微生物检验重点知识

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1、微生物知识要点：一、 葡萄球菌 ：1 致病因素：血浆凝固酶；溶血素；杀白细胞素；肠毒素；表皮剥脱毒素； TSST-1；耐热核酸酶； 葡激酶；透明质酸酶；脂酶。2 临床意义：疖痈等；内脏感染肺炎、脓胸、中耳炎、脑膜炎、心包炎、心 内膜炎；全身感染败血症、脓毒血症； （毒素相关）食物中毒； 烫伤样皮肤综合症；毒性休克综合症；假膜性肠炎。3 鉴定：溶血；细菌和菌落形态； 生化实验：触+微 阳性；链+肠 阴性葡：杆菌肽 R，呋喃唑酮 S金黄色葡萄球菌特征：普通平板 -脂溶性黄色色素；血琼脂 -血浆凝固酶+ ； 甘露醇发酵+耐热核酸酶+2）.如何确定从标本中分离的细菌为葡萄球菌？并确定其有无致病性。答：

2、直接镜检，经革兰染色后镜检发现革兰染色阳性呈葡萄状排列的球菌，可 初步报告疑为葡萄球菌，需进一步分离培养鉴定。分离培养：血培养需经增菌 后转种血平板进一步鉴定，若无细菌生长，需连续观察 7 天，并以血平板确定有 无细菌的生长。脓液、尿道分泌物、脑脊液沉淀物可直接接种血平板，37过夜， 可形成直径约 2-3mm、产生不同色素的菌落。金葡菌菌落周围有透明溶血环。 试验鉴定：血浆凝固酶试验，甘露醇发酵试验，耐热核酸酶试验，肠毒素测定， SPA 检测。致病性葡萄球菌菌落周围有透明溶血环，血浆凝固酶试验阳性，甘露 醇发酵试验阳性，耐热核酸酶试验阳性，SPA 检测有 A 蛋白的存在。二、 链球菌：1 致病

3、因素：M 蛋白；脂磷壁酸；透明质酸酶；链激酶；链道酶；链球菌溶 血素；致热外毒素。2 临床意义：A 群： 化脓性炎症；猩红热；风湿热；急性肾小球肾炎；II III肺炎链球菌：大叶性肺炎；中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜炎、 心内膜炎。3 鉴定：形态。 培养+血清等，血琼脂-灰白色，半透明或不透明表面光滑 小菌落；肺炎链球菌 48h 呈脐窝状。几中链球菌特征：A 群：血平板溶血; 杆菌肽-敏感B 群：血平板溶血; 杆菌肽-耐药；CAMP+；胆汗七叶苷（）；马尿酸水解 试验（+）草绿色链球菌：血平板溶血；optochin 耐药；胆汗七叶苷（）； 肺炎链球菌：血平板溶血；optochin 敏感，菊糠分解

4、（+），胆汗溶菌（+），荚膜肿胀实验（+）三、 大肠埃希菌1 致病因素： 侵袭力（K 抗原和菌毛）；内毒素；肠毒素（LT，ST）2 临床意义：肠道外感染（泌尿系统感染为主，腹膜炎，胆道感染，肺炎 等；肠道感染：EHEC、ETEC、EPEC、EIEC、EaggEC3 鉴定：普通平板（湿润、光滑、灰白中等大小菌落）有便毛，有动力， 葡萄糖发酵（+）， 硝酸盐还原（+）， 氧化酶（），触酶（+） 中国兰平板（蓝色），伊红美蓝（紫黑色）,麦康凯和 SS（红色）四、 志贺菌属1 致病因素：侵袭力（菌毛）；内毒素；外毒素（志贺毒素 ST，也称 Vero） 2 临床意义： 1 ）急性细菌性痢疾：腹痛腹泻 脓

