【大学实验】动物组织石蜡切片制作

《【大学实验】动物组织石蜡切片制作》由会员分享，可在线阅读，更多相关《【大学实验】动物组织石蜡切片制作（16页珍藏版）》请在装配图网上搜索。

1、动物组织石蜡切片制作动物组织石蜡切片制作 http:/ 制作实验动物的组织切片并染色，掌握动制作实验动物的组织切片并染色，掌握动物组织制片技术物组织制片技术 http:/ 1动物的组织。动物的组织。2 2器材和仪器：切片机、展片仪、毛笔、载器材和仪器：切片机、展片仪、毛笔、载玻片、盖玻片、烤箱、显微镜。玻片、盖玻片、烤箱、显微镜。3 3试剂：试剂：60%60%乙醇、乙醇、70%70%乙醇、乙醇、80%80%乙醇、乙醇、90%90%乙醇、乙醇、95%95%乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡、乙醇、无水乙醇、二甲苯、石蜡、中性树胶。中性树胶。http:/ 1取材。取材。2 2固定。固定。3 3脱水、透明

2、及浸蜡（具体步骤见表）。脱水、透明及浸蜡（具体步骤见表）。4 4包埋包埋http:/ 骤骤 操作项目操作项目 小小 鼠鼠 大大 鼠鼠 家家 兔兔（1 1）60%60%乙醇乙醇15min15min20min20min30min30min（2 2）70%70%乙醇乙醇15min15min20min20min30min30min（3 3）80%80%乙醇乙醇20min20min30min30min40min40min（4 4）90%90%乙醇乙醇20min20min30min30min40min40min（5 5）95%95%乙醇乙醇20min20min30min30min40min40min（6

3、6）95%95%乙醇乙醇20min20min20min20min30min30min（7 7）无水乙醇无水乙醇20min20min30min30min40min40min（8 8）无水乙醇无水乙醇20min20min30min30min40min40min（9 9）二甲苯二甲苯 5min5min 8min8min10min10min（1010）二甲苯二甲苯 3min3min 5min5min 5min5min（1111）石蜡石蜡10min10min15min15min20min20min（1212）石蜡石蜡20min20min25min25min30min30min（1313）石蜡石蜡30mi

4、n30min30min30min40min40minhttp:/ 用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切用切片机将石蜡包埋的组织块（蜡块）制成适宜厚度的切片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚片，是目前在病理学科中最常用的一种制片方法。切片厚度为一般度为一般46m46m。【切片前的准备切片前的准备】1 1、修切蜡块、修切蜡块 切片前应先修块，即切去组织周围过多的切片前应先修块，即切去组织周围过多的石蜡，一般留下约石蜡，一般留下约2mm2mm宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留宽度的蜡边为宜。注意蜡块不能留得太窄，在切片时易损坏组织；蜡边不能留得太多，否则得太窄，在切片时易损坏

5、组织；蜡边不能留得太多，否则影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却影响展片。室温过高时，可将修好的蜡块放到冰箱中冷却一定时间。一定时间。2 2、切片用品准备、切片用品准备（1 1）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一）切片刀：预先磨好切片刀备用或切片前更换新的一次性切片。次性切片。（2 2）载物片：载物片经清洁液、）载物片：载物片经清洁液、95%95%乙醇处理后备用。乙醇处理后备用。（3 3）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度。）展片仪：加入温水，接通电源，调整温度。（4 4）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。）其他用品：准备好毛笔、记号笔、镊子、冰块等。htt

6、p:/ 1将切片刀装在刀架上，后将蜡块装在切片机固定装置上。调整蜡块与刀至将切片刀装在刀架上，后将蜡块装在切片机固定装置上。调整蜡块与刀至合适位置（刀刃与蜡块切面呈合适位置（刀刃与蜡块切面呈5 5夹角）旋转式切片机切取组织，是由下向上夹角）旋转式切片机切取组织，是由下向上切，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的部分切，为得到完整的切片，防止组织出现刀纹裂缝，应将组织硬脆难切的部分放在上端（如皮肤组织，应将表皮部分向上。而胃肠等组织，应将浆膜面朝放在上端（如皮肤组织，应将表皮部分向上。而胃肠等组织，应将浆膜面朝上）。上）。2 2左手执手笔，右手旋转切片机旋转轮。先粗切标本，

