医院感染监测标本采集标准操作课件

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1、感染监测标本采集的标准操作感染监测标本采集的标准操作 向向 霞霞医院感染医院感染病例监测病例监测消毒灭菌消毒灭菌效果监测效果监测抗菌药物抗菌药物及耐药菌监测及耐药菌监测消毒药械消毒药械一次性医疗用品一次性医疗用品及其他监测及其他监测环环 境境卫生学监测卫生学监测医院感染监测医院感染监测环环境境卫卫生生学学监监测测范范围围空气空气物体表面物体表面医护人员手医护人员手灭菌后物品灭菌后物品使用中的消毒剂及灭菌剂使用中的消毒剂及灭菌剂制作依据制作依据 医务人员手卫生规范医务人员手卫生规范WS/T313-2009WS/T313-2009中华人民共和国中华人民共和国卫卫 生部生部 2009-12-01 2

2、009-12-01 实施实施 医疗机构消毒技术规范医疗机构消毒技术规范WS/T367-2012WS/T367-2012中华人民共和国中华人民共和国 卫生部卫生部 2012-08-01 2012-08-01 实施实施 洁净手术部建筑技术规范洁净手术部建筑技术规范修订稿修订稿GB50333-2014GB50333-2014中华中华人民共和国国家标准人民共和国国家标准 医院消毒卫生标准医院消毒卫生标准GB 15982GB 1598220122012中中 华华 人人 民民 共共 和和 国国 国国 家家 标标 准准环境卫生学监测的目的 监测消毒效果是否达到标准要求，追寻消毒方法是否正确（消毒设备是否功能

3、完好，消毒剂浓度、质量是否达标），保证医疗环境安全。规范采集标本的意义 只有标本采集正确，培养结果才可能正确。才能正确指导消毒隔离措施的落实。医院空气消毒与监测医院空气消毒与监测 目前普通科室取消常规空气监测目前普通科室取消常规空气监测 重点科室有针对性的采样监测重点科室有针对性的采样监测空气净化效果监测频率手术室产房导管室洁净病房器官移植病房ICU新生儿室母婴同室血透烧伤病房常规：每季度监测一次临时：遇医院感染暴发怀疑与空气污染有关时随时进行监测 洁净手术部及其他洁净场所，根据洁净房间总数，合理安排每次监测的房间数量，保证每个洁净房间能每年至少监测一次 洁净手术部(室)及其他洁净场所.新建与

4、改建验收时以及更换高效过滤器后应进行监测 常用的空气消毒方法通风通风1集中空调通风系统集中空调通风系统2空气洁净技术空气洁净技术3紫外线消毒紫外线消毒4空气消毒器空气消毒器5化学消毒法化学消毒法6 通风通风自然通风自然通风机械通风机械通风机械送风与自然排风自然送风与机械排风机械送风与机械排风紫外线消毒紫外线消毒适用于无人状态下室内空气的消毒没有持续作用需要一定的时间、强度消毒方法消毒方法保持紫外线灯表面清洁，每周用7580酒精擦拭一次。发现灯管表面有灰尘、油污时，应及时擦拭。紫外线灯消毒室内空气时，房间内应保持清洁干燥，减少尘埃和水雾。温度40时，或相对湿度60时，应适当延长照射时间。室内有人

5、时不应使用紫外线灯照射消毒。紫外线灯采取悬吊式或移动式直接照射。灯管吊装高度，距离地面1.8m-2.2m。安装时紫外线灯照射强度应1.5W/m3，照射时间30min。紫外线消毒紫外线消毒1m5min1min紫外线强度照射指示卡监测法紫外线强度照射指示卡监测法注意事项注意事项测定时电压220V5V，温度20-25，相对湿度60%，紫外线辐照计应在计量部门检定的有效期内使用；指示卡应获得卫生部消毒产品卫生许可批件，并在有效期内使用。结果判定结果判定使用中紫外线灯照射强度70W/cm2为合格；30W高强度紫外线新灯的辐射强度180W/cm2为合格。紫紫外外线线消消毒毒效效果果监监测测紫外线消毒紫外线

