第十八章平面色谱法

《第十八章平面色谱法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第十八章平面色谱法（23页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、第十八章第十八章 平面色谱法平面色谱法Plane Chromatographyu平面色谱法（平面色谱法（plane chromatographyplane chromatography）是在平面上进行分离的色谱方法是在平面上进行分离的色谱方法u主要包括：主要包括：薄层色谱法薄层色谱法 纸色谱法纸色谱法第一节第一节 平面色谱法的分类和原理平面色谱法的分类和原理1.薄层色谱法薄层色谱法固定相铺在玻璃板、铝箔、塑料板上形成薄层固定相铺在玻璃板、铝箔、塑料板上形成薄层2.纸色谱法纸色谱法固定相：纸纤维上吸附的水分固定相：纸纤维上吸附的水分（分配色谱）（分配色谱）流动相：不与水相混溶的有机溶剂流动相：不

2、与水相混溶的有机溶剂3.薄层电泳法薄层电泳法带电荷的被分离物质在薄层惰性支持介质上，向带电荷的被分离物质在薄层惰性支持介质上，向与其相反的电极方向以不同速度泳动而实现分离与其相反的电极方向以不同速度泳动而实现分离一、平面色谱法的分类一、平面色谱法的分类二、平面色谱法参数二、平面色谱法参数1.比移值比移值离离为为原原点点至至溶溶剂剂前前沿沿的的距距离离为为原原点点至至斑斑点点中中心心的的距距00fLLL/LR值值为为参参考考物物质质的的值值为为组组分分的的f)s(ff)i(f)s(f)i(frRRRRR/RR 0 Rf 1Rf 0.20.8为宜为宜（一）定性参数（一）定性参数2.相对比移值相对比

3、移值例例 化合物化合物A在薄层板上从原点迁移在薄层板上从原点迁移7.6cm，溶剂，溶剂前沿距原点前沿距原点16.2cm。（1）计算化合物）计算化合物A的的Rf值值（2）色谱条件相同时，当溶剂前沿移至距原点）色谱条件相同时，当溶剂前沿移至距原点14.3cm时，化合物时，化合物A的斑点应在何处？的斑点应在何处？47.02.166.7LLR)1(0f 解解cm7.647.03.14RLL)2(f0 （二）相平衡参数（二）相平衡参数msfff00fmsmmssV/KV11RRR1kk11RRttLLRRk11RkV/KVVC/VCR/)R1(R 或或面面上上移移动动的的速速度度也也可可表表示示组组分分

4、分分子子在在平平率率子子在在流流动动相相中中出出现现的的几几为为在在单单位位时时间间内内一一个个分分设设 （三）面效参数（三）面效参数1.理论塔板数理论塔板数L：原点到斑点的距离：原点到斑点的距离W：组分斑点的纵向宽度：组分斑点的纵向宽度2.塔板高度塔板高度L0：原点到展开剂前沿的距离：原点到展开剂前沿的距离2)WL(16n nLH0（四）分离参数（四）分离参数1.分离度分离度212112WWd2WW)LL(2R1bbLSN1002.分离数分离数在相邻斑点分离度为在相邻斑点分离度为1.177时，在时，在Rf=0和和Rf=1两组分斑点间能容纳两组分斑点间能容纳的色谱斑点数的色谱斑点数 )R1(1

5、4nRWW,RR221f21ff 试证明下式成立：试证明下式成立：已知：已知：)R1(14nRR1RR11RR1k1kRR1kk11Rk1k14nR222222222ffffff22ff22f22 证明：证明：12kk 12kk WLLLLL4nLLL1LLLLLL4nk1kk4nk1kkk1kk4nk1k14nR2112122011022021222121222 LLLRR1k0ff 第二节第二节 薄层色谱法（薄层色谱法（TLC）（一）吸附薄层色谱法（一）吸附薄层色谱法固定相：吸附剂固定相：吸附剂（二）分配薄层色谱法（二）分配薄层色谱法固定相：吸留在载体上的液体（如，硅胶上的水）固定相：吸留

6、在载体上的液体（如，硅胶上的水）流动相极性流动相极性固定相极性固定相极性 反相色谱反相色谱一、薄层色谱法的主要类型一、薄层色谱法的主要类型二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂二、吸附薄层色谱的吸附剂和展开剂1.硅胶硅胶为多孔性无定形粉末，表面有硅醇基呈弱酸性，通为多孔性无定形粉末，表面有硅醇基呈弱酸性，通过过硅醇基与极性基团形成氢键硅醇基与极性基团形成氢键而表现其吸附性能。而表现其吸附性能。失活：硅胶吸水后形成水合硅醇基而失去吸附能力失活：硅胶吸水后形成水合硅醇基而失去吸附能力活化：加热至活化：加热至100 C以上以上pH5，适合中性、酸性物质的分离，适合中性、酸性物质的分离种类：硅胶种类：硅胶H

