培养基和试剂质量控制方法

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1、培培养养基和基和试剂质试剂质量控制方法量控制方法GB 4789.28-201X北京陆桥技术有限责任公司北京陆桥技术有限责任公司 技术服务电话：技术服务电话：0 0532-82689263532-82689263 技术部邮箱：技术部邮箱： 销售服务电话：销售服务电话：0 0532-82689263532-82689263北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司主要内容主要内容 北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司1、培养基简介、培养基简介 培养基培养基液体、半固体或固体形式的、含天然或合成成分，用于保证微生物繁殖（含或不含某类微生物的抑菌剂）、鉴定或保持其活力的物质。1.1

2、定义定义北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司1、培养基简介、培养基简介1.2.1 1.2.1 按组成成分分类按组成成分分类1.2.2 1.2.2 按状态分类按状态分类1.2.3 1.2.3 按用途分类按用途分类1.2.4 1.2.4 按制备方法分类按制备方法分类1.2 分类分类北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司1、培养基简介、培养基简介1.2.1 1.2.1 按组成成分分类按组成成分分类纯化学培养基：纯化学培养基：仅含有已知分子结构和纯度的化仅含有已知分子结构和纯度的化学成分的培养基。学成分的培养基。未定义和部分定义的化学培养基：未定义和部分定义的化学培养基：全部或部

3、分由全部或部分由天然物质，加工过的物质或其他不纯的化学物质天然物质，加工过的物质或其他不纯的化学物质构成的培养基。构成的培养基。北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司1、培养基简介、培养基简介1.2.2 1.2.2 按状态分类按状态分类l 液体培养基：液体培养基：一种或多种成分组成的水溶液。如：一种或多种成分组成的水溶液。如：脑心浸出液肉汤、营养肉汤；脑心浸出液肉汤、营养肉汤；l 半固体培养基和固体培养基：半固体培养基和固体培养基：含一定量固化物（琼含一定量固化物（琼脂、明胶等）的液体培养基。脂、明胶等）的液体培养基。半固体培养基：半固体培养基：含含0.2%-0.8%0.2%-0.8

4、%琼脂粉，多用于细菌的动琼脂粉，多用于细菌的动力观察、菌种传代保存及贮运细菌标本材料等。力观察、菌种传代保存及贮运细菌标本材料等。固体培养基：固体培养基：含含1.5%-2%1.5%-2%琼脂，多用于细菌的分离、鉴琼脂，多用于细菌的分离、鉴定、菌种保存定、菌种保存北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司分类分类定义定义举例举例增菌培养基增菌培养基为微生物繁殖提供特定的生长环境，通常为液体为微生物繁殖提供特定的生长环境，通常为液体细分细分选择性增菌选择性增菌允许特定微生物繁殖，部分或全部抑制其他微生物生长允许特定微生物繁殖，部分或全部抑制其他微生物生长TTB、SC非选择性增菌非选择性增菌能

5、使多种微生物生长的培养基能使多种微生物生长的培养基BHI、NB分离培养基分离培养基支持微生物生长的固体或半固态培养基支持微生物生长的固体或半固态培养基细分细分选择性分离选择性分离支持特定微生物生长而抑制其它微生物生长的分离培养基支持特定微生物生长而抑制其它微生物生长的分离培养基XLD、BS非选择性分离非选择性分离对微生物没有选择性抑制的分离培养基对微生物没有选择性抑制的分离培养基NA计数培养基计数培养基能对微生物定量的选择性或非选择的培养基（注：可包含复苏、增菌能对微生物定量的选择性或非选择的培养基（注：可包含复苏、增菌等特性）等特性）MYP、PCA鉴别培养基鉴别培养基（特异性培养基）（特异性

6、培养基）能进行一项或多项生理或生化特性鉴定的培养基能进行一项或多项生理或生化特性鉴定的培养基麦康凯琼脂麦康凯琼脂鉴定培养基鉴定培养基能产生一个特定的鉴定反应而不需要进一步确证实验的培养基能产生一个特定的鉴定反应而不需要进一步确证实验的培养基蛋白胨水蛋白胨水确证培养基确证培养基经复苏、分离和增菌后，对微生物部分或完全鉴定或鉴别的培养基经复苏、分离和增菌后，对微生物部分或完全鉴定或鉴别的培养基BGLB肉汤肉汤运输培养基运输培养基取样后处理前保持微生物活性且不允许明显增殖的培养基取样后处理前保持微生物活性且不允许明显增殖的培养基缓冲甘油缓冲甘油-氯化氯化钠溶液钠溶液保藏培养基保藏培养基一定时期内保护

7、和维持微生物活性，防止长期保存造成不利影响，或一定时期内保护和维持微生物活性，防止长期保存造成不利影响，或使微生物在长期保存后容易复苏的培养基使微生物在长期保存后容易复苏的培养基营养琼脂斜面营养琼脂斜面复苏培养基复苏培养基能使受损或应激的微生物修复，使其恢复生长能力，但不一定促进微能使受损或应激的微生物修复，使其恢复生长能力，但不一定促进微生物繁殖的培养基生物繁殖的培养基悬浮培养基悬浮培养基将测试样本的微生物分散到液相中，不产生增值或抑制作用的培养基将测试样本的微生物分散到液相中，不产生增值或抑制作用的培养基磷酸盐缓冲液磷酸盐缓冲液PBS1.2.3 按用途分类按用途分类北京北京陆桥陆桥技技术术