6、消毒每半年监测一次各科室负责监测医院感染管理科负责审核空气消毒器空气消毒器作用原理作用原理适用范围适用范围注意事项注意事项过滤、紫外线、静电吸附、等离子体、光触媒适用于有人状态下的室内空气消毒消毒时应关闭门窗；进风口、出风口不应有物品覆盖或遮挡。采用洁净技术净化空气的房间在洁净系统自净后与从事医疗活动前采样 未采用洁净技术净化空气的房间在消毒或规定的通风换气后与从事医疗活动前采样 怀疑与医院感染暴发有关时采样空气消毒效果监测空气消毒效果监测采样时间采样时间空气消毒效果监测空气消毒效果监测监测方法 洁净手术部（室）及其他洁净用房可选择沉降法或浮游菌法进行监测。浮游菌法可选择六级撞击式空气采样器或

7、其他经验证的空气采样器。监测时将采样器置于室内中央0.8m-1.5m高度，按采样器使用说明书操作，每次采样时间不应超过30min。房间面积10m2者，每增加10m2增设一个采样点。空气消毒效果监测空气消毒效果监测 将普通营养琼脂平皿（90mm）放置各采样点，采样高度为距地面0.8m-1.5m；采样时将平皿盖打开，扣放于平皿旁，暴露规定时间后盖上平皿盖及时送检。空气消毒效果监测空气消毒效果监测 未采用洁净技术净化空气的房间采用沉降法：室内面积30m2，设内、中、外对角线三点，内、外点应距墙壁1m处；室内面积30 m2，设四角及中央五点，四角的布点位置应距墙壁1m处。手臂越过平皿皿盖朝上皿盖朝上洁

8、净手术部（室）和其他洁净场所，空气中的细菌菌落总数要求应4cfu/(30min直径9cm平皿)非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区空气中的细菌菌落总数4cfu/(15min直径9cm平皿)儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房空气中的细菌菌落总数4cfu/(5min直径9cm平皿)空气消毒效果监测结果判定空气消毒效果监测结果判定注意事项注意事项1、采样前，关好门、窗，在无人走动的情况下，静止10分钟

9、进行采样2、放置平皿时，放置顺序是从里往外放，收起的时候是从外往里收，这样避免人员走动引起空气中漂浮粒子震荡引起结果偏高。空气净化的目的空气净化的目的通过空气净化创造一个温度、湿度适宜，空气清新，无菌、洁净的微环境，将室内整个环境设施、器械进行科学地组构，使秩序性、方便性、安全性、清洁性和无菌程度都达到一个理想的高度，为手术的成功提供保障。监测状态监测状态 对于消毒效果监测，都做静态检测。一般动态检测只是作为参考，常用于一些课题研究等，因为每个人的动作幅度大小不一，人员数量不一。如果ICU是洁净环境的，通常动态标准为静态条件下乘以5倍。如果是普通ICU，则是4cfu/15min.直径9cm平皿

10、乘以5倍。静态：室内设施及功能齐全，空调净化系统正常运行，但无人员的状态 空态：空调净化系统正常运行，没有安装设备，也没有人员 动态：一切系统正常运行、医护人员进行正常手术操作的状态，是我们日常工作的状态 布点顺序：放置培养皿从总平面中最靠里的房间开始布置，依次向外布，最后人员撤出。每间房间也是从房间最靠里的地方开始布置，最后布置门附近的点，然后人员撤出。收取培养皿时顺序相反，从最外边的房间开始收，每个房间从最靠门的培养皿开始收，最先布置的皿最后收，沉降时间略有差别。医院洁净手术部建筑技术规范医院洁净手术部建筑技术规范-GB 2002-GB 2002医院洁净手术部建筑技术规范医院洁净手术部建筑

11、技术规范-GB 503332013 报批稿 采样中常见的误区采样中常见的误区采样时开启空气处理机时间不足30分钟手术间未清洁、开着手术间的门采样采样时培养皿放置位置不符合要求采样时有人员流动未洗手、未按无菌操作进行采样平皿受到污染 平皿应新鲜透亮，当天领取使用。物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测在消毒处理在消毒处理后或怀疑与后或怀疑与医院感染暴医院感染暴发有关时进发有关时进行采样行采样物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测采样频率每采样频率每季度一次季度一次物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测采样方法采样方法 用5cmx5cm灭菌规格板放在被检物体表面，用浸有无

