植物细胞工程实验

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1、植物细胞工程实验报告班级： 姓名：学号： 指导老师： 时间： 目录实验准备：培养基母液的配制 培养基的配制与灭菌实验一、香蕉吸芽的组织培养实验二、烟草叶片的组织培养实验三、木薯的微繁技术实验四、桉树再生体系建立实验五、玉米花生成熟胚培养 实验六、柱花草叶片组织培养实验七、水稻盾片组织培养自选实验：洋葱、仙人掌的组织培养实验准备：培养基母液的配制一、实验目的 掌握培养基母液的配制。在配置培养基之前，为了方便和用量准确，常常将大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素类分别配制成比培养基配方需要量大若干倍的母液。当配置培养基时，只需按预先计算好的量吸取母液。二、实验原理 培养基是植物细胞、组织和器官吸

2、取营养的场所。在植物细胞的分裂和分化过程中，需要各种营养物质，这些营养物质包括无机营养成分、有机营养成分、植物生长调节物质等。在对植物的器官、组织和细胞进行离体培养时，只是切取植物体的一小部分，它们无法象整体植株那样合成生长发育所需的全部物质。而自然界的植物千差万别，每一种植物都有自己独特的生理代谢过程和各自的营养需求，没有哪一种培养基能够适用于所有植物。因此，对培养基组成成分的筛选是非常重要和必不可少的程序。目前对植物进行组培时，人们所使用的培养基只几十种，其中MS培养基应用最为广泛。说明MS培养基的无机盐成分对许多植物种均是适宜的，它的无机盐含量较高，微量元素种类较全，浓度也较高。三、实验

3、试剂与仪器设备1、药品试剂：母液、蔗糖、卡拉胶（或琼脂）、NaOH溶液、HCl溶液、无菌水、NAA、BA、IAA、2，4-D等。2、仪器设备：电子天平、量筒、PH试纸、培养瓶、解剖刀、酒精灯、高压灭菌锅、移液管、洗耳球、玻璃棒、药勺、超净操作台、铁架、镊子等。四、实验内容（一）母液的配制MS培养基母液方案配制如下表：成分1L母液的用量(mg/L)每升培养基取用量(ml)备注大量元素(20X)NH4NO33300050KNO338000KH2PO43400MgSO47H2O7400CaCl2660050单独配制铁盐(100X)FeSO4.7H2O278010Na2-EDTA3730微量元素（20

4、0X）KI1665H3BO31240MnSO4.H2O3380ZnSO4.7H2O1720Na2MoO4.2H2O50CuSO4.5H2O5CoCL2.6H2O5有机元素(100X)VB11010VB650烟酸50甘氨酸200肌酸10000具体配制步骤如下：1、大量元素母液的配制 无机盐中大量元素母液，按照培养基配方的用量，把各种化合物扩大20倍，用感量为0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解.溶解时在每只烧杯中加入30-40mL重蒸馏水，置于酒精灯上,加热使其溶解(注意温度不可过高，60-70)。溶解后，在1000mL量筒中，混合后用重蒸馏水定容到1000mL。其中Ca

5、Cl2单独配制。在加入母液时CaCl2应最后加入，以免形成沉淀。将配好的混合液倒入细口瓶中，贴好标签保存于冰箱中。配制培养基时，配1000mL培养基取此母液50mL。2、微量元素母液的配制无机盐中微量元素母液，按照培养基配方用量的200倍，用微量0.0001g的电光分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解。混合定容于100ml容量瓶中保存于冰箱中,配制培养基时，每配制1000mL培养基取此母液5mL.3、铁盐母液的配制无机盐中铁盐母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力分析天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取

6、此母液10mL。4、有机元素的配制无机盐中有机元素母液，按照培养基配方用量的100倍，用感量0.01g的扭力天平，分别用50mL烧杯称量，用重蒸馏水溶解，混合定容，倒入细口瓶中，每配制1000mL培养基取此母液10mL。五、注意事项1、配制时注意一些离子之间易发生沉淀，如Ca2+和S042-，Ca2+、Mg2+和PO43-一起溶解后，会产生沉淀，一定要充分溶解再放入母液中。2、配制母液时要用蒸馏水或重蒸馏水。3、药品应选取等级较高的化学纯或分析纯。4、药品的称量及定容都要准确。各种药品先以少量水让其充分溶解，然后依次混合。5、一般配成大量元素、微量元素、铁盐、维生素等母液，其中维生素 氨基酸类