5、血粘液便，里急后重，发 热，便中带血，粘液和 WBC； 中毒性菌痢多见于小儿，2）慢性细菌性痢 疾；3）携带者3 鉴定：葡萄糖发酵（+）， 硝酸盐还原（+）， 氧化酶（），触酶（-） 接种 SS 和麦康凯平板，分离出无色、透明的小菌落为可疑志贺菌。血清学鉴定。5.简述对疑似痢疾患者进行病原学诊断的常规及快速方法 。答：常规鉴定：初步鉴定最后鉴别鉴别试验血清学鉴定非典型菌株 可用传代法及毒力试验进行鉴定。快速诊断：直接凝集免疫荧光菌球法协同凝集试验乳胶凝集试验 分子生物学方法五、 沙门菌属1 致病因素 侵袭力（Vi 抗原），内毒素，肠毒素。2 临床意义 胃肠炎（食物中毒）；菌血症和败血症；肠热症

6、（伤寒副伤寒） 3 鉴定：接种 SS 和麦康凯平板，分离出无色、透明的小菌落为可疑沙门氏 菌，需进一步生化反应鉴定，3）如何根据 O 抗体和 H 抗体的变化特点判断肥达试验的结果？答：若 O、H 凝集效价均超过正常值，则肠热症的可能性大，若两者均低，肠热 症的可能性小，若 O 不高 H 高，可能预防接种或非特异性回忆反应，若 O 高 H 不高，则可能感染早期或与伤寒沙门菌 O 抗原有交叉反应的其他沙门菌感染。4）对肠热症患者进行微生物学检查时标本采集应注意什么 ？答:根据不同的疾病、不同的病程取不同的标本。肠热症第 1、2 周取外周血， 第 2、3 周取粪便、尿液，全程可取骨髓分离培养细菌。六

7、、 铜绿假单胞菌其生物学特性主要有 4不生长，而 42生长。在血琼脂、麦康凯培养基 上均可形成 5 种不同形态的菌落，在普通培养基上可产生多种色素。鉴定：革兰阴性杆菌，葡萄糖氧化发酵（氧化型），动力阳性，氧化酶（+），触酶（+），专性需氧，营养要求不高，麦康凯上生物良好，初始分离培养基特征性菌落（扩展性，平坦，具有锯齿边缘，金属性光泽， 产生蓝绿色色素，玉米面气味）42 度长，4 度不长。七、 嗜血杆菌简述流感嗜血杆菌的生物学特点 .答：革兰阴性短小球杆菌，无芽胞、无鞭毛、不能运动，多数菌有荚膜。需氧 或兼性厌氧最适生长温度 35，最佳培养基是巧克力琼脂。临床意义：脑膜炎、鼻咽炎、关节炎、心包

8、炎，鼻窦炎，中耳炎鉴定：培养特性，5-10% CO2 ，X 因子，V 因子；血琼脂：卫星现象；巧克 力平板，露滴状菌落。八 、 霍乱弧菌霍乱患者为什么会出现剧烈腹泻及严重脱水的症状？答：霍乱弧菌可产生致泻性极强的霍乱肠毒素，该毒素由 1 个 A 亚单位和 5 个相 同的 B 亚单位组成，B 亚单位使毒素分子与真核细胞上的受体结合，A 亚单位具 有酶活性功能。A 亚单位进入细胞后，激活腺苷环化酶，令胞内 cAMP 水平增高， 导致肠粘膜细胞内的水、氯和碳酸氢钾等过度分泌到肠腔，同时钠的吸收减少， 导致严重的腹泻和呕吐.九 白喉棒状杆菌简述白喉棒状杆菌的致病过程。答：白喉棒状杆菌存在于白喉患者的喉

9、头气管及鼻腔粘膜，有时皮肤、结膜等部 位也可见到。传染源为患者及带菌者，细菌多随飞沫或污染的物品传播，感染后 白喉棒状杆菌在鼻咽部粘膜处繁殖并产生外毒素，引起局部炎症和全身中毒症 状。白喉杆菌在侵犯局部增殖，产生外毒素致病2简述白喉杆菌体外毒力试验的原理、方法及结果判断。答：琼脂平板毒力试验。将含有 20%牛血清肉汤琼脂分注与平皿中，每只平皿 10ml，50冷却，在凝固之前，将浸有白喉抗毒素血清稀释液的滤纸条沉于琼脂 内，制成平板(Elek 平板)。在与滤纸条相垂直的方向将待检菌画直线接种，划 线宽度约 6-7mm，两端与皿壁连接。同时，与之相距 10mm 处平行划线接种一标 准产毒菌株，作为

