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1、单亲与双亲亲子鉴定结果的比较探讨 - 法医学 STR亲子鉴定亲子关系指数基因鉴定摘要:目的研究单亲和双亲亲子鉴定结果的准确性。办法采用AmpFe STRTMIdentifilerPlusTM荧光标记复合系统,通过310遗传分析仪对213例亲子鉴定进行基因型分型。结果双亲排除案例的排除指标均为3个以上。单亲排除案例中,察看到3例排除指标小于3个,后经增加检测母亲遗传信息,排除指标均大于3个。排除案例中双亲组的排除指标比单亲组平均多2个。不排除案例中,双亲组的RCP均大于99.9999%;在单亲组中RCP值明显偏低,有29.3%案例低于99.73%,只有24%的案例RCP大于99.99%。结论短少
2、一方的单亲鉴定对鉴定结果有明显影响。关键词:STR 亲子鉴定 亲子关系指数 基因鉴定Analyze difference of paternity testing between single-parent group and double-parent goupAbstract:Objective Study the accuracy of single-parent and double-parent paternity-testing.MethodsAmpFe STRTMIdentifiler PlusTMkit was used to perform PCR, the amplifie
3、d products were processed throughABI PRISM310 genetic analyzer and the genotypes of all alleles was gotten through GeneScan software andGenoTyper software.Results In all excluding cases of double-parent group, the excluded STR loci were morethan 3; compared in the simple-parent group that there were
4、 3 cases the excluded STR loci were less than 3,when in those cases the mother sample was added, the excluded STR loci exceeded 3. The mean excluded STRloci in the double-parenthttp:/www.51lunwen.org/fayixue/ group were 2 more than that in simple-parent group. In no-excluded cases, theRCP of all the
5、 double-parent group were more than 99.9999%, but in the simple-parent group, 29.3% cas-es were less than 99.73% and only 24% cases exceeded 99.99%. Conclusion Absence one of parent samplewill obviously influence the paternity-testing result.Key words:STR; Paternity Testing;RCP;Gene-test目前在非诉讼亲子鉴定中,
6、单亲亲子鉴定的比例已远远超过双亲,但由于短少父母一方的遗传信息,所以存在认定概率低的问题和误判的风险,在采用血清学技术进行检验时,这种风险更高。随着DNA分子检测技术的开展,特别是短串联重复序列(STR)技术在亲子鉴定上的应用1,突破了传统血清学和HLA检测技术的限制,极大提高了亲子鉴定的准确性。但单亲和双亲亲子鉴定有很大不同,本文比拟单亲和双亲亲子鉴定的异同,探讨单亲亲子鉴定的准确性。1材料和办法1.1样品本中心受理的213例亲子鉴定案例样本,其中165例为父子单亲鉴定,48例为父子母双亲鉴定。每人提取口腔拭子两枚,一枚供检验,一枚保留供复核。1.2方法DNA提取采用Chelex-100办法
7、2(Sigma公司,美国);试剂选用AmpFe STRTMIdentifilerPlusTM(ABI公司,美国)试剂盒,扩增位点为D8S1179、D21S11、D7S820、CSF1PO、D3S1358、THO1、D13S317、D16S539、D2S1338、D19S433、VWA、TPOX、D18S51、D5S818、FGA和Amelogenin性别位点; Perkin-Elmer GeneAmp PCR System9600型PCR仪扩增;采用310型DNA sequence an-alyzer进行电泳检测;Genescan-500 Liz内标,POP-4液态胶,6015KV电泳24 m