7、可以分别配制，也可以混在一起。5、母液配好后放入冰箱内低温保存，用时再按比例稀释。实验准备：培养基的配制与灭菌一、培养基的配制及消毒：（1）按照MS培养基的配方（以配制1LMS培养基为例）取大烧杯加入先前配制好的母液其中包括：大量元素50ml、微量元素5ml、铁盐10ml、有机元素10ml，最后加钙盐50ml充分混匀。再加入30g食用白糖，加入适量的去离子水使总量将近1L，混匀后调PH值（调至5.8-6.2），用1000ml量筒定容，最后向培养基中添加8.0g卡拉胶混匀。注意事项：配制MS时，钙盐一定要最后加入；调好PH值后再加卡拉胶（或琼脂）。（2）培养基配制好后分装到培养瓶中每瓶约30ml

8、，盖好瓶盖帖上标签。需要加入激素的培养基在定容到1000ml后加入所需的激素。混匀后调PH值（调至5.8-6.2），用1000ml容量瓶定容，最后向培养基中添加8g卡拉胶，混匀后进行分装，然后装入高温高压灭菌锅进行灭菌（一般培养基用0.1MPa，121.5，1530分钟可达到彻底灭菌的目的）。灭菌好后取出冷却备用。（3）培养环境条件：培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d，每隔7天观察一次。二、超净操作台的消毒消毒时先用75%的酒精对超净台的各处进行消毒，点燃酒精灯放于超净台右侧，再对实验工具进行灼烧灭菌，后放于架上冷却待用。并依次将实验中所用培养基瓶

9、及所需试剂瓶进行消毒，置于超净台左侧，注意实验中要用75%的酒精对手进行消毒。实验一、香蕉吸芽的组织培养前言：香蕉传统的繁殖方法多是采用吸芽分株法，这种方法的繁殖系数低，速度慢，难以满足当前大规模的栽培生产，且容易传播疾病。利用组织培养的技术来对香蕉优质品种进行无性繁殖，这样不但可以保持香蕉的优良性状，加快繁殖速度，而且，试管苗不带病虫害和病毒病，并且，利用组织培养技术得到的幼苗生长比较一致，有利于田间的管理和采收，本实验利用香蕉的吸芽作为外植体。1、材料和方法:1.1材料(1) 香蕉吸芽(2) 无菌纸、镊子、酒精灯等(3)实验采用MS基本培养基，PH： 5.8-6(4)诱导培养基： MSBA

10、3mgL30gL白糖+8.5gL卡拉胶(5)继代培养基： MSBA5mgL30gL白糖+8.5gL卡拉胶1.2方法1.2.1外植体消毒 用自来水冲洗吸芽表面的泥土，剥离外假茎，只留下茎和假茎各2-3cm长，假茎的的直径有2-3cm， 用洗衣粉清洗一遍，用自来水冲洗，转入0.1%升汞浸泡15-20min，其间不断搅拌，弃去升汞用无菌水洗3遍（无菌水漂洗：将从升汞中取出的香蕉吸芽组织块转入无菌水中漂洗，不断摇动使漂洗干净）留在瓶中备用。1.2.2诱导培养将香蕉吸芽放到无菌工作台的无菌纸上，用消毒刀将外植体的假茎的最外层剥掉，以及有消毒刀将已经变色的茎外面一小层也切掉，然后从外植体茎中间一分为四，接

11、入诱导培养基，共4瓶。7天后观察。1.2.3继代培养将诱导培养得到的香蕉苗中长势较好的一瓶用作继代培养的材料，在超净工作台上将香蕉芽丛分开，切去顶部叶片部分，削去底部褐化部分，将芽丛接种于香蕉继代增殖培养基中，接种2瓶。1.2.4培养条件：培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d（注意香蕉吸芽诱导期无需光照）,每个星期观察一次 。2、实验结果与分析：2.1 诱导培养：共接种了4瓶，出现一定的褐化现象，诱导率为100%，污染率为25%，说明用0.1%的升汞对香蕉的吸芽消毒15-20min的时间控制比较合理，消毒的效果也较好。附录1、诱导培养实验结果统计表外

