细胞斑点试验课件

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1、LOGO T-SPOT.TB诊断结核感染诊断结核感染 临床应用进展临床应用进展细胞斑点试验细胞斑点试验结核的现状结核的现状 结核病是全球严重的公共卫生问题之一。据结核病是全球严重的公共卫生问题之一。据WHO统计，全球约有统计，全球约有20亿人感染结核分枝杆菌，每年有约亿人感染结核分枝杆菌，每年有约200万人死于结核。万人死于结核。我国是世界上我国是世界上22个结核病高负担国家之一，结核个结核病高负担国家之一，结核感染导致的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的感染导致的死亡人数是其他传染性疾病总死亡人数的2倍以上。倍以上。细胞斑点试验细胞斑点试验结核的传统诊断手段结核的传统诊断手段结核菌素皮试：

2、结核菌素皮试：低敏感性：低敏感性：免疫力低下人群中其敏感性大大降低。低特异性：低特异性：与卡介苗接种和其他环境分枝杆菌有交叉，易造成“假阳性”结果。细菌学检查：细菌学检查：常规培养：2月；快速培养：1周；阳性率取决于采集标本中细菌数量，不利于早期诊断。病理学检查：病理学检查：阳性率低，对取材标本有较高要求，有创伤，对肉芽肿性病变需进一步鉴别。细胞斑点试验细胞斑点试验基于基于T淋巴细胞检测结核感染的原理淋巴细胞检测结核感染的原理v 结核感染的免疫应答反应以结核感染的免疫应答反应以细胞免疫细胞免疫为主，结核感染为主，结核感染后体内长期存在后体内长期存在抗原特异性的记忆性抗原特异性的记忆性T细胞细胞

3、v 当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释放当再次遇到抗原刺激时，能迅速活化增殖，释放r r干扰干扰素素v r r干扰素干扰素是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要是结核分枝杆菌感染后机体免疫应答中最重要的细胞因子的细胞因子细胞斑点试验细胞斑点试验基于基于T淋巴细胞检测结核感染的原理淋巴细胞检测结核感染的原理T-SPOT.TB技术：技术：v 利用结核杆菌感染者利用结核杆菌感染者外周血单个核细胞（外周血单个核细胞（PBMC）中中存在存在结核特异性结核特异性T T细胞细胞，这些淋巴细胞在受到这些淋巴细胞在受到结核特异结核特异 抗原刺激抗原刺激后后分泌分泌r r干扰素干扰素而设计的而设计的T T

4、细胞免疫斑点试验。细胞免疫斑点试验。v 检测外周血中受检测外周血中受结核特异抗原刺激结核特异抗原刺激释放释放r r干扰素干扰素的的T T淋淋巴细胞巴细胞，经酶联免疫显色后，通过，经酶联免疫显色后，通过ELISPOTELISPOT分析系统分析系统 对斑点进行计数，对斑点进行计数，1 1个斑点代表一个细胞，计算出抗原个斑点代表一个细胞，计算出抗原特异性细胞的频率。特异性细胞的频率。细胞斑点试验细胞斑点试验基于基于T淋巴细胞检测结核感染的原理淋巴细胞检测结核感染的原理包包细胞斑点试验细胞斑点试验基于基于T淋巴细胞检测结核感染的原理淋巴细胞检测结核感染的原理细胞斑点试验细胞斑点试验基于基于T淋巴细胞检

5、测结核感染的原理淋巴细胞检测结核感染的原理细胞斑点试验细胞斑点试验基于基于T淋巴细胞检测结核感染的原理淋巴细胞检测结核感染的原理v 空白对照孔内斑点数小于空白对照孔内斑点数小于10且阳性对照孔内斑点数大且阳性对照孔内斑点数大于于20时视为试验有效时视为试验有效v T-SPOT.TB试验结果用每试验结果用每106 PBMCs中斑点形成细胞中斑点形成细胞（SFCs）的数目来描述，即）的数目来描述，即SFCs/106 PBMCs细胞斑点试验细胞斑点试验T-SPOT.TB的临床意义的临床意义vT-SPOT.TB高灵敏度高灵敏度 细胞斑点试验细胞斑点试验T-SPOT.TB的临床意义的临床意义种类种类内容

6、摘要内容摘要受试者数受试者数量量文献发表文献发表活动性结核活动性结核/灵灵敏度敏度将将T-SPOT.TB的检测结果与最后通过涂片和培养确诊的结果进的检测结果与最后通过涂片和培养确诊的结果进行比较。包括牛型结核杆菌和非洲型结核杆菌感染的患者。行比较。包括牛型结核杆菌和非洲型结核杆菌感染的患者。T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为97.2%。（。（CI 90.3-99.7%）72Meier et al Eur J Microbiol Infect Dis(2005)；24:529-536在经培养确诊的活动性结核受试者中，在经培养确诊的活动性结核受试者中，T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为96

