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1、实验六 细胞培养技术生物教研室生物教研室 朱力宇朱力宇 实验原理实验原理 一、一、什么是细胞培养？什么是细胞培养？体外培养（体外培养（In vitro）*细胞培养细胞培养：指从体内取出组织、细胞在体外模拟体内生理环境，在无菌、指从体内取出组织、细胞在体外模拟体内生理环境，在无菌、适当温度和一定的营养条件下，使之生存和生长，并维持其结适当温度和一定的营养条件下，使之生存和生长，并维持其结构和功能特性。构和功能特性。原代培养：原代培养：直接取材于有机体组织的直接取材于有机体组织的细胞培养。细胞培养。传代培养：传代培养：将培养细胞转移到新的容将培养细胞转移到新的容器中，以器中，以1：2的比例继续培养
2、的比例继续培养。制备游离细胞悬液制备游离细胞悬液胰蛋白酶、胶原酶、胰蛋白酶、胶原酶、EDTA，破坏细胞间连接破坏细胞间连接分离出不同分离出不同类型的细胞类型的细胞原代培养原代培养传代培养传代培养细胞培养细胞培养细胞分离细胞分离1、离心、离心2、利用细胞自身的黏附力、利用细胞自身的黏附力3、抗体吸附、抗体吸附4、流式细胞仪（、流式细胞仪（FCM）5、其他、其他 贴附生长型细胞贴附生长型细胞 悬浮生长型细胞悬浮生长型细胞 二、培养细胞的生长方式及类型二、培养细胞的生长方式及类型成纤维样细胞成纤维样细胞上皮样细胞：上皮样细胞：都可连成单层都可连成单层悬浮生长型细胞悬浮生长型细胞三、培养细胞的条件三、
3、培养细胞的条件132生生 存存 环环 境境温度温度气相气相PH仪器及耗材仪器及耗材细胞培养室细胞培养室超净工作台超净工作台 CO2培养箱 CO2培养箱设定的条件培养箱设定的条件为为 37，5CO2。提供的提供的3个环境：个环境：温度，气体，湿度温度，气体，湿度 CO2培养箱培养箱超净工作台超净工作台倒置相差显微镜倒置相差显微镜 倒置显微镜倒置显微镜培养瓶和培养板培养基及试剂培养基及试剂消化液消化液培养基培养基血清血清扫描电镜法显示支原体，附于细胞表面众多的圆形颗粒为支原体污染问题污染问题 1.支原体污染支原体污染2.细菌污染细菌污染:能改变培养液的能改变培养液的pH值值，使培养液变混浊。，使培
4、养液变混浊。细菌生长迅速细菌生长迅速，能消耗营养液和产生毒素。，能消耗营养液和产生毒素。抑制细胞的生长抑制细胞的生长，毒性大的细菌可很快，毒性大的细菌可很快导致导致细胞崩解死亡。细胞崩解死亡。细菌细菌细胞细胞3.真菌污染真菌污染实例实例干预因素：干预因素：药物、药物、毒物、毒物、物理因素、物理因素、生物作用、生物作用、相互作用、相互作用、其他其他直接分离的细胞直接分离的细胞原代培养的细胞原代培养的细胞传代培养的细胞传代培养的细胞可能的结果可能的结果1、2、3、例如：三氧化二砷对白血病细胞的作用例如：三氧化二砷对白血病细胞的作用各种实验报告要求报告要求实验目的：实验目的：实验材料和器材：实验材料和器材：实验流程（或实验操作）：实验流程（或实验操作）：用到细胞培养用到细胞培养实验结果实验结果（可能的结果及分析）（可能的结果及分析）1、2、3、
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