12、植体数目成活数污染数成活率污染率441100%25%2.2 继代培养：从三瓶未污染的香蕉苗中选取长势最好的一瓶，继代培养两瓶，一瓶长势良好，另一瓶香蕉苗由于褐化现象比较严重而死去。原因：可能是因为在继代的培养过程中，用刀切去褐化部分时切去的过多，使香蕉基部受伤严重而死亡。3、注意事项1）整个实验过程要严格进行无菌操作；2）倒培养基时要边用玻璃棒搅拌，边倒培养基，防止培养基的浓度不均匀；3）观察记录时，要注意拿组培瓶的方式，手要握住组培瓶的下方而不要握住组培瓶的盖子；4）发现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；5）观察记录时要仔细，认真描述并做好记录。实验二、烟草叶片组织培养前言：目前

13、烟草一般采用有性繁殖，但繁殖的烟苗不均衡，易发生变异，而且易感病菌，造成多种病害发生，品质退化，从而影响经济收人。用嫩叶片的组培方法，可以保持优良品种的优良性状，减少病虫害，从而达到高产优质的目的。另外，烟草生长速度快，生长周期短，所以是基因工程中最为广泛使用的模式植物之一。本实验利用烟草的叶片作为外植体，诱导培养基为MSBA 1.0 mgL。1、材料和方法:1.1材料(3) 1）烟草叶片、无菌纸、镊子、酒精灯等 2）MS为基本培养基 3）诱导培养基： MSBA 1.0 mgL30gL白糖+8.5gL卡拉胶 4）继代培养基： MSBA 1.0 mgLNAA 0.5 mgL30gL白糖+8.5g

14、L卡拉胶 1.2方法1.2.1外植体消毒将烟草叶片洗净，将烟草叶片左右垫与牛皮纸上用手术刀切取2cm长，2cm宽的无主叶脉、主侧叶脉的长方形叶片块（10片左右），置于加了1-2滴土温的0.1%的升汞溶液中消毒10-15min，期间注意不断摇动，取出叶片置于无菌水中清洗3次，留于最后清洗的无菌水中备用。1.2.2诱导培养将烟草叶片取出将叶片周遍切去，再将每片叶切成2片，接入诱导培养基中，每7天观察记录一次。1.2.3培养条件：培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d，,每个星期观察一次 。2、实验结果与分析：1）诱导培养全部被污染，污染率100%，诱导率为

15、0。 原因可能是：灭菌不彻底，整组均被污染 用升汞消毒的时间过短，因此应适当延长消毒时间。 操作过程染菌附录1、第一次烟草诱导培养结果统计表接种瓶数诱导数污染数诱导率污染率4040100%2） 未能进行继代培养3、注意事项1）整个实验过程要严格进行无菌操作；2）倒培养基时要边用玻璃棒搅拌，边倒培养基，防止培养基的浓度不均匀；3）观察记录时，要注意拿组培瓶的方式，手要握住组培瓶的下方而不要握住组培瓶的盖子；4）发现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；5）观察记录时要仔细，认真描述并做好记录。实验三、木薯的微繁技术前言：在我国南亚热带地区，木薯是仅次于水稻、甘薯、甘蔗和玉米的作物。木薯是

16、用其茎干来进行无性繁殖的，但是往往新品种刚刚出现时，其茎干是非常有限的，因此，对优质品种的迅速推广是非常不利的。利用组织培养的方法不仅可以保持母树的性状，而且繁殖速度快，有利于品种的推广。本实验利用木薯的茎段作为外植体。1、实验材料与方法：1.1实验材料：(4) 1）、木薯幼枝、无菌纸、镊子、酒精灯等 2）、以MS为基本培养基 3）、诱导培养基：MSCuSO40.05mgL2,4-D0.02mgL30gL白糖+8.5gL卡拉胶1.2方法1.2.1外植体的消毒：1. 从苗圃剪取幼嫩木薯枝条，剪去叶子。2. 以一个芽节为一段（芽节上下端保持1.5cm左右）切下，置于75%的酒精溶液中消毒5s。3.

