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1、高效液相色谱柱柱效测定一、实验目的 1了解高效液相色谱仪的基本结构和工作原理 2学习高效液相色谱仪的使用3学习、掌握液相色谱柱柱效测定方法二、基本原理 高效液相色谱法是以液体作为流动相的一种色谱分析法，它亦是根据不同组分在流动相 和固定相之间的分配系数的差异来对混合物进行分离的。气相色谱中评价色谱柱柱效的方法 及计算理论塔板数的公式同样适合于高效液相色谱，即：utn = 5.54 r-l Y1/2式中：tR为组分的保留时间Ry1/2为色谱峰的半峰宽度Y 为色谱峰的峰底宽度三、仪器和试剂1仪器 1：高效液相色谱仪（紫外检测器）2仪器 2：高效液相色谱仪（紫外检测器）3. 50p l微量进样器 4
2、试剂：苯、萘、联苯、甲醇均为分析纯；纯水为重蒸的去离子水。配制成含苯、萘、联苯各30p l/ml的甲醇溶液。四、实验条件1. 色谱柱1长15cm，内径4.6mm,装填10pm的C-18烷基键合固定相2. 色谱柱2长15cm，内径4.6mm,装填5pm的C-18烷基键合固定相3. 流动相 甲醇:水（85:15）,流量0.8ml/min4. 紫外光度检测器 波长254nm,灵敏度0.085. 进样量5p l五、实验步骤1. 根据实验条件和实验录像指导，按 KLC321 仪器操作步骤将仪器调节至进样状态， 待仪器流路及电路系统达到平衡，色谱工作站之“采样系统”基线平直时，即可进样。2. 吸取5p l
3、苯、萘、联苯的甲醇溶液进样，并用色谱工作站记录色谱数据，同时记录 色谱数据文件名。3. 用色谱工作站之“数据处理”系统处理数据文件并记录所需数据。4. 在仪器上测定色谱柱2的塔板数，打印色谱图并比较色谱柱柱效差异。六、数据记录及处理1 .记录实验条件。（ 1）色谱柱与固定相（ 2）流动相及其流量、柱前压（ 3）检测器及其灵敏度（ 4）进样量2. 记录色谱峰的保留时间tR和相应色谱峰的半峰宽丫1/2。R1/23. 分别计算苯、萘、联苯在该色谱柱上的理论塔板数n和理论塔板高度。七、思考题1由本实验计算出的各组分理论塔板数说明什么问题？ 2紫外光度检测器是否适用于检测所有有机化合物，为什么？ 3. 试分析色谱柱1和色谱柱2 测定结果的差异及产生的原因。
高效液相色谱柱柱效测定