8、in。1.3亲子鉴定判断办法排除亲子关系的规范:排除亲子关系的STR位点3个;不能排除亲子关系的,计算亲子关系概率(RCP),计算办法3如下:RCP=PI总/(PI总+1)100%; PI总=PI1PI2PI3PIn双亲(三联体)与单亲(二联体)的亲子关系指数(PI)计算办法不同。三联体PI计算办法如下:PI=X/Y,其中X=fC;Y=fg(f为生母给孩子必需等位基因时机;C为待检父亲给孩子必需等位基因时机;g为必需等位基因的频率)。由于母亲遗传信息的缺失,单亲PI的计算有其特殊性,简便计算办法见表1。PI计算中的有关基因频率为本实验室统计数据。2结果2.1排除案例在213例亲子鉴定样本中,单
9、亲亲子鉴定165例,不排除133例,排除32例,排除率为19.39%;在双亲亲子鉴定48例中,不排除39例,排除9例,排除率为18.75%。双亲的排除案例中排除亲子关系的STR位点均为3个以上。但在165例单亲鉴定中,有3例出现排除亲子关系的STR位点数小于3个,后经检测母亲基因位点,排除指标均大于3个。在双亲鉴定的排除案例中,如果隐匿母亲遗传信息,检测结果的排除指标数会减少12个,但是结论不变,没有出现误判。双亲排除案例的平均排除指标数为6.5个;单亲排除案例的平均排除指标数为4.7个。排除指标数情况见图1。在41例排除案例中,不同的STR位点,出现的概率不同,D8S1179出现的概率最高,
10、为61.11%;D21S11、D5S818、FGA、D7S820、D18S51、D13S317约在50%左右;TPOX、THO1和CSF1PO仅占10%下列,D3S1358、D16S539、VWA、D2S1338、D19S433在10%30%。各STR位点在排除案例中出现的规律见图2。2.2认定案例在不排除亲子关系的案例中,将RCP值分为3个范围:小于99.73%,99.73%99.99%,大于99.99%;单亲和双亲的RCP值见表2。在133例单亲不排除案例和39例双亲不排除案例中,双亲RCP值均大于99.9999%,最大RCP值为99.99999999%;而单亲的RCP值明显偏低,有29.
11、3%低于99.73%,只有24%的案例RCP大于99.99%。3讨论短串联重复序列(STR)目前已广泛应用于亲子鉴定中。本中心采用16个STR位点的AmpFeSTRTMIdentifiler PlusTM试剂盒进行日常亲子鉴定。在工作中作者察看到来进行亲子鉴定的,许多为父子组合的单亲亲子鉴定,其原因多为母亲不配合、父亲另有隐情不希望母亲知道、节省检测费用等。由于父子组合短少母亲的遗传信息,势必在排除信息和RCP值等方面都要低于父母子组合的亲子鉴定,影响到亲子鉴定的准确性。由于STR基因的高突变性4,普遍认为排除亲子的STR指标数应有3个以上。本文在41例排除案例中察看到,所有排除案例中排除指标
12、数均大于3个。如果排除指标小于3个,应增加母亲样本或STR基因位点。本文作者察看有5例出现小于3个排除指标,后经增加母亲遗传信息,排除指标均大于3个。比拟排除案例中单亲和双亲组的排除指标发现,双亲比单亲组的排除指标数平均高出2个。本文选用的16个基因位点中, D8S1179、D21S11、D5S818和FGA基因座多态性5最高,其DP0.95,H0.85,PE0.65;TH01和TPOX基因座在多态性方面较差,其H12STR亲子鉴定亲子关系指数基因鉴定39例(29.32%)没有到达99.73%。分析其中原因,一方面是由于短少了母亲的遗传信息,另一方面是由于父子所共有的等位基因中高频率基因过多,
13、造成RCP值降低。由于单亲鉴定的遗传数据不完整,需要考虑增加检测母亲的基因位点或增加STR位点的检测数目,由此可见,对于司法诉讼案例,除非母亲已不在世,否那么必须进行双亲鉴定。参考文献:1柳燕,何根兰,李莉,等.复合扩增9个STR位点在亲子鉴定中的应用评估J.法医学杂志,2000,16(4):216-217.2 Walsh PS, Melzger DA, Higuehi R. Chelex 100 as amedium for simple extraction of DNA for PCR- basedtyping from forensic material J. Biotechniques, 1991,10:506-518.3刘开会,李宗亮.实用法医DNA检验学M,西安:西安出版社,2000.3004李建金,伍祥林,吕德坚,等.短串联重复基因突变率的分析研究J.中国法医学杂志,2000,15(增):10.5王瑞恒,王立铭,杜泓,等.辽南地区人群9个STR基因座的多态性分析J.中国法医学杂志,2022,17(4):237-239.12
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