8、有限有限责责任公司任公司1.2.4 1.2.4 按制备方法分类按制备方法分类即用型培养基：即用型培养基：以即用形式或融化后即用以即用形式或融化后即用形式置于容器内供应的液体、半固体和固形式置于容器内供应的液体、半固体和固体培养基体培养基脱水合成培养基：脱水合成培养基：使用前需加水和进行处使用前需加水和进行处理的干燥培养基理的干燥培养基自制培养基：自制培养基：依据完整配方的具体成份配依据完整配方的具体成份配制的培养基制的培养基1、培养基简介、培养基简介北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司2、培养基质量保证、培养基质量保证质量保证质量保证培养基生产企培养基生产企业业提供文件提供文件 标

9、明培养基各种成分、添加标明培养基各种成分、添加成分名称及产品编号；成分名称及产品编号；批号批号 培养基最终培养基最终pHpH值值 储藏信息和有效期储藏信息和有效期 质控证书和测试菌株质控证书和测试菌株 性能测定结果及验收标准性能测定结果及验收标准 必要的安全和必要的安全和/或危害数据或危害数据质量保证质量保证培养基培养基使用者使用者每批培养基，应验收：每批培养基，应验收：产品合格证明产品合格证明 包装的完整性包装的完整性 产品的有效期产品的有效期 生产企业文件的提供生产企业文件的提供 记录接受日期记录接受日期北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司2、培养基质量保证、培养基质量保证2.

10、1 脱水合成培养基脱水合成培养基制备流程制备流程北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司2.2脱水合成培养基脱水合成培养基制备注意事项制备注意事项概述：严格按照厂商提供的使用说明配置。概述：严格按照厂商提供的使用说明配置。水：实验用水的电导率在水：实验用水的电导率在25时不应超过时不应超过25S/cm，相当于电阻率相当于电阻率0.4Mcm。微生物污染微生物污染103/mL，最好在，最好在102/mL以下；以下；定期检定期检查实验用水是否受到微生物污染查实验用水是否受到微生物污染。2、培养基质量保证、培养基质量保证北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司2、培养基质量保证、培养基

11、质量保证2.2脱水合成培养基脱水合成培养基制备注意事项制备注意事项 pH值测定和调整值测定和调整：u 使用使用pH计测定；计测定；u 灭菌后冷却至灭菌后冷却至25时测定时测定pH值；值；u pH值应在标准值应在标准pH0.2范围内；范围内；u 使用使用1mol/L的氢氧化钠或盐酸溶液调整培养基的的氢氧化钠或盐酸溶液调整培养基的pH值。值。（如需灭菌后调整（如需灭菌后调整pH值，则使用灭菌溶液）值，则使用灭菌溶液）北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司2、培养基质量保证、培养基质量保证灭菌方式：灭菌方式：湿热灭菌；湿热灭菌；煮沸灭菌；煮沸灭菌；过滤除菌：过滤除菌：注意避免过度加热注意避

12、免过度加热：1.1.大容积（大容积（1000mL)1000mL)时容易过度加热；时容易过度加热；2.2.放置物品太多或灭菌后未及时冷却。放置物品太多或灭菌后未及时冷却。2.2脱水合成培养基脱水合成培养基制备注意事项制备注意事项SC正常加热 SC过度加热北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司2.3脱水合成培养基脱水合成培养基使用注意事项使用注意事项 灭菌或复溶后培养基放入灭菌或复溶后培养基放入47-5047-50的恒温水的恒温水浴锅中，冷却保温，直至使用；浴锅中，冷却保温，直至使用；培养基只可复融一次，融化后的培养基应尽快培养基只可复融一次，融化后的培养基应尽快使用，放置时间不应超过使

13、用，放置时间不应超过4 4小时小时，未使用完的培，未使用完的培养基养基不能不能重新凝固留待下次使用。重新凝固留待下次使用。个别培养基使用前需要脱氧：个别培养基使用前需要脱氧：松开容器盖子，沸松开容器盖子，沸水浴或蒸气浴中加热水浴或蒸气浴中加热15min15min，盖紧盖子，迅速冷却，盖紧盖子，迅速冷却，如如 FTFT培养基。培养基。2、培养基质量保证、培养基质量保证北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司2、培养基质量保证、培养基质量保证2.4菌株定义菌株定义标准菌株标准菌株：至少定义到属或种水平的菌株，按菌株特至少定义到属或种水平的菌株，按菌株特性进行分类和描述，性进行分类和描述，官

14、方菌种保藏机构官方菌种保藏机构获得，最好来源获得，最好来源于食品或水；于食品或水；标准储备菌株：标准储备菌株：将实验室获得或供应商提供的标准将实验室获得或供应商提供的标准菌株转接一代后得到的一套完全相同的独立菌株；菌株转接一代后得到的一套完全相同的独立菌株；储备菌株：储备菌株：从标准储备菌株转接第一代的培养物；从标准储备菌株转接第一代的培养物；工作菌株：工作菌株：由标准储备菌株或储备菌株，或由经证明由标准储备菌株或储备菌株，或由经证明或未证明的标准物质转接一代获得的菌株或未证明的标准物质转接一代获得的菌株指在均一固定的浓度中含有具活性的定量化菌种，经证明的标准物是指其浓度已经证明。北京北京陆桥

