.1流动相及样品溶液必须用0.45um滤膜过滤，流动相还要进行脱气处理。6.2进样量最少为定量环体积的3至5倍，即20pl的定量环最少进样60至100的样品，这样才能完全 置换样品定量环内残留的溶液，达到所要求的精密度及重现性。推荐采用100ul的平头进样针配合20ul满 环进样。6.3 待泵的压力稳定后，方可开启检测器。6.4 试验结束后，待泵的压力逐

37、步降为0后，方可关闭泵的电源。6.5仔细阅读色谱柱说明书，保证色谱柱系统的适应性（流动相pH 2-8；柱压小于2.5 KPSI）。Waters 600高效液相色谱仪操作规程一、准备1、使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相(应足够；流动相必须用0.45呻滤膜过滤)、样 品和标准溶液。2、通电前应检查仪器设备和输液管道是否正常。二、开机3、依次打开断电保护器、 600E 泵、检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打计算机。4、打开Millennium32软件，进入系统主界面。在Project档内选择所需的项目，右击Run Samples图标， 选择色谱系统后打开 QuickSet

38、窗口。三、平衡系统5、每次以0.1ml/min的增量加大流速至1ml/min，以超纯水冲洗系统10min。6、检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。7、观察泵控制屏幕上的压力值，压力波动应在平均值的 510%以内。8、压力波动平稳后，换检验方法规定的流动相比例冲洗系统。在检查基线稳定性前，让最少56 倍柱体积 的流动相通过系统。9、在QuickSet窗口下的Instrument Method档内选择所需的仪器方法，按Monitor，观察基线和压力变 化。如果冲洗至基线漂移10-3Au/min，噪声为10-4Au数量级，且压力平稳时，可认为系统已达到平衡状 态，可以进样。10、

39、按Abort图标，停止监视基线。四、进样11、在QuickSet窗口内左下部选Single标签，在Sample Name档内填写试样名称；在Function档内选 择试样类型；在Method Set档内选择所需的方法组；在Injection Volume档内输入进样体积；在Run Tim e 档内输入记录时间。12、按Single标签内右边的进样(Inject)按钮，等待窗口底部状态档内显示“Waiting”后，方可进样。13、将进样阀手柄转动至Load位置，将注射器针完全插入进样阀入口中，平稳地注入试样溶液，让注射器 留在进样阀上，将进样阀手柄快速转动至Inject位置，系统将自动运行，采集

40、数据并记录图谱。14、让进样阀手柄保持在Inject位置，到下次进样前12min切换回Load位置，将注射器从进样阀中拔出。15、先用水再用试样溶液清洗注射器后，按以上程序继续进样，直至完成。五、数据处理(外标法)和打印16、右击系统主界面下的Browse Project图标，选择相应的项目，按OK进入Project窗口，选Ch annels标签。17、建立处理方法选择一个待积分的标准，右击后选“Review”进入Review窗口。按Processing Metho d Wizard图标(左边第一个)进入New Processing Method向导窗口，按OK。按向导提示的方法建 立数据处理

41、方法。18、处理数据先选中所有标准样品，再选中所有未知样品，右击后选“Process”进入Background Processi ng & Reporting窗口，选Use specified processing methods，在右边档内选择刚建立的处理方法，按OK。19、打印 在Project窗口下选Results标签。20、选中要打印的标准/样品，右击后选“Preview”进入Open Report Method窗口，选合适的打印方法，按 rOK进入Report Publisher (Preview)窗口，预览打印的结果。按打印(Print)图标即可打印结果。21、按Close可进入R

42、eport Publisher窗口对报告方法进行修改，完成后按Print图标即可打印结果。22、数据处理完成后，关闭所有窗口，在主界面下按Logout退出系统，关闭Millennium32软件，再依 次关闭电脑主机、显示器、打印机。六、清洗系统和关机23、数据采集完毕后，关闭检测器，继续以工作流动相冲洗 30min。24、清洗进样阀。25、清洗柱C18柱先用超纯水以1ml/min冲洗40min以上，再用甲醇或乙腈冲洗20min； Protein PAK60柱先用超纯水 冲洗90min以上，再用甲醇或乙腈冲洗40min。26、清洗完成后，先将流速降到 0，再依次关闭计算机、检测器、 600E 泵、断电保护器电源。27、用 20ml 超纯水冲洗柱塞杆外部和法兰盘上小孔。28、清洁仪器桌面、地板，登记仪器使用情况，关好门窗水电。