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1、2.2动物细胞培养和核移植技术学习目标： 1、简述动物细胞培养的过程、条件及应用2、简述通过动物体细胞核移植技术克隆动物的过程及应用前景学习重难点：1.动物细胞培养的过程及条件2.用动物体细胞核移植技术克隆动物的过程。学海导航：一、动物细胞工程包括： 、 、 、 等。二、动物细胞培养：（一）意义：是其它动物细胞工程的 。（二）概念：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成 ，然后在适宜的培养基上，让这些细胞 和 。（三）理论基础： 。 动物组织块剪碎用 .处理 单个细胞加培养液制成 . .分瓶（四）过程：说明：1、动物细胞培养特点：生长时 、 。细胞贴壁：在培养瓶中，悬液中分散的细胞很快就 在瓶
2、壁上，称为细胞贴壁。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到表面 时，细胞就会 分裂增殖，这种现象叫做接触抑制。2、分散成单个细胞的方法：剪碎、用 或 处理。3、分散成单个细胞的目的：使细胞与培养液充分接触，便于吸收O2和营养物质，排出代谢废物。4、原代培养：将动物组织消化后的 。（10代以内或分瓶之前）5、传代培养： 的细胞继续培养。（10代以后或分瓶之后）6、两次停止期：（1）10代左右有些细胞不能传代，有些细胞继续传代这些存活的的细胞一般能传到4050代，这种传代细胞称为细胞系。（2）50代左右绝大多数细胞死亡，部分细胞 发生变化，获得 ，朝着等同于 的方向发展，无限增殖。这种传代细胞称为细胞系。
3、细胞株和细胞系的区别： 的遗传物质改变，具有 细胞的特点，失去接触抑制，容易传代培养。而 的遗传物质没有改变。思考： 1、幼龄与老龄动物组织细胞比较，分化程度低的与分化程度高的组织细胞比较，哪一种更易于培养？为什么？2、为什么培养前要将组织细胞分散成单个细胞？3、取出的动物组织如何就分散成单个的细胞？4、细胞培养用胰蛋白酶处理说明细胞间的物质是什么成分？用胃蛋白酶可以吗？5、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗？为什么？6、动物细胞培养要脱分化的过程吗？为什么？7、动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？8、目前使用的或冷冻保存的细胞通常为几代以内的细胞？（五）条件：1、 、 环境。
4、（ 和 无菌处理；添加 ；定期更换培养液，以便清除细胞代谢产物）2、营养：合成培养基成分有糖、_、促生长因子、无机盐、微量元素，通常需加入天然成分_、 等。3、温度和PH：适宜温度为_0.5；pH为_74。4、气体环境：（1）O2： （2）CO2： （3）培养装置：用 或 ，置于95%空气加5%CO2的混合气体的 中培养。思考：1、什么叫合成培养基？使用时通常加入什么物质？为什么?2、加入CO2 的作用是？（三）、动物细胞培养技术的应用 （1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、 、单克隆抗体等。 （2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮。 （3）用于检测有 物质 （4）用于生理、病理、药理等方面的研
5、究，为治疗和预防疾病提供理论依据合作探究植物组织培养和动物细胞培养的比较植物组织培养动物细胞培养原理培养基性质 体 体（ 培养基）培养基特有成分取材培养结果培养目的相同点均为 操作，需要适宜的 、 、 等条件【当堂检测】1、有关动物细胞培养的叙述中正确的是（ ）A动物细胞培养前要用胃蛋白酶使细胞分散B动物细胞培养的主要目的是获得大量的细胞分泌蛋白C细胞遗传物质的改变发生于原代培养过程中 D动物细胞培养前要用胰蛋白酶使细胞分散2、动物细胞工程技术的基础是（ ）A动物细胞融合 B胚胎移植 C动物细胞培养 D核移植3、在进行动物细胞培养时，通常选用的培养材料是（ ）A、衰老退化的动物组织细胞 B、成