7、直到暴露出组织最大左手执手笔，右手旋转切片机旋转轮。先粗切标本，直到暴露出组织最大切面（但对小标本不要修切得太多，以免将整个组织块修切掉）。再连续旋切面（但对小标本不要修切得太多，以免将整个组织块修切掉）。再连续旋转切出蜡带，左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起，右手用镊子夹起蜡带上端，转切出蜡带，左手持毛笔将蜡片带下端轻轻托起，右手用镊子夹起蜡带上端，正面向上放入展片仪水盒内，展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整，一般正面向上放入展片仪水盒内，展片温度根据使用的石蜡熔点进行调整，一般水温为水温为4545左右，待蜡片带中的组织展平后，即可进行分片和捞片。对于展左右，待蜡片带中的组织展平后，即可进行分片

8、和捞片。对于展片困难的切片经片困难的切片经30%30%的乙醇初展后，再用载玻片捞起蜡带放人展片仪水盒内可的乙醇初展后，再用载玻片捞起蜡带放人展片仪水盒内可使切片更易展平。在夏季切片时可用冰块冷却切片刀和组织块，减少切片刀使切片更易展平。在夏季切片时可用冰块冷却切片刀和组织块，减少切片刀与组织块在切片过程中产生的热时，使石蜡保持合适的硬度以利于切片。与组织块在切片过程中产生的热时，使石蜡保持合适的硬度以利于切片。3 3捞起切片后，写上编号。捞片时注意切片的位置，一般切片的中心位于载捞起切片后，写上编号。捞片时注意切片的位置，一般切片的中心位于载物片右侧物片右侧1/31/3与与2/32/3交界处为

9、佳，并注意整齐美观。交界处为佳，并注意整齐美观。4 4烤箱烤箱6060左右烘烤切片左右烘烤切片30min30min，对血凝块和皮肤组织应及时烤片，烤片温，对血凝块和皮肤组织应及时烤片，烤片温度应稍低；脑组织切片捞出后直立晾干，再烤片，否则产生气泡。度应稍低；脑组织切片捞出后直立晾干，再烤片，否则产生气泡。http:/ 石蜡切片的制作石蜡切片的制作1 16 6微米。制作大批的或是连续的切片。长期保存。微米。制作大批的或是连续的切片。长期保存。一、切片前的准备：一、切片前的准备：1 1、恒温水浴锅首先预热至、恒温水浴锅首先预热至35354040。2 2、蜡块整修，暴露组织并修平，减少刀的磨。、蜡块

10、整修，暴露组织并修平，减少刀的磨。3 3载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象。涂粘片载玻片应事先洗涤干净，无油腻和不透明现象。涂粘片剂。剂。4 4、将锋利的刀片，调整角度和位置，以、将锋利的刀片，调整角度和位置，以2020-30-30为佳。为佳。5 5、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。、备用小型毛笔、小型无钩镊子、铅笔。http:/ 石蜡切片的制作石蜡切片的制作二、切片的步骤：1、将蜡块固定于切片机头上的夹座内，2、调整蜡块组织切面恰好与刀口接触，旋紧刀架3、根据需要调整切片厚度。4、修整切片，直到切出完整的最大组织切面后，再行切制。5、切下的切片带，用毛笔从刀口向上挑起，拉下切片带ht

11、tp:/ 石蜡切片的制作石蜡切片的制作三、切片的注意事项三、切片的注意事项1 1、切片质量的好坏，与技术熟练程度和切片机、切片质量的好坏，与技术熟练程度和切片机、切片刀的好坏有关外。切片刀的好坏有关外。2 2、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产、切片机的各个零件和螺丝应旋紧，否则将会产生震动。生震动。3 3、在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过、在摇动切片机时，用力要求均匀一致，不宜过重过猛，否则造成切片厚薄不均。或空洞现象。重过猛，否则造成切片厚薄不均。或空洞现象。4 4、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却，、在夏秋季节进行切片时，应使用冰块加强冷却，可保持石蜡的硬度，减少切