15、陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司2、培养基质量保证、培养基质量保证 标准标准/质控菌株主要来源质控菌株主要来源美国菌种保藏中心美国菌种保藏中心American Type Culture Collection Center,ATCC（英国）国家菌种保藏中心（英国）国家菌种保藏中心(UK)National Center for Typical Culture Collection,NCTC中国工业微生物菌种保藏管理中心中国工业微生物菌种保藏管理中心China Center for Industrial Culture Collection,CICC中国医学微生物菌种保藏中心中国医学微生物菌种保

16、藏中心China Center for Medical Culture Collection,CMCC注：注：陆桥均可代购以上菌株陆桥均可代购以上菌株北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司ATCC菌株（进口）CMCC菌株（国产）注：ATCC菌株提供证书，可以自行到其网站下载。2、培养基质量保证、培养基质量保证北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司2、培养基质量保证、培养基质量保证标准菌株标准菌株(冻干菌种）冻干菌种）转种活化转种活化标准储备菌株标准储备菌株（-80-80冰箱保存的培养物）冰箱保存的培养物）转种活化转种活化储备菌株储备菌株（44冰箱保存的培养物）冰箱保存的培养

17、物）转种活化转种活化工作菌株工作菌株（用于培养基微生物质控的新鲜培养物）（用于培养基微生物质控的新鲜培养物）详细请参考附录详细请参考附录C C北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司获得标准菌株验证和文件归档依据生产商指引进行复苏在5%的血琼脂、TSA或其它适合的固体培养基上进行分离验证菌株的纯度和特性符合用适合的培养基制备菌悬液分装进行冻存或冻干NO获得储存菌株YES通常悬浮于营养肉汤中适宜时间进行复苏验证菌落形态和革兰氏染色或用生化试验进行鉴定例如：TSB添加10%-15%甘油作为冷冻保护培养基在不高于-70低温冷冻保存可延长保存的时间。禁止采用较高的温度保存。北京北京陆桥陆桥技技

18、术术有限有限责责任公司任公司标准储备菌株迅速解冻在适合的固体培养基上培养=工作菌株验证菌株的纯度和形态NO制备用于测试的工作菌株符合YES在适合的固体培养基上培养验证菌株的纯度和形态符合YES接种到合适的培养基或冻存菌悬液=工作菌株贮存物或贮存培养物在适合的培养基上分离=工作菌株验证纯度制备用于测试的工作菌株YESNONO符合此流程更合适此流程更合适北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司3、培养基质量要求、培养基质量要求基本基本(感官和理化感官和理化)要求：要求：分装的量和分装的量和/或厚度或厚度外观、色泽和均一性外观、色泽和均一性琼脂凝胶的硬度琼脂凝胶的硬度水分含量水分含量2020

19、 -25-25 的的pHpH值值缓冲能力缓冲能力微生物要求：微生物要求：微生物污染测试（只适用微生物污染测试（只适用于即用型培养基）于即用型培养基）生长特性生长特性 1 1、生长率、生长率 2 2、选择性、选择性 3 3、特异性、特异性 4 4、抗菌试验特性、抗菌试验特性注：详细参照注：详细参照GB 4789.28GB 4789.28附录附录F F培培养基质量控制标准养基质量控制标准性能评价和结果解释性能评价和结果解释：1、所有测试菌株的性能测试达到标准，则该批培养基的性能测试结果符合规定；、所有测试菌株的性能测试达到标准，则该批培养基的性能测试结果符合规定；2、基本要求基本要求和和微生物要求

20、微生物要求均符合规定，则该批培养基可被接受。均符合规定，则该批培养基可被接受。北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司质质构构仪仪水分测定仪水分测定仪电极式电极式pH计计3、培养基质量要求、培养基质量要求北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司3、培养基质量要求、培养基质量要求生长特性概述生长特性概述 a a）定量方法；）定量方法；b b）半定量方法；）半定量方法；c c）定性方法。）定性方法。注：注：使用以上方法时，应使用使用以上方法时，应使用参考培养基参考培养基进行对照，有助于结果进行对照，有助于结果的解释。的解释。选择近期批次中质量良好的，选择近期批次中质量良好的，或具有

21、长期稳定性的批次培养基或即用型培养基或具有长期稳定性的批次培养基或即用型培养基通常可满足实验室的培养基性能检测要求培养基生产商自制培养基新培养基或新供应商产品其他特殊要求培养基性能测试第一法北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法4.14.1定量方法定量方法悬浮培养基和运输培养基悬浮培养基和运输培养基非选择性固体分离和计数培养基非选择性固体分离和计数培养基选择性固体分离和计数培养基选择性固体分离和计数培养基选择性固体分离和计数培养基选择性固体分离和计数培养基4.24.2半定量方法半定量方法选择性液体增菌培养基选择性液体增菌培养基非选择性液体增菌

22、培养基非选择性液体增菌培养基选择性液体计数培养基选择性液体计数培养基非选择性固体分离和计数培养基非选择性固体分离和计数培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法选择性固体分离和计数培养基选择性固体分离和计数培养基4.34.3定性方法定性方法Mueller HintonMueller Hinton血琼脂血琼脂鉴定培养基和实验试剂鉴定培养基和实验试剂悬浮培养基和运输培养基悬浮培养基和运输培养基非选择性固体分离和计数培养基非选择性固体分离和计数培养基非选择性液体增菌培养基非选择性液体增菌培养基选择性液体计数培养基选择性液体计数培养基选择性液体增菌