6、熟动物个体的体细胞C、动物的受精卵细胞 D、动物胚胎或幼龄动物个体的细胞4、下列关于动物细胞培养的叙述中，错误的是 （ ）A、用于培养的细胞大多取自胚胎或幼龄动物的器官或组织B、将所取的组织先用胰蛋白酶等进行处理使其分散成单个细胞C、在培养瓶中要定期用胰蛋白酶使细胞从瓶壁上脱离，制成悬浮液D、动物细胞培养只能传50代左右，所培养的细胞会衰老死亡5、下列关于植物组织培养与动物细胞培养的叙述正确的是（ ）A二者基本原理是相同的 B二者所需要的培养基是相同的C二者所需要的目的和结果是相同的 D二者的培养过程中都必须添加有机物6、用动、植物成体的体细胞进行离体培养，下列叙述正确妁是（ ）A.都需要用C
7、O2培养箱 B.都需要用液体培养基C.都要在无菌条件下进行 D.都可体现细胞的全能性7、动物细胞培养液和植物组织培养液的共有成分是 （ ）A葡萄糖 B蔗糖 C动物血清 D维生素二、动物体细胞核移植技术和克隆思考：1、动物细胞的全能性与植物细胞相比有什么特点？2、根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达? （一）动物核移植：是将动物的一个细胞的 ，移入一个已经去掉 的卵细胞中，使其重组并发育成一个 ，这个新的胚胎最终发育为 。（二）动物核移植的种类： 、 。（三）克隆动物：用核移植的方法得到的动物。（四）理论基础： 。（五）体细胞核移植的过程：供体 细胞细胞培养体细胞卵巢 细
8、胞减中期. 无核卵母细胞注入 胚胎移植代孕母体生出与供体遗传物质相同的个体细胞融合说明：1、供体：注入去核卵母细胞中的不是供体细胞核，而是 。2、受体：受体细胞为减数第二次分裂中期的 ，此时在透明带内包含着第一极体，在去核的同时连同第一极体一并去掉。3、重组细胞发育成一个新个体，体现了 的全能性而非动物细胞的全能性。4、用卵母细胞做受体细胞原因：a卵母细胞体积大，便于操作；b卵黄多，营养物质丰富；c易激发细胞核全能性的表达。5、克隆属于 繁殖，产生新个体的性别、绝大多数性状与 亲本一致。6、融合方法：电刺激（或用 的病毒）7、应用的技术： 技术、 技术、 技术。思考：1、 体细胞核移植和胚胎核
9、移植比较那个难度低一点？为什么？2用于核移植的细胞一般都选用10代以内的细胞，这是为什么？3核移植获得克隆动物是百分之百对供体细胞的复制吗？4、克隆羊多利的成功证明了什么？（六）体细胞核移植技术的前景：1、在畜牧生产中，可以加速家畜遗传改良进程，促进优良 。2、在保护濒危物种方面，增加动物的 。3、在医疗卫生领域，作为 ，生产许多珍贵的医用蛋白。4、治疗人类疾病时，转基因克隆动物的细胞、组织、器官，可以作为 的供体。5、人的核移植胚胎干细胞经诱导分化，形成相应的组织、器官后，用于组织、器官的移植。6、研究克隆动物和克隆细胞可使人类更深入地了解胚胎发育及衰老过程，用克隆动物做疾病模型，能使人们更
10、好的追踪研究疾病的发展经过和治疗疾病。（七）体细胞核移植技术存在的问题：1、 成功率比较 2、 绝大多数动物还存在许多克隆动物表现出 缺陷，如体型过大，异常肥胖，发育困难，脏器缺陷，免疫失调等3、 克隆动物食品的 问题也存在质疑【当堂检测】1、生物技术的发展速度很快，已灭绝生物的“复生”将不再是神话。如果世界上最后一只野驴刚死亡，以下较易成功“复生”野驴的方法是 （ ）A将野驴的体细胞取出，利用组织培养技术，经脱分化、再分化，培育成新个体B将野驴的体细胞两两融合，再经组织培养培育成新个体C取出野驴的体细胞核移植到母家驴的去核卵细胞中，经孕育培养成新个体D将野驴的基因导入家驴的受精卵中，培育成新
11、个体2、如果用动物的细胞进行克隆实验应该选择的细胞核不能是（ ）A、乳腺细胞的 B、卵细胞的 C、胃腺细胞的 D、囊胚时期的胚胎细胞的3、从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙去掉核的卵细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再植入到另一只母羊丙的子宫内，出生小羊的大多数性状（ ）A、难以预测 B、像甲 C、像乙 D、像丙4、一只羊的卵细胞核被另一只羊的体细胞核置换后，这个卵细胞经过多次分裂，再植入第三只羊的子宫内发育，结果产下一只羊羔。这种克隆技术具有多种用途，但是不能（ ）A、有选择地繁殖某一性别的家畜 B、繁殖家畜中的优秀个体C、用于保存物种 D、改变物种的基因型5、下列属于组织培养但不是克隆的是（ ）A将花粉离体培养成单倍体植株 B芽发育成枝条C根尖分生区发育成成熟区 D上皮细胞无性繁殖产生的细胞群4
2.2动物细胞培养和核移植技术学案