12、菌洗脱液的棉拭子1支，在规格板内横竖往返各涂抹5次，并随之转动棉拭子，连续采样4个规格板面积 被采表面100cm2，取全部表面 被采面积100cm2，取100cm2物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测物体表面消毒效果监测采样方法采样方法 剪去手接触部分，将棉拭子放入装有10ml无菌检验用洗脱液的试管中送检。门把手等小型物体则采用棉拭子直接涂抹物体表面采样。采样物体表面有消毒剂残留时，采样液应含相应中和剂。硫代硫酸钠（0.1%1.0%）物体表面消毒效果监测结果判定物体表面消毒效果监测结果判定 洁净手术部、其他洁净场所，非洁净手术部（室）、非洁净骨髓移植病房、产房、导管室、

13、新生儿室、器官移植病房、烧伤病房、重症监护病房、血液病病区等；物体表面细菌菌落总数5cfu/cm2 儿科病房、母婴同室、妇产科检查室、人流室、治疗室、注射室、换药室、输血科、消毒供应中心、血液透析中心（室）、急诊室、化验室、各类普通病室、感染疾病科门诊及其病房等；物体表面细菌菌落总数10cfu/cm2医护人员手消毒效果监测医护人员手消毒效果监测医护人员手消毒效果监测医护人员手消毒效果监测采样时间采样时间 在接触患者、进行诊疗活动前采样。医护人员手消毒效果监测医护人员手消毒效果监测采样方法采样方法 被检者五指并拢，用无菌洗脱液浸湿的棉拭子在双手指曲面从指端到指根再到指端为往返1次，共往返涂擦2次

14、，一只手涂擦面积约30cm2，涂擦过程中同时转动棉拭子将棉拭子接触操作者的部分剪去，投入10ml含相应中和剂的无菌洗脱液试管内，及时送检。监测频率监测频率 每季度一次医护人员手消毒效果监测医护人员手消毒效果监测卫生手清毒监测的细菌菌落总数应10cfu/2外科手消毒监测的细菌菌落总数应5cfu/2 不能检出致病性微生物手手的的消消毒毒效效果果监监测测使用中的消毒剂及灭菌剂监测使用中的消毒剂及灭菌剂监测采样方法：用无菌注射器按无菌操作方法吸取1.0mL被检消毒液，加入9mL中和剂中混匀 使用中的消毒剂及灭菌剂监测使用中的消毒剂及灭菌剂监测监测频率：消毒剂每季度监测一次灭菌剂每月监测一次结果判断：1

15、、使用中灭菌用消毒液：无菌生长2、使用中皮肤黏膜消毒液染菌量10cfu/ml3、其他使用中消毒液染菌量100cfu/ml注意事项：采样后4h内检测 1.采样时间:采取更换前使用中的消毒剂与无菌器械保存液。2.采样量及方法:在无菌条件下，用无菌吸管吸取1ml被检样液，加入9ml稀释液中混均，对于醇类与酚类消毒剂，稀释液用普通营养肉汤即可；对于含氯消毒剂、含碘消毒剂、过氧化物消毒剂，需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠；对于洗必泰、季铵盐类消毒剂，需在肉汤中加入3%吐温80和0.3%卵磷脂；对于醛类消毒剂，需在肉汤中加入0.3%甘氨酸；对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂，需在 肉汤中加入3%吐温80，

16、以中和被检样液的残效作用。使用中的消毒剂及灭菌剂监测使用中的消毒剂及灭菌剂监测 3.细菌菌落总数检查:采样管于混旋仪上混匀2分钟，取1ml采样液放入无菌平皿内，用普通营养琼脂作倾注培养，每份样品同时做2个平行样，一平板置于28培养7天，观察霉菌生长情况；另一个平板置于361培养72小时计数菌落数。4.结果计算：消毒液染菌量（cfu/ml）=平板上的菌落平均数10 稀释倍数（常为1）。使用中的消毒剂及灭菌剂监测使用中的消毒剂及灭菌剂监测 5.结果分析:平板上有菌生长,证明被检样液有残存活菌,若每个平板菌落数在10个以下,仍可用于消毒处理(但不能用于灭菌),若每个平板菌落数超过10个,说明每毫升被