23、培养基选择性液体增菌培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司将将适当适当稀释度的目标菌稀释度的目标菌0.1mL分别涂布于待测培养基平板和参考分别涂布于待测培养基平板和参考培养基平板培养基平板（可用螺旋平板法或倾注法可用螺旋平板法或倾注法），经培养后，计算，经培养后，计算PR。PR=NS/NO PR：生长率；：生长率；NS：待测培养基平板上得到的菌落总数；：待测培养基平板上得到的菌落总数；NO：参考培养基平板上获得的菌落总数，应：参考培养基平板上获得的菌落总数，应100CFU。结果解释结果解释：u 非选择性培养基和选择性计数培养基上目标菌的生长率应不小于非选择性培养基和选择性计数培

24、养基上目标菌的生长率应不小于0.70.7；u 选择性分离培养基上目标菌的生长一般不小于选择性分离培养基上目标菌的生长一般不小于0.50.5，最低应为，最低应为0.10.1。接种水平为20CFU200CFU4.1 定量方法定量方法 非选择性、选择性固体计数和分离培养基非选择性、选择性固体计数和分离培养基4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司例：木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂（例：木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂（XLD）测试菌株测试菌株：鼠伤寒沙门氏菌，福氏志贺氏菌；鼠伤寒沙门氏菌，福氏志贺氏菌；10倍稀释，选取适宜稀释度倍稀释，选取适宜稀释度0.1mL涂布涂布

25、XLD平板和平板和TSA参比平参比平板，板，361培养培养 18h24h；计数：计数：PR=NS/NO=(132+139)/2(172+175)/2=0.78XLDTSA鼠伤寒沙门氏菌132,139172,175福氏志贺氏菌130,135182,187PR=NS/NO=(130+135)/2(182+187)/2=0.72鼠伤寒沙门氏菌：鼠伤寒沙门氏菌：福氏志贺氏菌：福氏志贺氏菌：4.1 定量方法定量方法 非选择性、选择性固体计数和分离培养基非选择性、选择性固体计数和分离培养基4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司待测培养基分装试管，待测培养

26、基分装试管，10mL/支（或支（或5mL/支）；支）；目标菌浓度选择：目标菌浓度选择：100CFU1000CFU；接种后，混匀：接种后，混匀：立即吸取立即吸取1mL，用相应培养基倾注平板；，用相应培养基倾注平板；剩余已接菌的待测培养基置剩余已接菌的待测培养基置2025放置放置45min，再吸取，再吸取1mL用相应培养基倾注平板；用相应培养基倾注平板；分别按标准方法中规定的培养条件培养后，计数；分别按标准方法中规定的培养条件培养后，计数；结果观察与解释结果观察与解释待测培养基中的菌落数变化应在待测培养基中的菌落数变化应在50%内内4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法4.1 定量方法定量方法

27、 悬浮培养基和运输培养基悬浮培养基和运输培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司制备制备106108CFU/mL 的工作菌悬液；的工作菌悬液；用用1L接种环划线平板，接种环划线平板，A区用按区用按0.5cm的的间隔划四条平行线，按同样方法在间隔划四条平行线，按同样方法在B、C区区划线，最后在划线，最后在D区划一条连续曲线区划一条连续曲线；培养后，评价菌落的形状、大小和生长密度，培养后，评价菌落的形状、大小和生长密度，计算生长指数计算生长指数G；每条有菌生长的划线记为每条有菌生长的划线记为1分，如果仅一半分，如果仅一半的线有菌生长，记为的线有菌生长，记为0.5分，没有生长或生分，没

28、有生长或生长量少于划线一半的，记为长量少于划线一半的，记为0分；分；结果解释：结果解释：目标菌在培养基上应呈典型的生长，目标目标菌在培养基上应呈典型的生长，目标菌生长指数菌生长指数G大于大于6，培养基可接受；非选，培养基可接受；非选择培养基的择培养基的G值通常较高。值通常较高。4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法4.2 半定量方法半定量方法 非选择性、选择性固体计数和分离培养基非选择性、选择性固体计数和分离培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司非目标菌半定量测试方法非目标菌半定量测试方法用用1L接种环划线平板，划六条平行直线；接种环划线平板，划六条平行直线；每条有菌生长的

29、划线记为每条有菌生长的划线记为1分，如果仅一半分，如果仅一半的线有菌生长，记为的线有菌生长，记为0.5分，没有生长或分，没有生长或生长量少于划线一半的，记为生长量少于划线一半的，记为0分；分；结果解释结果解释 非目标菌的生长应部分或完全被抑制。非目标菌的生长应部分或完全被抑制。注：注：操作时用接种环而不用接种针，接种环完操作时用接种环而不用接种针，接种环完全浸入培养基中，取一满环接种物，接触容器全浸入培养基中，取一满环接种物，接触容器边缘边缘3 3次，去除多余液体。划线时，接种环与琼次，去除多余液体。划线时，接种环与琼脂表面的角度应为脂表面的角度应为2020-30-30，接种环压在琼脂，接种环