10、阳性对照。37培养 24-48 小时，若菌苔两侧出现斜向外延伸 的乳白色沉淀线，并与其邻近的标准产毒株的沉淀线相吻合，则为产毒株。SPA 协同凝集试验：将白喉抗毒素 IgG 先吸附在 SPA 上，再加入待检菌培养物上清液。 若有白喉外毒素，则与 SPA-IgG 结合出现可见的凝集反应。对流电泳：将已知 的白喉抗毒素和待检菌培养液分置琼脂板两孔之中，电泳 30min 后，若两孔之间 出现白色沉淀线，表明待检菌为产毒株。鉴定：革兰染色阳性，有明显的异染颗粒的杆菌，无荚膜，无鞭毛，菌体长短不 一，直或微弯，一端或两端膨大，排列呈V，L 等文字形，。亚碲酸钾血培养出黑 色菌落，有或无狭窄 B 溶血，菌

11、落灰白色，隆起，湿润。九 结核杆菌.致病机制：1 荚膜。2 脂质：包括索状因子，磷脂，硫酸脑苷脂，蜡质 D。3 蛋 白质 与蜡质 D 结合使机体产生超敏反应，引起组织坏死和全身中毒症状。2. 结核分枝杆菌细胞壁中脂质含量高，这一特点有何意义？答：结核分枝杆菌胞壁含脂质多，与其染色性、抵抗力、生长速度及致病性等 特性有密切关系，脂质中的分枝菌酸使其具有抗酸性；细胞壁含大量脂质，可 防止菌体内水分的丢失，故对干燥的抵抗力特别强；同时影响营养物质的吸收， 故生长缓慢，且脂质中的磷脂、索状因子、蜡质 D、硫酸脑苷脂等毒性成分以 不同机制致病。3简述从标本中检验结核分枝杆菌的方法。答： 1显微镜检查 (

12、1)直接涂片染色镜检：是一种临床常用的简易快速的检查 方法。直接涂片法是用接种环取病人痰液中浓厚部分或离心沉淀 (3000r min， 20min)的尿沉淀物 23 接种环涂片，涂片要厚。经自然于燥和火焰固定后进行 齐-尼抗酸染色，或作金胺“o”荧光染色。前法用油镜检查，后法用荧光显微镜 高倍镜检查。镜检时应仔细查遍整个涂片或观察至少 100 个视野。结核分枝杆菌 抗酸染色后呈红色，其它细菌和细胞为蓝色。经荧光染色的结核分枝杆菌，在黑 色背景中呈亮黄色。涂片镜检结果应报告“找到抗酸性杆菌或“未找到抗酸 性杆菌”，而不能报告“找到结核分枝杆菌”。 (2)浓缩集菌涂片检查法：如果直 接涂片镜检不易

13、检出结核杆菌，应采用浓缩集菌涂片检查法，以提高结核杆菌的 检出率。所谓浓缩集菌涂片即为将采集标本离心，取沉淀涂片，或是采用漂浮集 菌法，集菌后标本经反复多次使涂层加厚，一般取 34 个接种环，涂抹面积大 约直径在 15mm 即可，干燥固定后染色镜检。2核酸检测 用 PCR 法快速诊断 结核分枝杆菌感染。设计结核分枝杆菌特异 rRNA 片段的引物进行扩增，然后用 结核分枝杆菌 rRNA 序列特异的 DNA 探针与之杂交。PCR 技术的特异性与敏感 性均大于 95。3抗 PPDIgG 的检测 用 ELlSA 法检测患者血清中抗 PPDIgG， 可作为活动性结核分枝杆菌感染的快速诊断方法之一。肺结核