17、 再置于0.1%升汞溶液中消毒10-15min左右，其间注意不断摇动，取出木薯枝条置于无菌水中清洗3次。1.2.2诱导培养将消毒好的木薯枝条取出，置于无菌的牛皮纸上，切去上下端各一小部分后，接入诱导培养基中培养，接种5瓶，7天后观察。1.2.3培养条件：培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d，每个星期观察一次 。2、实验结果与分析总共接种5瓶木薯，每瓶中接种2个木薯茎段。培养一周后观察，几乎所有的茎段都被污染了，污染率几乎达到100%。其中有三瓶诱导成功。可能的原因如下：1、在升汞中消毒的时间不够，应再适当延长消毒时间； 2、取材的时间不合理，致使外植

18、体表面带有大量的菌，进而导致外植体脱毒困难。 因此，取材时要选择向阳的健壮的枝条并在天气晴朗时取材，而不宜在阴雨天取 材。3、注意事项1）整个实验过程要严格进行无菌操作；2）倒培养基时要边用玻璃棒搅拌，边倒培养基，防止培养基的浓度不均匀；实验四、桉树再生体系的建立前言：桉树是异花授粉植物，有性繁殖很容易引起变异，很难保持物种的优良性状，无性繁殖如扦插等繁殖得很慢，无法满足生产的需要。而桉树组培快繁可使桉树保持其遗传稳定性，其繁殖系数大，一年内一个桉树带节茎段，可以繁育百万株以上的苗木。本实验利用桉树的茎段作为外植体。1、实验材料与方法：1.1实验材料：(5) 1）、桉树幼枝、无菌纸、镊子、酒精

19、灯等2）、以MS为基本培养基3）、芽的诱导培养基：MSBA1mgLNAA0.5mgL30gL白糖+8.5gL卡拉胶1.2、方法1.2.1外植体的消毒：采取幼嫩桉树枝条（选取腋芽还没有抽出芽枝的），剪去叶子，置于清水下洗净，在洗衣粉水中浸泡20min左右，清洗干净后用流水（自来水）冲洗到下午做实验时。取出以一个芽节为一段（芽节上端保持1-1.5cm，下端2cm左右）切下，置于75%的酒精溶液中消毒5s，在置于0.1%升汞溶液中消毒10-15min，其间注意不断摇动，取出桉树枝条置于无菌水中清洗3次。1.2.2芽的诱导培养将消毒好的桉树枝条取出，置于无菌的牛皮纸上，切去上下端各一小部分后，接入芽的

20、诱导培养基中培养，接种5瓶。1.2.3培养条件：培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d，每个星期观察一次 。2、实验结果与分析总共接种5瓶桉树，每瓶中接种2个桉树茎段。培养一周后观察，发现几乎所有的茎段都被真菌或细菌污染了，污染率几乎达到100%。可能的原因如下：1、在升汞中消毒的时间不够，应再适当延长消毒时间； 2、取材的时间不合理，致使外植体表面带有大量的菌，进而导致外植体脱毒困难。 3、灭菌不彻底3、 注意事项1）整个实验过程要严格进行无菌操作；2）倒培养基时要边用玻璃棒搅拌，边倒培养基，防止培养基的浓度不均匀；实验五 玉米、花生成熟胚的培养1、

21、实验材料与方法：1.1实验材料：1）、玉米、花生成熟种子2）、培养基MS + 30g/L白糖 + 8.5g/L卡拉胶 PH=5.8 1.2方法均设置三组对比：不做任何处理，直接接种。各1瓶 取成熟玉米和花生粒（15粒左右），直接置于0.1%升汞溶液中消毒10-20min左右， 期间注意不断摇动，取出置于无菌水中清洗后切开，取带胚的一半进行培养。各1瓶 消毒方法同上，用无菌水冲洗后小心剥离出胚单独培养。各2瓶1.2.3培养条件培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d，每个星期观察一次 。2、实验结果与分析一周后观察。玉米：接种了4瓶培养基。已经污染长势良好