30、压在琼脂表面的压力和划线速度前后一致，整个划线应表面的压力和划线速度前后一致，整个划线应快速连续，移取液体培养物时应将接种环伸入快速连续，移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫。培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫。4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法4.2 半定量方法半定量方法 选择性固体计数和分离培养基选择性固体计数和分离培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司培养基分装，培养基分装，10mL/支；支；新鲜菌液新鲜菌液10倍稀释后，选取倍稀释后，选取10CFU100CFU稀释度工作菌悬液；稀释度工作菌悬液；取取1mL工作菌悬液接入待测培养基；

31、工作菌悬液接入待测培养基；同时取同时取1mL倾注平板，做接种量计数用；倾注平板，做接种量计数用；按标准方法中的培养时间和温度进行培养按标准方法中的培养时间和温度进行培养（如增菌时间为（如增菌时间为8h以下，取以下，取10L增菌液倾注平板，再按适合的时间和温度培养，结果按附录增菌液倾注平板，再按适合的时间和温度培养，结果按附录F判定）判定）；结果解释：结果解释：0 表示无混浊；1 表示很轻微的混浊；2 表示严重的混浊目标菌的浊度值应为2.4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法4.2 半定量方法半定量方法 非选择性液体增菌培养基非选择性液体增菌培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任

32、公司4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法4.2 半定量方法半定量方法 非选择性液体增菌培养基非选择性液体增菌培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司混合菌接种：混合菌接种：同时分别将目标菌菌悬液（与待测培养基接种同一稀释度）和非目标菌菌悬液同时分别将目标菌菌悬液（与待测培养基接种同一稀释度）和非目标菌菌悬液（比待测培养基接种小（比待测培养基接种小10100倍稀释度）倍稀释度）1mL倾注平板，用作接种量计数倾注平板，用作接种量计数 非目标菌接种：在待测培养基中接种等量混合菌试管中的非目标菌。非目标菌接种：在待测培养基中接种等量混合菌试管中的非目标菌。培养液接种：培养液接种：混

33、合菌培养液接种：用10L接种环取1环培养后的混合菌培养液，划线接种到特定的选择性平板上；非目标菌培养液接种：吸取10L培养后的非目标菌培养液，涂布到非选择性平板上；计算和结果解释计算和结果解释目标菌在选择性平板上的菌落应10CFU 非目标菌在非选择性平板上的菌落数应100CFU目标菌10CFU100CFU非目标菌1000CFU5000CFU接菌量1mL则表示待测液体培则表示待测液体培养基的生长率良好养基的生长率良好4.2 半定量方法半定量方法 选择性液体增菌培养基选择性液体增菌培养基4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司例：亚硒酸盐胱氨酸增菌

34、液（例：亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）目标菌株目标菌株：鼠伤寒沙门氏菌：鼠伤寒沙门氏菌(10CFU100CFU)；非目标菌：非目标菌：大肠埃希氏菌大肠埃希氏菌(1000CFU5000CFU)铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌(1000CFU5000CFU);混合接种：混合菌混合接种：混合菌1mL接种待测培养基；分别将鼠伤寒沙门氏菌接种待测培养基；分别将鼠伤寒沙门氏菌（10CFU100CFU）和大肠埃希氏菌，铜绿假单胞菌（小）和大肠埃希氏菌，铜绿假单胞菌（小10100倍稀释度）倍稀释度）1mL倾注平板，用于计数；倾注平板，用于计数；非目标菌接种：在待测培养基中接种等量混合菌试管中的非目标菌。非目标菌接种：在

35、待测培养基中接种等量混合菌试管中的非目标菌。4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法4.2 半定量方法半定量方法 选择性液体增菌培养基选择性液体增菌培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司4.2 半定量方法半定量方法 选择性液体增菌培养基选择性液体增菌培养基4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法例：亚硒酸盐胱氨酸增菌液（例：亚硒酸盐胱氨酸增菌液（SC）混合菌培养液的接种：混合菌培养液的接种：用用10L接种环取接种环取1环培养后的混合菌培养液，划环培养后的混合菌培养液，划线接种到特定的选择性平板上；线接种到特定的选择性平板上；非目标菌培养液接种：非目标菌培养液接种：吸取吸取1

36、0L培养后的非目标菌培养液，涂布到非选培养后的非目标菌培养液，涂布到非选择性平板上；择性平板上；计算和结果解释计算和结果解释 鼠伤寒沙门氏菌的菌落应鼠伤寒沙门氏菌的菌落应10CFU 大肠埃希氏菌和铜绿假单胞菌在非选择性平板上的菌落数应大肠埃希氏菌和铜绿假单胞菌在非选择性平板上的菌落数应100CFU北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司目标菌接种：取目标菌接种：取1mL目标菌（目标菌（10CFU100CFU稀释度）接种待测稀释度）接种待测培养基，同时取培养基，同时取1mL倾注平板，用作接种量计数；倾注平板，用作接种量计数；非目标菌接种：取非目标菌接种：取1mL非目标菌（非目标菌（100

37、0CFU5000CFU稀释度）稀释度）接种待测培养基，同时取接种待测培养基，同时取1mL（比待测培养基接种小（比待测培养基接种小10100倍稀倍稀释度）倾注平板，用作接种量计数；释度）倾注平板，用作接种量计数；结果解释：结果解释：0 表示无混浊；1 表示很轻微的混浊；2 表示严重的混浊。如需观察产气，记录小导管收集气体的体积比。u目标菌的浊度值应为2，产气应为1/3或以上；u非目标菌的浊度值应为0或1，无产气现象。4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法4.2 半定量方法半定量方法 选择性液体计数培养基选择性液体计数培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司4、培养基性能测试方法