14、病人的血清阳性率 为 8090。4简述抗酸染色的步骤及结果，并举出两种抗酸菌。答：初染：石炭酸复红加温染 5min脱色：3%的盐酸酒精脱色 1min复染： 美兰染 1min 结果：抗酸菌为红色，非抗酸菌为蓝色。结核分枝杆菌与麻风分枝 杆菌均为抗酸菌5一患者怀疑患有肺结核，如何进行微生物学检查？（包括标本采集至报告 结果的全过程，检查方法应有传统方法和快速检查方法。）答：1）标本采集：根据感染部位不同，采集不同的标本。 2）标本直接检查： 显微镜检查核酸检测抗 PPDIgG 的检测。 3）分离培养与鉴定 4）药物敏 感性试验 5）免疫学诊断 6）动物接种梅毒螺旋体获得性梅毒（ TP）:一期：硬下

15、疳；二期：梅毒疹；三期皮肤黏膜溃疡，内脏器 官肉芽肿。标本直接检测1、 暗视野显微镜检查 2、免疫荧光染色 3、镀银染色法 4、核酸检测。抗体检测1、 性病研究实验室试验 (VDRL)2、快速血浆反应素环状卡试验（ RRR）3、甲 苯胺红不加热血清试验（TRUST）2、 荧光梅毒螺旋抗体吸收试验 FTA-ABS ； 荧光梅毒螺旋抗体双染色试验 FTA-ABS-DS ; 抗 梅毒螺旋抗体的微量血凝检测 MHA-TP ; 抗 梅毒螺旋 抗体明姣颗粒凝集试验 TPPA; ELISA1.比较支原体与细菌 L 型的主要区别。（表格自制）【生物学性状与致病性 -细菌 L 型 -支原体】-培养特性-需要高渗

16、-需要胆 固醇 菌落-油煎蛋状，0.5-1mm-油煎蛋状，0.1-0.3mm形态-高度多形态 性-高度多形态性大小-大小为 0.6-1.0m-大小为 0.2-0.3m细胞膜-不含固 醇-含高浓度固醇细胞-缺乏或无-无细胞壁缺失的原因-青霉素、溶菌酶和 胆汁等作用所致，去除条件可恢复-遗传通过滤器-能通过滤器-能通过滤器 对青霉素的作用-抵抗-抵抗液体培养-有一定混浊度，可附壁-混浊度极低 致病性-引起慢性感染，如骨髓炎、尿路感染和心内膜炎等-原发性非典型性肺 炎，泌尿生殖道感染和条件致病1.简述衣原体独特的发育周期。答：沙眼衣原体严格寄生在细胞内，有独特的发育周期，在其繁殖发育的周期 内，可见

17、两种形态，原体及始体。原体具有感染性，通过表面受体吸附于易感 细胞并被细胞吞噬进体内。原体在吞噬体内体积增大进入增殖状态，形成始体。 始体在吞噬体内以二分裂的形式进行分裂，繁殖出子代并成熟为原体，从易感 细胞中释放出来，再感染新的易感细胞。2.沙眼的病原体及其传播方式。答：沙眼的病原体是沙眼衣原体，传播方式主要通过眼-眼或眼-手-眼传播 3.衣原体有哪些重要特点？答：形态多为球型，革兰染色阴性原体小，介于细菌和病毒之间，始体大， 大小与细菌相似。代谢，缺乏能量来源，故严格的细胞内寄生有独特的发育周期有 DNA 和 RNA 两种核酸由肽聚糖组成的细胞壁，对多种 抗生素敏感。4.衣原体引起哪些重要