17、检样液含菌量已超过100个,即不宜再用。6.判断标准 6.1使用中灭菌用消毒液：无菌生长 6.2使用中皮肤黏膜消毒液染菌量10cfu/ml 6.3其他使用中消毒液染菌量100cfu/ml使用中的消毒剂及灭菌剂监测使用中的消毒剂及灭菌剂监测压力蒸气灭菌的生物学检测压力蒸气灭菌的生物学检测压力蒸气灭菌的生物学检测 压力蒸气灭菌：其中生物指标为检查灭菌效果的直接监测指标。通常采用嗜热脂肪芽胞杆菌(ATCC 7953)作为观察灭菌效果的指示菌。生物指示剂：嗜热脂肪芽孢杆菌，定期监测（每周一次）化学指示剂：变色的指示带（每包监测）压力表定期检测（每半年一次）安全阀检测、校验（每年一次）压力蒸气灭菌的生物

18、学检测 培养方法：经一个灭菌周期后，在无菌条件下取出标准试验包的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基中，经561培养7d（自含式生物指示物按产品说明书执行），观察培养结果；结果判定：阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阴性，判定为灭菌合格。阳性对照组培养阳性，阴性对照组培养阴性，试验组培养阳性，则灭菌不合格；同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或是污染所致。自含式生物批示物不需要做阴性对照；注意事项：监测所用菌片应取得卫生部消毒产品卫生许可批件，并在有效期内使用。过氧化氢低温等离子灭菌、环氧乙过氧化氢低温等离子灭菌、环氧乙烷气体灭菌效果的监测烷气体灭菌效果的监测 标

19、准指示菌株：枯草杆菌黑色变种芽孢 监测方法：将常规生物测试包放在灭菌器最难灭菌的部位（整个装载灭菌包的中心部位）。灭菌周期完成后应立即取出指示菌片接种于含有复方中和剂的0.5%的葡萄糖肉汤培养基管中，361培养7d（自含式生物指示物应遵循产品说明），观察培养基颜色变化，同时设阳性对照；结果判定：阳性对照组培养阳性，试验组培养阴性，判定为灭菌合格。阳性对照组培养阳性，试验组培养阳性，则灭菌不合格；同时应进一步鉴定试验组阳性的细菌是否为指示菌或污染所致；注意事项：监测所用菌片应取得卫生部消毒产品卫生许可批件，并在有效期内使用。常见多重耐药菌的监测常见多重耐药菌的监测几种多重耐药菌监测几种多重耐药菌

20、监测 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）耐青霉素的肺炎链球菌的检测（PRSP）耐万古霉素肠球菌（VRE）产超广谱-内酰胺酶细菌（ESBLs）多重耐药/泛耐药的鲍曼不动杆菌（MDR/PDR-AB）多重耐药/泛耐药的铜绿假单胞菌（MDR/PDR-PA）耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌（CRE包括 NDM-1）耐碳青霉烯类抗菌药物鲍曼不动杆菌（CR-AB）耐万古霉素金黄色葡萄球菌（VRSA）多重耐药结核分枝杆菌（MDRMT）地面和物体表面的清洁与消毒物体表面消毒剂浓度选择地面采用400mg/L700mg/L有效氯的含氯消毒液擦拭，作用30min 消毒方法同地面或采用75%酒精擦拭。地面和物体表面的

21、清洁与消毒地面无明显污染当受到患者血液、体液等明显污染 湿式清洁 先用吸湿材料去除可见的污染物，再清洁和消毒 物体表面的清洁与消毒 物体表面（地面）的清洁与消毒地面的清洁与消毒 地面无明显污染时，采用湿式清洁。当地面受到患者血液、体液等明显污染时，先用吸湿材料去除可见的污染物，再清洁和消毒 室内用品如桌子、椅子、凳子、床头柜等的表面无明显污染时，采用湿式清洁。当受到明显污染时，先用吸湿材料去除可见的污染物，然后再清洁和消毒 感染高风险部门地面和物体表面的清洁与消毒 感染高风险的部门如手术部、产房、导管室、洁净病房、器官移植病房、ICU、新生儿室、血透、烧伤病房、感染疾病科、口腔科、检验科、急诊