38、、培养基性能测试方法4.2 半定量方法半定量方法 选择性液体计数培养基选择性液体计数培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司 用用1L接种环取测试菌培养物在测试培养基表面划平行直线（细接种环取测试菌培养物在测试培养基表面划平行直线（细菌），或用接种针直接挑取斜面培养物点种接种（霉菌），按标准规菌），或用接种针直接挑取斜面培养物点种接种（霉菌），按标准规定的培养条件培养。定的培养条件培养。0 表示无生长；表示无生长；1 表示微弱生长；表示微弱生长；2 表示生长良好。表示生长良好。目标菌：目标菌：得分为得分为2，有典型的菌落外观、大小和形态；，有典型的菌落外观、大小和形态；非目标菌（

39、选择性）：非目标菌（选择性）：得分为得分为0或或1；非目标菌（特异性）：非目标菌（特异性）：有典型的菌落外观、大小和形态。有典型的菌落外观、大小和形态。4.3 定性方法定性方法 非选择性、选择性固体计数和分离培养基非选择性、选择性固体计数和分离培养基4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司用用1L接种环取工作菌悬液，接种到待测液体培养基中，培养。接种环取工作菌悬液，接种到待测液体培养基中，培养。结果解释：结果解释：0 表示无混浊；表示无混浊；1 表示很轻微混浊；表示很轻微混浊；2 表示严重混浊。表示严重混浊。目标菌：目标菌：浊度值为浊度值为2；

40、非目标菌：非目标菌：浊度值为浊度值为0或或1；注：有时可以观察到微生物生长后聚集成细胞团，沉积在试管或瓶子底部，发生这种情况时，小心振荡试管后再进行观察。4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法4.3 定性方法定性方法 非选择性、选择性液体增菌和计数培养基非选择性、选择性液体增菌和计数培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司 用用1L接种环取一环工作菌悬液直接接种到待测培养基中，混匀，立接种环取一环工作菌悬液直接接种到待测培养基中，混匀，立即用即用10L接种环取一环划平行线接种平板；接种环取一环划平行线接种平板；剩余已接种菌液的待测培养基置剩余已接种菌液的待测培养基置2025放

41、置放置45min，再用，再用10L接种环取一环划平行线接种平板；接种环取一环划平行线接种平板；按标准方法中规定的培养条件培养。按标准方法中规定的培养条件培养。结果观察与解释结果观察与解释 前后平板上目标菌的生长情况应均为前后平板上目标菌的生长情况应均为良好良好。4.3 定性方法定性方法 悬浮培养基和运输培养基悬浮培养基和运输培养基4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司 纸片扩散法（定性测试）纸片扩散法（定性测试）平板制备：平板制备：倾注平板，厚度为倾注平板，厚度为4mm5mm，使用前适当干燥；，使用前适当干燥；质控菌：接种在血平板上复苏，纯度

42、满意后，用于工作菌悬液制备；质控菌：接种在血平板上复苏，纯度满意后，用于工作菌悬液制备；工作菌悬液：指控菌株悬浮与工作菌悬液：指控菌株悬浮与TSB肉汤中，浊度为肉汤中，浊度为0.5麦氏标准麦氏标准（约（约1108CFU/mL2108CFU/mL）；）；接种：将工作菌悬液涂布与待测的接种：将工作菌悬液涂布与待测的MH平板上，贴上相应的抗生素纸平板上，贴上相应的抗生素纸片（每皿最多片（每皿最多6片），平板翻转后培养。片），平板翻转后培养。注：注：调整菌悬液浊度与接种所有平板的时间不要超过调整菌悬液浊度与接种所有平板的时间不要超过15min。结果观察与解释结果观察与解释 在无反射黑色背景下，观察有无

43、抑菌环。在无反射黑色背景下，观察有无抑菌环。结果解释参照附录结果解释参照附录F培养基质量控制标准。培养基质量控制标准。4.3 定性方法定性方法Mueller-Hinton血琼脂血琼脂4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司4.3.1 液体培养基液体培养基制备制备5McFrand浊度（约为浊度（约为109CFU/mL）的菌悬液；）的菌悬液；接种：吸取接种：吸取0.05mL0.08mL（约（约12滴）至待测培养基内；滴）至待测培养基内；按标准方法中规定的培养条件培养。按标准方法中规定的培养条件培养。结果观察与解释结果观察与解释 需加指示剂的实验在微

44、生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂，需加指示剂的实验在微生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂，在观察结果。在观察结果。例：例：尿素培养基尿素培养基 +：阳性，奇异变形杆菌，培养基变玫红色；：阳性，奇异变形杆菌，培养基变玫红色；：阴性，大肠埃希氏菌，培养基变黄色或不变色：阴性，大肠埃希氏菌，培养基变黄色或不变色 blank +4.3 定性方法定性方法鉴定培养基鉴定培养基4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司4.3.2 半固体培养基半固体培养基用接种针条取新鲜质控菌株，穿刺接种待测培养基内；用接种针条取新鲜质控菌株，穿刺接种待测培养基内；按

