实验五 离体小肠平滑肌的生理特性及药物作用的观察

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1、实验五 离体小肠平滑肌的生理特性及药物作用的观察【实验目的】学习一种离体组织器官实验方法;观察离子成分、酸碱度、温度、乙酰胆碱、 去甲肾上腺素对离体家兔小肠平滑肌的作用；分析平滑肌活动的某些生理特性及 理化环境改变对它的影响。【实验原理】 消化道平滑肌具有自动节律性、较大的伸展性，对化学物质、温度及牵张刺 激较为敏感等生理特性。【实验材料】实验动物：家兔，2.0-2.5kg实验药品：台式液、0.01%去甲肾上腺素溶液、0.01%乙酰胆碱溶液、0.01%阿托 品溶液、1.0%氯化钙溶液、lmol/l盐酸溶液、lmol/1氢氧化钠溶液。实验器材：恒温平滑肌槽、小烧杯、污物杯、张力换能器、双凹夹、温

2、度计、BL-420 生物信号系统、丝线等。【实验步骤】1. 恒温浴槽的准备工作；2. 标本制备；3. 仪器连接与设置；4. 启动计算机，打开BL-420生物信号系统，调节参数，开始记录。 观察项目1. 自动节律性收缩，描记一段离体小肠平滑肌的收缩曲线，观察其节律性 收缩及张力水平。2. 观察胆碱能受体激动剂对肠断收缩的影响及阻断剂的作用。（1）乙酰胆碱的作用：向浴槽标本管中加入0.01%的乙酰胆碱溶液12 滴，观察肠管张力和收缩有何变化。作用产生后，洗涤三次，进 行下一项实验。（2）阿托品的作用：向浴槽标本管中加入0.01%的阿托品溶液23滴， 两分钟后，再加入 0.01%的乙酰胆碱溶液 12

3、 滴，观察肠管张力和收缩 有何变化。与（1）比较结果后，洗涤三次，待其活动稳定后，进行下一项实验。3. 观察肾上腺素能受体激动剂对肠断收缩的影响及阻断剂的作用。 去甲肾上腺素的作用：向浴槽标本管中加入 0.01%的去甲肾上腺素 23 滴，观察肠管张力和收缩有何变化。然后洗涤三次，待其活动稳定后， 进行下一项实验。4观察钙离子对肠断收缩的影响 向浴槽标本管中加入1%的氯化钙溶液23滴，观察肠管平滑肌的反 应。然后洗涤三次，待其活动稳定后，进行下一项实验。5观察酸碱度对肠断收缩的影响向浴槽标本管中加入lmol/l的盐酸溶液12滴,观察平滑肌的反应, 待作用出现明显后，在此基础上，加入lmol/l的

4、NaOH溶液12滴，观察平滑肌 的反应。【实验结果】1. 乙酰胆碱对肠断收缩的影响：小肠平滑肌收缩活动加强。 -, I-li.oo刊冷 0.靈 至:嗽旳-1ittiH :呛靈 r 平均IS： -6 SC2. 阿托品和乙酰胆碱对肠断收缩的影响：小肠平滑肌收缩活动不受影响。平均fl: F3.去甲肾上腺素对肠断收缩的影响：小肠平滑肌收缩活动减弱。0KJ.Q 490 帥”矗 : 1欲/分Jft大g : -G.1U 最小（S : -3.5dc 車均B i -3 3f垂甲！*4.钙离子对肠断收缩的影响：小肠平滑肌收缩活动加强。5.酸碱度对肠断收缩的影响：小肠平滑肌收缩活动先减弱后恢复。1. 肠管勿牵拉过紧

5、或过松，且连线必须垂直 ,且不得与浴槽的管壁等接触，以 免摩擦。2. 浴槽中的液体的量应以高过肠断为准，并保持液面高度一致。3. 药物应滴在肠管附近，药物作用若不明显，可以不加药物，但不可一次过多。4. 每次加药出现反应后，应必须立即更换浴槽内的台式液至少三次，待肠管恢 复稳定活动后，再观察下一个项目。【实验思考】 1.哺乳动物离体器官或组织在灌流液中保持良好状态应具备的条件？温度：本实验控制恒定温度37度；湿度：要时刻记住用相应的润湿液润湿， 本次试验用哺乳动物的台氏液；PH：要与哺乳动物体液相似；避免不必要的刺激: 不要用手或者是金属触碰；离子成分与浓度：要与相关的动物体液相似，本实验 是

6、台氏液。2.每一项实验结果的分析及原因解释：滴加乙酰胆碱后小肠平滑肌收缩明显增强，这是因为乙酰胆碱与小肠平滑肌 肌膜上的M受体结合后，可以在膜去极化未达到一定的电位时提前激活更多的慢 钙通道，使大量的钙离子内流，进而使动作电位产生的频率增加，所以小肠的平 滑肌收缩增强；先加阿托品再加乙酰胆碱后对小肠平滑肌的收缩不影响。因为 阿托品是乙酰胆碱的抑制剂，故先加阿托品再加乙酰胆碱，乙酰胆碱对小肠平滑 肌的收缩不影响；加入去甲肾上腺素后，可见离体肠管活动减弱，去甲肾上腺素，主要有a和B 肾上腺素能受体，去甲肾上腺素与B2肾上腺素受体结合占优势，引起平滑肌的 舒张，故平滑肌收缩活动减弱。加入CaCl2后

7、，离体肠管活动增强。这是因为 加入氯化钙后，细胞外液Ca2+浓度升高，则Ca2+内流增加，使得细胞内液中Ca2+ 浓度升高，Ca2+与钙调蛋白结合增加，促进了横桥的激活，因而收缩力增加。 滴加盐酸后小肠平滑肌收缩明显减弱，因为加入盐酸后，小肠所处环境的氢离子 浓度升高，氢离子可以影响慢钙通道的开放，是钙离子内流减少，进而影响动作 电位产生的频率，另外氢离子能与钙离子竞争钙调蛋白结合的位点，使肌凝蛋白 ATP 酶活性下降、 和肌丝滑行的生化过程，以小肠的平滑肌收缩显著减弱。几 秒后加入氢氧化钠后中和了氢离子，使小肠所处的环境恢复正常，所以其收缩慢 慢趋于正常。3. 维持哺乳动物离体小肠平滑肌活动

8、和维持离体蛙心活动所需的条件的不同： 心脏使用的是任氏液，而小肠使用的是台式液，心脏可以直接暴露在空气中，而小肠需要浸泡再台式液中，心脏可以在普通室温下进行实验，而小肠需要在接 近37C的水温下且要不断通气才有较为强烈的收缩活动。4. 钙离子在平滑肌收缩中起的作用： 当平滑肌细胞受刺激而兴奋时，钙离子由膜外进入膜内，并在胞内基质一种磷酸激酶的作用下，使肌凝蛋白磷酸化，从而诱发肌浆网中的钙离子进一步释放， 肌钙蛋白分子的C亚单位与钙离子结合，导致肌凝蛋白和肌动蛋白相结合，造成 平滑肌收缩。5. 去甲肾上腺素、乙酰胆碱对小肠平滑肌和心肌的作用的不同：去甲肾上腺素对心肌的作用是正性的变时、变力、变传导作用，对小肠平滑肌 的作用是减弱小肠平滑肌的活动；乙酰胆碱对心肌是负性的变时、变力、变传导 作用，对小肠平滑肌则是加强平滑肌的活动。