7、.6%。其中。其中29例免疫力低下患者，例免疫力低下患者，T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为100%87Lee et al.ERJ 2006;28:2430在确诊病例（涂片或培养阳性）和临床诊断病例（有临床症状在确诊病例（涂片或培养阳性）和临床诊断病例（有临床症状和抗痨治疗有效）中，和抗痨治疗有效）中，T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为90.3%，并且不，并且不受受CD4细胞数量影响。细胞数量影响。30Clark et al.Clin.Exp.Imm.2007;150(2):238-44在经痰培养或肺部病变组织病理活检确诊的结核患者中，在经痰培养或肺部病变组织病理活检确诊的结核患者中，

8、T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为92%。140Kang et al Chest.2007 Sep;132(3):959-65在确诊的肺结核患者和疑似肺外结核患者中，在确诊的肺结核患者和疑似肺外结核患者中，T-SPOT.TB的阳的阳性率性率94%。32Kim et al.Arch Intern Med.2007;167;20:2255-2259在免疫力正常和免疫力低下的受试人群中，在免疫力正常和免疫力低下的受试人群中，T-SPOT.TB的灵敏的灵敏度分别为度分别为94%和和95%。所有受试者中，所有受试者中，42%为肺外结核患者。为肺外结核患者。186Kim et al.Am J Med

9、2009；122,189-195经培养确诊、抗痨治疗不超过经培养确诊、抗痨治疗不超过2 2周的结核患者用周的结核患者用T-SPOT.TB检检测，阳性率测，阳性率98%（57/58）。）。58Janssens et al ERJ 2007；30(4):722-8在经培养确诊的活动性结核患者中，在经培养确诊的活动性结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为94%。32Dominguez et al Clin VaccImmunol 2008;15;168-71在经培养确诊的活动性结核患者中，在经培养确诊的活动性结核患者中，T-SPOT.TB的灵敏度为的灵敏度为94.1%。270Chee e

10、t al J Clin Microbiol.2008;46(6):1935-40细胞斑点试验细胞斑点试验T-SPOT.TB的临床意义的临床意义vT-SPOT.TB高特异性高特异性 ESAT-6CFP 10均来自结核分枝杆菌基因组均来自结核分枝杆菌基因组RD1区区域域 仅结核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）存在仅结核分枝杆菌复合群（人型、牛型、非洲型）存在 RD1区区基因基因 卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失卡介苗和大多数环境分枝杆菌缺失RD1区区基因基因 T-SPOT.TB不会受卡介苗接种影响不会受卡介苗接种影响 细胞斑点试验细胞斑点试验T-SPOT.TB的临床意义的临床意义种类种类内容摘要

11、内容摘要受试者数受试者数量量文献发表文献发表特异性特异性用用T-SPOT.TB检测检测14例鸟分枝杆菌感染者，例鸟分枝杆菌感染者，13例阴性，例阴性，1例为例为临界值，复查也为阴性。临界值，复查也为阴性。14Adams et al Sc.J Inf.Dis.2008;40(3):196-203.经过结核筛查的无症状的受试者，经过结核筛查的无症状的受试者，T-SPOT.TB检测结果全部为检测结果全部为阴性，特异性阴性，特异性100%。47Clark et al.Clin.Exp.Imm.2007;150(2):238-44在德国用在德国用T-SPOT.TB对健康的卫生保健工作者进行筛查。仅对健康

12、的卫生保健工作者进行筛查。仅1例阳性例阳性（1/95），为影像学工作者，接触病人超过，为影像学工作者，接触病人超过35年。年。TST检测假阳性结果检测假阳性结果34%（32/95）。）。95Barsegian et al.J of Hospital Inf 2008；69(1):69-76在接触结核的健康医务工作者和健康对照受试者中用在接触结核的健康医务工作者和健康对照受试者中用TST和和T-SPOT.TB检测。检测。155健康医务工作者中，健康医务工作者中，TST阳性的阳性的27例，而例，而T-SPOT.TB仅仅3例阳性。健康对照组例阳性。健康对照组T-SPOT.TB全部阴性而全部阴性而TS

13、T有有3例阳性。例阳性。218 Storla et al.BMC Infectious Diseases 2009,9:60 细胞斑点试验细胞斑点试验基于基于T淋巴细胞检测结核感染的原理淋巴细胞检测结核感染的原理v T-SPOT.TB在诊断结核感染方面具有良好的敏感性和在诊断结核感染方面具有良好的敏感性和特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今天，特异性，在现有结核诊断方法存在缺陷的今天，T-SPOT.TB 可以给临床诊断提供参考。可以给临床诊断提供参考。v 基于结核抗原特异性基于结核抗原特异性T细胞向病变部位集中的特点，细胞向病变部位集中的特点，T-SPOT.TB的检测物已不局限于静脉血，支气管肺泡灌的检测物已不局限于静脉血，支气管肺泡灌洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺洗液、痰液、胸腹水、脑脊液等也可用于对肺内及肺外结核的诊断。外结核的诊断。LOGO