7、、硅胶、硅胶G、硅胶、硅胶GF254等等2.氧化铝氧化铝种类：中性、碱性、酸性种类：中性、碱性、酸性（一）吸附剂（一）吸附剂（二）展开剂（二）展开剂展开剂的选择主要根据被分离展开剂的选择主要根据被分离物质的极性、展开剂的极性来物质的极性、展开剂的极性来决定决定常用溶剂极性强弱：常用溶剂极性强弱：水水酸酸吡啶吡啶甲醇甲醇乙醇乙醇正丙正丙醇醇丙酮丙酮乙酸乙酯乙酸乙酯乙醚乙醚氯仿氯仿二氯甲烷二氯甲烷甲苯甲苯苯苯三氯乙烷三氯乙烷四氯乙烷四氯乙烷环己烷环己烷石油醚石油醚例：例：P390/15答：答：极性小的组分极性小的组分Rf值大值大六种染料的极性顺序为：六种染料的极性顺序为：偶氮苯偶氮苯对甲氧基偶氮苯

8、对甲氧基偶氮苯苏丹黄苏丹黄苏丹红苏丹红对氨对氨基偶氮苯基偶氮苯对羟基偶氮苯对羟基偶氮苯根据取代基的极性大小排出顺序根据取代基的极性大小排出顺序苏丹黄、苏丹红是带有羟基的偶氮苯，但其构型易苏丹黄、苏丹红是带有羟基的偶氮苯，但其构型易形成分子内氢键而使极性降低形成分子内氢键而使极性降低苏丹红因共轭体系比苏丹黄更长，极性更强。苏丹红因共轭体系比苏丹黄更长，极性更强。三、薄层色谱操作方法三、薄层色谱操作方法薄板：薄板：加粘合剂的硬板、不加粘合剂的软板加粘合剂的硬板、不加粘合剂的软板粘合剂：粘合剂：羧甲基纤维素钠羧甲基纤维素钠 CMCNa 硅胶硅胶CMC板板煅石膏煅石膏 CaSO41/2H2O 硅胶硅胶

9、G板板（一）薄层板的制备（一）薄层板的制备有机溶剂，浓度约为有机溶剂，浓度约为0.010.1原点直径：原点直径：24mm工具：点样毛细管、微量注射器工具：点样毛细管、微量注射器（二）点样（二）点样（三）展开和展开剂的流速（三）展开和展开剂的流速1.展开剂的流速展开剂的流速 cosdk2kL2ktk21dtdLU)kt(Lp002/12/10f2/102.展开展开展开器皿常为长方形密闭玻璃缸，上行法展开展开器皿常为长方形密闭玻璃缸，上行法展开（四）显色（四）显色在日光下观察在日光下观察在紫外灯下观察在紫外灯下观察荧光薄层板检测荧光薄层板检测显色剂显色显色剂显色四、定性和定量分析四、定性和定量分析

10、用用Rf值值定性定性（二）定量分析（二）定量分析1.洗脱法洗脱法用溶剂将斑点中的组分洗脱下来，再定量测定用溶剂将斑点中的组分洗脱下来，再定量测定2.直接定量法直接定量法目视法目视法薄层扫描法薄层扫描法（一）定性分析（一）定性分析五、高效薄层色谱法五、高效薄层色谱法HPTLC高效薄层板用喷雾法制成高效薄层板用喷雾法制成吸附剂颗粒比经典薄层色谱法小得多吸附剂颗粒比经典薄层色谱法小得多有效塔板数可达有效塔板数可达5000以上以上六、薄层扫描法六、薄层扫描法 用一定波长和强度的光束照射薄层上的斑点，用一定波长和强度的光束照射薄层上的斑点，用仪器测量照射前后光束强度的变化，从而用仪器测量照射前后光束强度

11、的变化，从而求得物质含量的方法。求得物质含量的方法。透射法测定透射法测定 反射法测定反射法测定 扫描方法：光源不动，薄层板动扫描方法：光源不动，薄层板动 定量分析：外标法定量分析：外标法七、薄层色谱的应用及实例七、薄层色谱的应用及实例 判断合成反应的程度判断合成反应的程度 药品的鉴别和纯度的检查药品的鉴别和纯度的检查 天然药物的鉴别和定量测定天然药物的鉴别和定量测定第三节第三节 纸色谱法纸色谱法纸色谱过程是溶质在固定相和流动相之间纸色谱过程是溶质在固定相和流动相之间连续萃取连续萃取的过程的过程属于属于正相分配色谱正相分配色谱化合物极性大或亲水性强，则分配系数大，化合物极性大或亲水性强，则分配系数大，Rf值小值小一、纸色谱法的分离原理一、纸色谱法的分离原理二、纸色谱法的实验条件二、纸色谱法的实验条件1.色谱纸的选择色谱纸的选择2.固定相固定相滤纸纤维通常含滤纸纤维通常含2025的水分，其中有的水分，其中有67的水分以氢键缔合的形式与纤维素的水分以氢键缔合的形式与纤维素的羟基结合在一起的羟基结合在一起3.展开剂的选择展开剂的选择物质在两相中的物质在两相中的溶解度溶解度 展开剂的极性展开剂的极性水饱和的正丁醇、正戊醇、酚等作展开剂，水饱和的正丁醇、正戊醇、酚等作展开剂，并加入少量酸或碱，如并加入少量酸或碱，如 正丁醇醋酸水正丁醇醋酸水