22、，无污染长势健壮花生：接种了4瓶培养基。污染严重无污染，长势较好有一瓶被污染，另一瓶长势良好分析：如果对花生玉米不作处理，极易被污染。 单独分离出胚的长势更好一些3、注意事项1）整个实验过程要严格进行无菌操作；2）倒培养基时要边用玻璃棒搅拌，边倒培养基，防止培养基的浓度不均匀；3）观察记录时，要注意拿组培瓶的方式，手要握住组培瓶的下方而不要握住组培瓶的盖子；4）发现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的。实验六、柱花草叶片组织培养1、 材料和方法:1.1材料(6) 1）、柱花草叶片、无菌纸、镊子、酒精灯等 2）、MS为基本培养基3）、诱导培养基：M S+BA4mg/L+NAA1.0mg/

23、ml1.2方法1.2.1外植体消毒将柱花草叶片洗净，然后将叶片放在牛皮纸上，用手术刀切取2cm长的片块（10片左右），置于0.1%的升汞溶液中消毒10-15min，期间注意不断摇动，取出叶片置于无菌水中清洗3次，留于最后清洗的无菌水中备用。1.2.2诱导培养将柱花草叶片取出放入超净工作台中无菌的牛皮纸上，然后将叶片两端切去少许，接入诱导培养基中，接种4瓶，每7天观察记录一次。1.2.3培养条件：培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d，,每个星期观察一次 。2、实验结果与分析：1）第一次对柱花草进行诱导培养时，污染率25%，诱导率为50%，污染率很高。原

24、因可能是，用升汞消毒的时间过短，或者是升汞浓度较低，因此应适当延长消毒时间或适当提高升汞的浓度或者尝试别的消毒方法。附录1、柱花草诱导培养结果统计表接种瓶数诱导数污染数诱导率污染率42150%25%实验结果结论：由实验结果与分析可知，柱花草叶片的组织培养污染率比较高，说明取材方法和消毒措施不佳，应采用合理的消毒方法，以降低污染率。3、注意事项1）整个实验过程要严格进行无菌操作；2）倒培养基时要边用玻璃棒搅拌，边倒培养基，防止培养基的浓度不均匀；3）观察记录时，要注意拿组培瓶的方式，手要握住组培瓶的下方而不要握住组培瓶的盖子；4）发现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；5）观察记录时要

25、仔细，认真描述并做好记录。实验七、水稻盾片的组织培养前言：水稻是世界上最重要的粮食作物之一，约有40%的世界人口以稻米为主食，因此，培育高产优质的水稻品种一直是世界范围的重要研究课题。水稻的花药培养使人们得到了纯合二倍体植株，大大缩短了水稻的杂交育种年限。提高选择效率。由于水稻盾片取材方便，在实际的研究工作中作为诱导愈伤组织的外植体材料来源应用越来越广泛。1、实验材料与方法：1.1实验材料：(7) 1）、水稻干燥成熟种子、无菌纸、镊子、酒精灯等2）、水稻发芽培养基MS3）、诱导培养基：MS2，4-D2.5mgL30gL白糖+8.5gL卡拉胶1.2方法1.2.1外植体的消毒：取水稻种子20-30

26、粒，在室温下直接浸于 0.1%升汞溶液中消毒20min左右，其间注意不断摇动，取出种子置于无菌水中清洗3次。1.2.2诱导培养将消毒好的水稻种子取出，接入发芽培养基中培养（共接4瓶）。 一周后，取已发芽的水稻种子，切除芽不要，将种子直接接入诱导培养基中培养。1.2.3培养条件培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d，每个星期观察一次 。2、实验结果与分析用MS培养基诱导水稻种子发芽，接种的4瓶培养基均长出小苗，未污染。发芽率100%第二次诱导培养的4瓶，有三瓶长势良好，一瓶已被污染。可能原因：操作过程不规范，导致染菌3、注意事项1）整个实验过程要严格进行