18、疾病？答：能引起人类的沙眼、泌尿生殖道的感染和呼吸系统等疾病2.简述白色念珠菌感染的微生物检查方法及结果分析。答：直接镜检可见革兰阳性、圆形或卵圆形芽生孢子及假菌丝分离培养在沙 氏培养基上形成乳白色或淡黄色类酵母菌落，镜检可见假菌丝及成群的卵圆形芽 生孢子血清学实验可检测多种假丝酵母菌的抗体，应用 ELISA 或胶乳凝集实验 可检出白假丝酵母菌细胞壁甘露聚糖。动物实验将白假丝酵母菌悬液 1ml 经尾 静脉或腹腔注入小鼠或耳静脉注入兔体内，5-7 天后动物死亡，解剖发现肾、肝 等有脓肿。白色念珠菌检验：1 标本直接检查直接显微镜检查；G 试验，也称螯试验，也测定 1-3-B-D-葡聚糖；抗原检测

19、，ELISA 免疫印迹；核酸检测；2 培养鉴定接种沙氏培养基，25 或 37 度培养 1-4 天，可见奶油色类酵母样菌落，镜检 可见假菌丝和芽生孢子。鉴定试验：1 芽 管形成试验 2 厚膜孢子形成试验 3 糖同化或发酵试验。 白色念珠菌鉴定的依据有哪些答：直接镜检观察到圆形或卵圆形的芽生孢子、假菌丝，假菌丝中隔部伴有芽 生孢子，顶端有厚壁的厚膜孢子，革兰染色阳性，着色不均匀。玉米琼脂室温 及 35均生长并形成顶端厚膜孢子， 42也能生长。芽管形成试验阳性。 葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、蕈糖发酵试验阳性，蔗糖、乳糖发酵试验阴性。葡 萄糖、麦芽糖、半乳糖、蕈糖同化试验阳性，乳糖同化试验阴性。三氮唑氯试

20、 验，培养基不变色或淡红色。桥。新生隐球菌主要侵犯部位为肺、脑、脑膜，也可侵犯皮肤，骨，关节致病物质为荚膜；标本直接检测：1 显微镜检查 2 抗原检测 3 抗体检测 4 核酸检测1.简述流行性感冒病毒的形态结构及其主要结构成分的功能。流感病毒呈球形或丝状流感病毒的内部结构 核衣壳：病毒分片段的 RNA，结 合有核蛋白 NP 以及与复制和转录有关的三种依赖 RNA 的 RNA 多聚酶蛋白。呈螺 旋对称。基质蛋白（M 蛋白）：覆盖在核衣壳外面，M 蛋白抗原性稳定，也具有型 特异性。外膜：来自宿主细胞的脂质双层膜。 流感病毒的辅助结构 血凝素 (HA)：HA（病毒吸附）保护性抗原，血凝抑制抗体(保护

21、性抗体)神经氨酸酶（NA） （核衣壳释放）与病毒释放有关。2.简述分离与鉴定流感病毒常用的实验室检验方法有哪些。.主要包括病毒分离培养、血清学诊断和快速诊断方法3.甲型流感病毒为何容易引起大流行？流感病毒 RNA 分节段，甲型和乙型由 8 个节段，丙型由 7 个节段构成。甲型流 感病毒根据其表面 HA 和 NA 抗原性的不同，可分为若干亚型。4.简述流感病毒的抗原变异。抗原漂移（antigenic drift）因 HA 或 NA 的点突变造成，变异幅度小，属量变， 引起局部中、小型流行。抗原转换（antigenic shift）因 HA 或 NA 的大幅度变 异造成，属质变，导致新亚型的出现，

22、引起世界性的暴发流行。轮状病毒临床意义： 4-24 月婴幼儿呈急性胃肠炎感染，24-72 小时潜伏，80%患儿先 发热，呕吐和腹痛，随即频繁腹泻，第天10-20 次，淡黄色水样便或蛋花汤样酸 性便呀白色米汤样便，无粘液和脓血，恶臭。简述轮状病毒的微生物检验方法标本采集与处理 标本直接检查 电镜和免疫电镜检查抗原检测病毒 RNA 聚丙烯酰胺凝胶电泳分析核酸检测病毒分离培养2.简述乙型肝炎病毒的形态结构。球形,双层衣壳。外衣壳 =包膜(脂质双层+蛋白质) HBsAg 等 内衣壳： HBcAg、 HBeAg 内部： DNA- 环状双链、DNA 多聚酶3. 简述乙型肝炎病毒的基因组及其功能。 不完全双