12、片的褶皱。可保持石蜡的硬度，减少切片的褶皱。http:/ 石蜡切片的制作石蜡切片的制作四、贴片：四、贴片：1 1、将单张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，、将单张切片，用镊子夹住蜡片的一边并提起，铺于恒温水中（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻铺于恒温水中（光亮的一面朝下）立即用毛笔轻轻拉展以切片无皱褶为最好。轻拉展以切片无皱褶为最好。2 2、待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片、待切片在恒温水内充分摊开展平后，将载玻片垂直插入水中轻靠切片，随即将玻片直立提起，垂直插入水中轻靠切片，随即将玻片直立提起，拨正切片位置。拨正切片位置。3 3、用铅笔在玻片的毛玻璃上写上标本编号，字要、用铅笔在玻片的毛

13、玻璃上写上标本编号，字要写得小而清楚、端正。写得小而清楚、端正。4 4、贴好的切片置于、贴好的切片置于6060恒温箱内干燥恒温箱内干燥2 2小时，蛋小时，蛋白质凝固后即可染色。白质凝固后即可染色。http:/ 1 石蜡切片的制做技术石蜡切片的制做技术 试剂与器材：甲醛，酒精，二甲苯，苏木精，伊试剂与器材：甲醛，酒精，二甲苯，苏木精，伊红，中性树胶，双面刀片，蜡板，镊子，滤纸，红，中性树胶，双面刀片，蜡板，镊子，滤纸，200ml200ml容量瓶（广口）、玻璃标本缸，载玻片，盖容量瓶（广口）、玻璃标本缸，载玻片，盖玻片，染色缸，毛笔，新鲜鸡蛋，甘油玻片，染色缸，毛笔，新鲜鸡蛋，甘油空闲时间：参观冰

14、冻切片的制做空闲时间：参观冰冻切片的制做石蜡切片的制做程序（详细过程请查看讲义）石蜡切片的制做程序（详细过程请查看讲义）组织取材组织取材2 2毫米厚度，固定于福尔马林毫米厚度，固定于福尔马林2 2小时。小时。组织流水冲洗组织流水冲洗1 12 2小时。小时。http:/ 1 石蜡切片的制做技术石蜡切片的制做技术 7070酒精酒精2 24 4小时。小时。8585酒精酒精2 24 4小时。小时。9595酒精（酒精（）2 23 3小时。小时。9595酒精（酒精（）1 12 2小时。小时。100100酒精（酒精（）1 12 2小时。小时。100100酒精（酒精（）0.50.51 1小时。小时。10010

15、0酒精：二甲苯（酒精：二甲苯（1 1：1 1）0.50.51 1小时。小时。二甲苯（二甲苯（）20203030分钟。分钟。二甲苯（二甲苯（）10102020分钟。分钟。浸蜡（浸蜡（）4040分钟。分钟。浸蜡（浸蜡（）4040分钟。分钟。组织包埋。组织包埋。蜡块整修。切片。贴好的切片置于蜡块整修。切片。贴好的切片置于6060恒温箱内恒温箱内干燥干燥2 2小时。小时。http:/ HE2 HE染色技术染色技术 二甲苯二甲苯脱蜡脱蜡 1010分钟。分钟。二甲苯二甲苯脱蜡脱蜡 1010分钟。分钟。100100酒精酒精225 5分钟。分钟。100100酒精酒精225 5分钟。分钟。9595酒精酒精1 1

16、2 2分钟。分钟。9090酒精酒精1 12 2分钟。分钟。8585酒精酒精1 12 2分钟。分钟。自来水洗自来水洗 片刻片刻蒸馏水蒸馏水 片刻片刻苏木素苏木素 10101515分钟分钟自来水洗自来水洗 1 12 2分钟分钟1%1%盐酸酒精分化盐酸酒精分化 0.50.51 1分钟分钟流水冲洗流水冲洗 蓝化蓝化1010分钟分钟至数小时至数小时http:/ HE2 HE染色技术染色技术 蒸馏水冲洗蒸馏水冲洗 1 12 2分钟。分钟。7070酒精酒精1 12 2分钟。分钟。8585酒精酒精1 12 2分钟。分钟。9090酒精酒精1 12 2分钟。分钟。伊红（醇溶）伊红（醇溶）5-205-20秒秒9595酒精（酒精（）1 1秒秒9595酒精（酒精（）1 1秒秒100100酒精（酒精（）1 12 2分钟。分钟。100100酒精（酒精（）3 35 5分钟。分钟。二甲苯（二甲苯（）5-105-10分钟。分钟。二甲苯（二甲苯（）5-105-10分钟。分钟。中性树胶封片。中性树胶封片。http:/