27、无菌操作；2）倒培养基时要边用玻璃棒搅拌，边倒培养基，防止培养基的浓度不均匀。自选实验开题报告实验题目：班级：姓名：学号：指导老师：洋葱的组织培养选题依据及意义：洋葱是百合科葱属植物，以肉质鳞片和鳞芽构成产品器官的二年生草本植物,营养丰富,而且具有杀菌、降脂、降压、抗哮喘等多种保健功能,深受人们喜爱 ,起源于中亚地区 ,历史悠久 ,分布广泛 ,是世界第四大蔬菜作物。由于洋葱两年生 ,异花受粉 ,异质性强 ,必须保持高度杂合 ,自交两三代就失去育性。尽管已经发现雄性不育系 ,但通过分子生物学的方法可以得到性状更优良的品种 ,通过组织培养建立植株再生体系是转基因的必要手段 ,各国学者对此做了大量的

28、工作 ,近几十年来成果主要集中于以下几个方面 :1研究进展1 .1器官发生型自 1997年Dunstan首次由洋葱获得离体植株后 ,各国学者相继作了成功的报道。 1980年Hussey首次把双鳞片作为外植体诱导得到芽 ,又以得到的芽纵切后为二代外植体 ,得到离体植株。Kahane (1992a)报道以鳞茎盘为外植体 ,经芽扩繁 ,植株个体化 ,生根驯化得到再生植株 ,三个步骤为一个周期 ,约 3 4个月 ,扩繁系数为 10 ,大大缩短了再生时间并部分解决取材的季节性限制。接着Yassen(1993)报道以未成熟的花作试材 ,直接形成小鳞茎 ,有效地避免和减少了继代培养的次数 ,同样繁殖系数约为

29、 10。 将收获的新鲜洋葱球冷藏，然后剥除外皮至直径为2-3cm，然后对它进行消毒处理；然后在无菌条件下将消毒处理后的洋葱球切除成外植体，然后将外植体接种到洋葱增殖培养基；经过培养，获得已长出若干个侧芽的无菌材料；其后每20-30天就可扩繁一次；将扩繁得到的洋葱单株壮苗转入生根培养基中进行培养，得成活洋葱苗。材料与方法：1. 材料1） 洋葱、无菌纸、镊子、酒精灯等2） 采用MS为基本培养基3）诱导培养基：、MS+ BA0.5mg/L+2,4-D2mg/L30gL白糖+8.5gL卡拉胶2.方法2.1外植体消毒方法洋葱用流水冲洗5 h后，剥去外皮至直径为2-3cm于超净工作台上先用70酒精浸泡30

30、 s、0.1的升汞中消毒7min，然后用无菌水冲洗5次最后将消毒好的材料置于无菌滤纸上吸干水分。2.2诱导培养将经消毒的洋葱鳞茎尖接入诱导培养基中，共接5瓶，每7天观察记录一次。2.3培养条件：培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d，每个星期观察一次 。仙人掌的组织培养选题依据及意义：仙人掌类植物原产南北美洲热带、亚热带大陆及附近一些岛屿，部分生长在森林中。多浆植物的多数种类原产南非，仅少数分布于其它各洲的热带、亚热带地区。目前仙人掌科的植物将近有2000种 ，其中大多数有良好的食用和药用价值，在食用和医疗方面有着广阔的应用前景及巨大的开发潜力。仙人掌

31、科植物最早在欧洲一些发达国家开始栽培和研究目前已经进入工厂化种植，且组培苗在交易中占有一定比例。国内外研究趋势及发展状况：我国近年引进的仙人掌科植物逐渐增多。但对仙人掌植物的研究和应用仍处于起步阶段。仙人掌科植物的繁殖方法主要以传统的扦插为主。繁殖一般较容易，但由于生长缓慢、繁殖系数低，多数名贵种类繁殖困难，尤其对斑锦变异和畸形变异品种的性状保持较难，大大影响了该类植物的扩大栽培。利用组织培养技术可以大幅提高繁殖系数，保持品种性状扩大突变品种、新特品种和珍稀品种的繁殖降低栽培成本。材料与方法：2. 材料 1）仙人掌嫩茎、无菌纸、镊子、酒精灯等2）MS培养基3）诱导培养基：、MS+BA20 mg