22、等病房与部门的地面与物体表面，应保持清洁、干燥，每天进行消毒，遇明显污染随时去污、清洁与消毒 感染高风险部门地面和物体表面的清洁与消毒 手术室产房导管室洁净病房器官移植病房ICU新生儿室血透烧伤病房感染疾病科口腔科检验科急诊等 应保持清洁、干燥，每天进行消毒 遇明显污染随时去污、清洁与消毒 地面消毒采用400mg/L700mg/L有效氯的含氯消毒液擦拭，作用30min 物体表面消毒方法同地面或采用 75%酒精擦拭。内镜的消毒效果监测内镜的消毒效果监测内镜内镜内镜的消毒效果监测采用以下方法：内镜的消毒效果监测采用以下方法：采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面采样方法：监测采样部位为内镜的内腔面。

23、用无菌注射器抽取。用无菌注射器抽取10ml含相应中和剂的含相应中和剂的缓冲液缓冲液，从待检内镜活检口注入，用，从待检内镜活检口注入，用15ml无菌试管从活检无菌试管从活检出口出口收集，及时送检，收集，及时送检，2小小时内检测。时内检测。内镜 菌落计数：将送检液用旋涡器充分震荡，菌落计数：将送检液用旋涡器充分震荡，取取0.5ml，加入，加入2只直径只直径90mm无菌平皿，无菌平皿，每平皿分别加入已经熔化的每平皿分别加入已经熔化的45-48营养营养琼脂琼脂15ml-18ml，边倾注边摇匀，待琼脂，边倾注边摇匀，待琼脂凝固，于凝固，于35培养培养48小时后计数。小时后计数。结果判断：菌落数结果判断：

24、菌落数/镜镜=2个平皿菌落数平均个平皿菌落数平均值值20。内镜 致病菌检测：将送检液用旋涡器充分震荡致病菌检测：将送检液用旋涡器充分震荡，取，取0.2ml分别接种分别接种90mm血平皿、中国兰血平皿、中国兰平皿和平皿和SS平皿，均匀涂布，平皿，均匀涂布，35培养培养48小小时，观察有无致病菌生长时，观察有无致病菌生长内镜 灭菌后的内镜应当每月进行生物学监测并灭菌后的内镜应当每月进行生物学监测并做好监测记录。做好监测记录。消毒后的内镜应当每季度进行生物学监测消毒后的内镜应当每季度进行生物学监测并做好监测记录。并做好监测记录。消毒后的内镜合格标准为：消毒后的内镜合格标准为：细菌细菌总数总数20cf

25、u/件，不能检出致病菌；件，不能检出致病菌；灭菌后内镜合格标准为：无菌检测合格。灭菌后内镜合格标准为：无菌检测合格。血液透析 透析用水透析用水 细菌培养应每月细菌培养应每月1次，采样部位为反渗水供次，采样部位为反渗水供水管路的末端，细菌数水管路的末端，细菌数200cfu/ml合格。合格。内毒素检测应每季度内毒素检测应每季度1次，采样部位为反渗次，采样部位为反渗水供水管路的末端，内毒素水供水管路的末端，内毒素2EU/ml合格合格。储水装置的采样部位应在出口点，细菌数储水装置的采样部位应在出口点，细菌数200cfu/ml合格，内毒素合格，内毒素2EU/ml合格合格血液透析 透析液透析液 透析液应每月进行透析液应每月进行1次细菌培养，在透析液次细菌培养，在透析液进入透析器的位置收集标本，细菌数进入透析器的位置收集标本，细菌数200cfu/ml。透析液应每季度进行透析液应每季度进行1次内毒素检测，留取次内毒素检测，留取标本方法同细菌培养，内毒素标本方法同细菌培养，内毒素2EU/ml。