45、标准方法中规定的培养条件进行培养；按标准方法中规定的培养条件进行培养；结果观察与解释结果观察与解释 需加指示剂的实验在微生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂，需加指示剂的实验在微生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂，在观察结果。在观察结果。例：例：半固体培养基半固体培养基 +：阳性，单增李斯特氏菌：阳性，单增李斯特氏菌，呈伞状或月牙状生长；，呈伞状或月牙状生长；：阴性，蜡样芽孢杆菌，沿穿刺线生长。：阴性，蜡样芽孢杆菌，沿穿刺线生长。+4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法4.3 定性方法定性方法鉴定培养基鉴定培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司4.3.3 高层斜面培养

46、基和斜面培养基高层斜面培养基和斜面培养基高层斜面（斜面与底层高约为：高层斜面（斜面与底层高约为：2:3）；）；普通斜面（斜面与底层高约为：普通斜面（斜面与底层高约为：3:2）；）；接种：接种：高层斜面：用接种针挑取新鲜质控菌株穿刺接种值琼脂高层，再高层斜面：用接种针挑取新鲜质控菌株穿刺接种值琼脂高层，再在斜面上划在斜面上划“之之”字形；字形；普通斜面：用接种针挑取新鲜质控菌株在斜面上划普通斜面：用接种针挑取新鲜质控菌株在斜面上划“之之”字形；字形；结果观察与解释结果观察与解释 需加指示剂的实验在微生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂，需加指示剂的实验在微生物生长良好的情况下，按顺序加入指示剂

47、，在观察结果。在观察结果。4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法4.3 定性方法定性方法鉴定培养基鉴定培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司质控菌株名称质控菌株名称斜面斜面/底部底部肠炎沙门氏菌（右一）肠炎沙门氏菌（右一）产碱（产碱（红红）/产酸（产酸（黄黄）福氏志贺氏菌福氏志贺氏菌产碱（产碱（红红）/产酸（产酸（黄黄）弗氏柠檬酸杆菌（右二）弗氏柠檬酸杆菌（右二）产酸（产酸（黄黄）/产酸（产酸（黄黄）大肠埃希氏菌（左二）大肠埃希氏菌（左二）产酸（产酸（黄黄）/产酸（产酸（黄黄）产气产气产产H H2 2S S+-+-例：三糖铁琼脂v 灭菌后制成高层斜面备用灭菌后制成高层斜面备

48、用v 空白对照（左一）：橘红色空白对照（左一）：橘红色4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法4.3 定性方法定性方法鉴定培养基鉴定培养基北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司 实验室试剂实验室试剂 1、按照试剂说明书进行实验；、按照试剂说明书进行实验；2、参照标准进行结果观察与解释、参照标准进行结果观察与解释4、培养基性能测试方法、培养基性能测试方法北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司5、测试结果的记录、测试结果的记录制造商信息：制造商信息：培养基制造商或供应商应按客户的要求提供培养基常规信息和相培养基制造商或供应商应按客户的要求提供培养基常规信息和相关测试菌株生长特

49、性信息。关测试菌株生长特性信息。溯源性溯源性:按照质量体系的要求，对所有培养基性能测试的数据归档，并在按照质量体系的要求，对所有培养基性能测试的数据归档，并在有效期内进行适当的保存。建议使用内部质量控制单进行文件记录并有效期内进行适当的保存。建议使用内部质量控制单进行文件记录并评价测试结果。评价测试结果。北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司产品质量检验报告产品质量检验报告产品产品 MSDS北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司5、测试结果的记录、测试结果的记录北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司5、测试结果的记录、测试结果的记录北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限

50、责责任公司任公司用于产品内用于产品内部质量控制部质量控制的评价测试的评价测试结果和产品结果和产品信息。信息。北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司1、培养基不能凝固、培养基不能凝固 制备过程中过度加热；制备过程中过度加热；低低pH值造成培养基酸解；值造成培养基酸解；称量不正确；称量不正确；琼脂未完全溶解；琼脂未完全溶解；培养基成分未充分混匀。培养基成分未充分混匀。培养基常见问题培养基常见问题北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司2、pH值不正确值不正确 制备过程中过度加热；制备过程中过度加热；水质不佳；水质不佳；外部化学物质污染；外部化学物质污染；测定测定pH值时温度不正确

51、；值时温度不正确；pH计未正确校准；计未正确校准；脱水培养基质量差脱水培养基质量差.培养基常见问题培养基常见问题北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司3、颜色异常、颜色异常 制备过程中过度加热；制备过程中过度加热；水质不佳；水质不佳；pH不正确；不正确；外来污染；外来污染；脱水培养基质量差。脱水培养基质量差。培养基常见问题培养基常见问题北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司4、产生沉淀、产生沉淀 制备过程中过度加热；制备过程中过度加热；水质不佳；水质不佳；脱水培养基脱水培养基 质量差；质量差；pH值未正确控制；值未正确控制；原料中的杂质。原料中的杂质。培养基常见问题培养基常

52、见问题北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司5、培养基出现抑制、培养基出现抑制/低的生长率低的生长率制备过程中过度加热；制备过程中过度加热；脱水培养基质量差；脱水培养基质量差；水质不佳；水质不佳；使用成分不正确，如：成分称量不准，添加剂浓度不正确；使用成分不正确，如：成分称量不准，添加剂浓度不正确；制备容器或水中的有毒残留物。制备容器或水中的有毒残留物。培养基常见问题培养基常见问题北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司6、选择性差、选择性差制备过程中过度加热；制备过程中过度加热；脱水培养基质量差；脱水培养基质量差；配方使用不对；配方使用不对；添加成分的加入不正确；添加成分的