32、L+NAAO2 mgL4）增殖培养基：MS+BA05 mgL+NAA02 mgL5）生根培养基：12MS+IBA05mgL2.方法2.1外植体消毒方法嫩茎用流水冲洗5 h后，于超净工作台上先用70酒精浸泡30 s、0.1的升汞中消毒7min，然后用无菌水冲洗5次最后将消毒好的材料置于无菌滤纸上吸干水分。2.2诱导培养将经消毒的嫩茎切割成外表面06 cm长，0.6 cm宽带刺座的接种块。接入诱导培养基中，共接10瓶，每7天观察记录一次。自选实验：洋葱、仙人掌的组织培养前言：洋葱是百合科葱属植物，以肉质鳞片和鳞芽构成产品器官的二年生草本植物，异花受粉 ,异质性强 ,必须保持高度杂合 ,自交两三代就

33、失去育性将收获的新鲜洋葱球冷藏，然后剥除外皮至直径为2-3cm，然后对它进行消毒处理；然后在无菌条件下将消毒处理后的洋葱球切除成外植体，然后将外植体接种到洋葱增殖培养基。 仙人掌类植物原产南北美洲热带、亚热带大陆及附近一些岛屿，我国近年引进的仙人掌科植物逐渐增多。但对仙人掌植物的研究和应用仍处于起步阶段。仙人掌科植物的但由于生长缓慢、繁殖系数低，多数名贵种类繁殖困难利用组织培养技术可以大幅提高繁殖系数，保持品种性状。1、材料和方法:1.1材料(1)洋葱、仙人掌嫩茎(2)实验采用MS基本培养(3)诱导培养基：洋葱：MS+ BA0.5mg/L+2,4-D2mg/L30gL白糖+8.5gL卡拉胶 仙

34、人掌：MS+BA2mg/L+NAA0.2mg/L30gL白糖+8.5gL卡拉胶(4)PH： 5.8-6.01.2方法1.2.1外植体消毒方法洋葱：用流水冲洗5 h后，剥去外皮至直径为2-3cm，于超净工作台上先用70酒精浸泡30 s、0.1的升汞中消毒7min，然后用无菌水冲洗5次最后将消毒好的材料置于无菌滤纸上吸干水分。仙人掌：嫩茎用流水冲洗5 h后，于超净工作台上先用70酒精浸泡30 s、0.1的升汞中消毒7min，然后用无菌水冲洗5次最后将消毒好的材料置于无菌滤纸上吸干水分。1.2.2诱导培养洋葱：将经消毒的洋葱鳞茎尖直接接入诱导培养基中，共接5瓶。每7天观察记录一次。仙人掌：将经消毒的

35、嫩茎切割成外表面06 cm长，0.6 cm宽带刺座的接种块。接入诱导培养基中，共接10瓶，每7天观察记录一次。1.2.3培养条件：培养温度为28（-1、+1），光照强度20003000LX，光照时间为12h/d,每个星期观察一次 。2、实验结果与分析：1. 洋葱1）洋葱诱导培养结果统计表接种瓶数诱导数污染数诱导率污染率550100%0%洋葱培养较为成功，分析如下：洋葱品种本身较易于培养，繁殖力强 实验所采用的培养基各成分适宜，能成功诱导其生长。2. 仙人掌2）诱导培养结果统计表接种瓶数成活数污染数成活率污染率100100%100%接种的10瓶仙人掌均被污染，分析如下：10瓶仙人掌中，每瓶所染杂菌种类各不相同，且都污染严重，可能由于所用仙人掌为野生型，自身携 带病菌较多且顽固。消毒时间可能过短，应适当延长。培养基成分待改进，参考文献中此成分配比适用的仙人掌科植物有限，可能不适用于此野生品种。3、注意事项1）整个实验过程要严格进行无菌操作；2）倒培养基时要边用玻璃棒搅拌，边倒培养基，防止培养基的浓度不均匀；3）观察记录时，要注意拿组培瓶的方式，手要握住组培瓶的下方而不要握住组培瓶的盖子；4）发现污染的外植体，要及时清理干净，以免污染其他的；5）观察记录时要仔细，认真描述并做好记录。15