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1、羟基自由基(OH)清除能力测定法的简易操作图解（适用于各种抗氧化剂）文献来源 1 Xican Li. Solvent effects and improvements in the deoxyribose degradation assay for hydroxyl radical-scavenging. Food Chemistry, 2013, 141(3):2082-2088.操作图解图1 羟基自由基(OH)清除能力测定法（脱氧核糖降解法）的实验操作图具体方法1 溶液配制0.2 MKH2PO4溶液: 100mL蒸馏水+2.7218g KH2PO4。0.2 M Na2HPO4溶液: 500
2、mL蒸馏水+35.814g Na2HPO412H2O。磷酸盐KH2PO4Na2HPO4缓冲液phosphate buffer（0.2M, pH7.4, 100mL）：19mL0.2 MKH2PO4+ 81mL 0.2 MNa2HPO4. （注意：19：81是大概的体积比，具体的比例以pH=7.4为准）。Na2EDTA溶液：（1mM, 25mL）：8.4 mg+25mL蒸馏水。FeCl3溶液：（3.2mM, 5mL）：4.2 mg+5mL蒸馏水。抗坏血酸溶液：（1.8mM, 50mL）：15 mg+50mL蒸馏水。H2O2溶液：（50 mM,5mL）：30 mg 30% H2O2+5mL蒸馏水。
3、脱氧核糖溶液：（50 mM, 2 mL）：15 mg脱氧核糖+2 mL蒸馏水(该用量约可做40个数据) 。三氯乙酸溶液TCA（10%, 10 mL）：1 g + 10 mL蒸馏水。硫代巴比妥酸溶液TBA：（5%, W/V, 20mL）:取1gTBA+20mL蒸馏水+20mgNaOH (临用时配，超声溶解. 该用量可做40个数据) 。样品溶液：选合适的溶剂（如甲醇、无水乙醇等），先配成1mg/mL的溶液试试。2 操作方法与注意事项2.1 操作方法（见图1）2.2 注意事项1 测试前，一定要检查试管是否干净，不净的试管不能用。正式测试前,盛装样品的容器(小瓶或试管)必须用铬酸洗液洗净。2 样品溶液
4、加入到试管后，先彻底挥干溶剂，再用样品的残渣，进行实验检测（见：操作图解）。这一步至关重要，因为有机溶剂都会产生数十倍的干扰。其原因中文献1已做详细说明。3 最后显色时，如颜色太淡，可能是加热温度不够高；4 加样：在10L以下最好用进样针，插到瓶底；取样：力保均匀。5 如平行样之间差别太大，系混合不均所致。两次水浴前，都要充分振荡。振荡时，用保鲜膜盖住管口上下剧烈振荡。3 计算公式4 实验结果（以咖啡酸Caffeic acid为例） 采用文献1的改进方法，用样品残渣检测，消除了溶剂干扰，其结果如下图的黑线；如果不挥干溶剂（醇溶液），结果则为红线。从IC50值分析，相差10倍以上。图2 咖啡酸的OH自由基的清除能力的对比（挥干溶剂vs样品溶液）致谢：本文由论文原作者广州中医药大学李熙灿教授提供，特此致谢。2
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