23、链环状 DNA，含 4 个 ORF,编 码 7 个蛋白 S：HBsAg,Pre-s1,Pre-s2 C：HBcAg，HBeAg P：polymerase 多聚 酶 X：HBxAg 基因4. 简述乙型肝炎病毒的抗原组成及其意义。HBV 抗原组成、HBsAg 表面抗原：是机体受 HBV 感染的主要标志之一。具有 抗原性，能刺激机体产生保护性抗体，即抗 HBs 。、HBcAg 核心抗原：HBcAg 主要定位于感染细胞核内，不易从患者血清中检出。但 HBcAg 也可在肝细胞膜表 面表达，宿主 CTL 作用的主要靶抗原。HBcAg 抗原很强，能刺激机体产生抗 HBc， 但无中和作用。检出高效价抗 HBc

24、，特别是抗 HBc IgM 则表示 HBV 在肝内处于复 制状态。、HBeAg 核心抗原：HBeAg 可作为 HBV 复制及血清具有传染性的标志。 急性乙型肝炎进入恢复期时 HBeAg 消失，抗 HBe 阳性；但抗 Hbe 亦见于携带者及 慢性乙型肝炎血清中。抗 HBe 说明病毒感染性较低（是预后良好的征象） 简述乙型肝炎病毒抗原抗体系统检测的用途乙型肝炎的诊断 判断传染型 判断预后 筛选献血员 检测乙肝疫苗 接种效果 流行病学调查3巨细胞病毒感染的病原学直接检查方法有哪些？检测病毒颗粒 检测病毒包涵体 检测病毒抗原 检测病毒核酸 4疑似人巨细胞病毒先天性感染的诊断依据是什么？在出生最初 3

25、周内从新生儿尿液、呼吸道分泌物或者其他体液分离出 HCMV 是先 天性感染最敏感和特异的诊断依据。HIV 的形态结构形态：球形病毒，80-120nm 结构 1、核衣与核心呈圆锥状、两条相同的正 链 RNA、有衣壳蛋白和核衣壳蛋白、有逆转录酶，蛋白酶和整合酶2、包膜 ：1、 脂质双层 2、糖蛋白刺突（gP120 gP41）2.简述 HIV 的复制过程。逆向转录为 DNA，形成 DNA 复制中间体，形成前病毒 DNA 转录为病毒 RNA 有的拼接成 mRNA，有的形成 RNA 基因组，组装，释放3.简述 AIDS 的临床表现。AIDS 的临床表现分为四个时期：急性感染期、无症状感染期、艾滋病相关综

26、合 症、艾滋病4.HIV 感染的常用临床检测方法有哪些？ 标本直接检查 抗原检查 核酸检查 抗体检测 初筛试验 确证试 验 CD4T 细胞计数4.人乳头瘤病毒诊断方法有哪些？ 核酸分析 原位杂交 DNA 印迹 聚合酶链式反应内毒素和外毒素的特点有何不同？答：区别要点外毒素内毒素1.来源 革兰阳性菌和部分革兰阴性菌 革兰阴性菌2 存在部位 由细菌合成并分泌到菌体外，细胞壁成分，菌体裂解后释出少 数菌裂解后释出3 化学成分蛋白质脂多糖4.稳定性 不稳定，不耐热稳定，耐热5. 毒性作用 ： 外毒素极强，对组织器官有选择性的毒害作用，引起特殊临床 表现。 内毒素较弱，各菌的毒性作用大致相同。6. 抗原性： 外毒素强，刺激机体产生抗毒素，中和游离外毒素的毒性作 用，0.4甲醛处理，可脱毒成失去毒性而保持抗原性的类毒素。内毒素弱，刺 激机体产生的抗菌抗体无明显中和作用，甲醛处理不形成类毒素