53、加入不正确；例：加入添加成分时培养基过热或添加浓度错误；例：加入添加成分时培养基过热或添加浓度错误；添加剂污染。添加剂污染。培养基常见问题培养基常见问题北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司7、污染、污染 不适当的灭菌；不适当的灭菌；无菌操作技术存在问题；无菌操作技术存在问题；添加剂污染。添加剂污染。培养基常见问题培养基常见问题北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司培养基常见问题培养基常见问题8、容器洁净度、容器洁净度新购置的玻璃器皿应先在酸溶液内浸泡数小时新购置的玻璃器皿应先在酸溶液内浸泡数小时使用过的器皿在清洗时要注意不能有洗涤剂和自来水的残留使用过的器皿在清洗时要注意

54、不能有洗涤剂和自来水的残留如果容器不洁净或有残留，可能导致培养基出现异常沉淀、微生物生如果容器不洁净或有残留，可能导致培养基出现异常沉淀、微生物生长异常，也可能影响荧光现象的观察长异常，也可能影响荧光现象的观察北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司培养基常见问题培养基常见问题含指示剂的培养基颜色异常含指示剂的培养基颜色异常不正常沉淀不正常沉淀含琼脂培养基凝胶强度下降含琼脂培养基凝胶强度下降 要要 求求1.1.蒸馏水或去离子水蒸馏水或去离子水 2.pH2.pH在在5.5-7.55.5-7.59、配制培养基用水的要求、配制培养基用水的要求北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司培

55、养基常见问题培养基常见问题10、含琼脂培养基水浴及复溶的要求、含琼脂培养基水浴及复溶的要求 水浴时间不宜超过水浴时间不宜超过4h 如果不能在如果不能在4h内及时使用，应迅速冷却，使其凝固，使用内及时使用，应迅速冷却，使其凝固，使用前再进行复溶前再进行复溶 但不可多次复溶，否则会影响培养基的但不可多次复溶，否则会影响培养基的pH值，并导致凝值，并导致凝胶强度下降胶强度下降北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司11、常用加热煮沸方式、常用加热煮沸方式直接用电炉加热：耗时，含琼脂培养基容易烧糊直接用电炉加热：耗时，含琼脂培养基容易烧糊隔水煮沸的弊端隔水煮沸的弊端 a温度不够，达不到灭菌效果

56、温度不够，达不到灭菌效果 b经隔水煮沸的含琼脂培养基，在水浴的过程中易出现分层现象经隔水煮沸的含琼脂培养基，在水浴的过程中易出现分层现象为您提供一种快速便捷的方式为您提供一种快速便捷的方式 第一步：采用微波炉适当加热第一步：采用微波炉适当加热 第二步：在电炉上继续加热至沸腾第二步：在电炉上继续加热至沸腾培养基常见问题培养基常见问题北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司培养基常见问题培养基常见问题12、灭菌过程对培养基质量的影响、灭菌过程对培养基质量的影响如果没有达到设定的灭菌条件可能引发的问题：培养基pH异常、颜色不均、灭菌效果不彻底常用监测方法 化学指示卡：使用方便，高压后可立即得

57、知监测结果 生物指示剂：准确性高北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司培养基常见问题培养基常见问题13、导致颜色差异的原因、导致颜色差异的原因 干粉颜色差异干粉颜色差异 正常差异正常差异：由指示剂的批间差异造成的、在允许范围内的颜色差异：由指示剂的批间差异造成的、在允许范围内的颜色差异 产品变质：如产品变质：如SC增菌液干粉变红，说明亚硒酸盐已被氧化，不能使用增菌液干粉变红，说明亚硒酸盐已被氧化，不能使用 溶液及平板颜色差异溶液及平板颜色差异 正常差异正常差异：指示剂的批间差异造成的；某些含有酸碱指示剂的培养基，：指示剂的批间差异造成的；某些含有酸碱指示剂的培养基，其其pH值是一个范

58、围，在这个范围内，颜色略有差异也是正常现象值是一个范围，在这个范围内，颜色略有差异也是正常现象 异常情况：异常情况：pH值异常导致的，可能是培养基或配制用水的值异常导致的，可能是培养基或配制用水的pH值异常；值异常；高压灭菌过程对颜色产生了影响高压灭菌过程对颜色产生了影响北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司培养基常见问题培养基常见问题14、培养基保存的注意事项、培养基保存的注意事项培养基的保存条件：避光保存于阴凉干燥处，使用后，拧培养基的保存条件：避光保存于阴凉干燥处，使用后，拧紧瓶盖，避免吸潮、氧化或污染。紧瓶盖，避免吸潮、氧化或污染。干粉保质期：一般未开封的培养基可保质年，已开封的干粉保质期：一般未开封的培养基可保质年，已开封的可保质半年。建议在瓶体注明开封日期。可保质半年。建议在瓶体注明开封日期。个别品种的特殊保存要求：个别品种的特殊保存要求：SC增菌液，建议开封后冷藏保增菌液，建议开封后冷藏保存，可延长保质期存，可延长保质期北京北京陆桥陆桥技技术术有限有限责责任公司任公司THANK YOU!