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1、试验菌浓菌液贮藏周期验证方案文件编码：项 目姓 名签 名日 期起 草审 核审 核批 准生效日期年 份 试验菌工作菌贮藏周期验证目录1、试验菌浓菌液贮藏周期验证计划2、试验菌浓菌液贮藏周期验证小组名单3、试验菌浓菌液贮藏周期验证方案4、试验菌浓菌液贮藏周期验证培训记录5、试验菌浓菌液贮藏周期验证附属记录6、试验菌浓菌液贮藏周期验证报告7、试验菌浓菌液贮藏周期验证合格证书试验菌浓菌液贮藏周期验证计划根据我公司认证领导小组的要求及验证委员会的安排，对试验菌浓菌液贮藏周期进行验证，具体安排如下：一、2012年03月01日2012年03月02日，制定验证方案，由试验菌浓菌液贮藏周期验证小组组长负责起草。
2、二、2012年03月03日2012年03月04日，验证方案讨论、修改、审批和培训。三、2012年03月05日2012年03月20日，验证工作实施。 四、2012年03月21日2012年03月22日，根据验证情况与记录，书写验证报告。五、2012年03月23日2012年03月24日，验证报告审核批准，合格证发放。试验菌浓菌液贮藏周期验证小组名单组 长： 成 员： 试验菌浓菌液贮藏周期验证方案 页码： 4 / 41、 目的验证试验菌浓菌液在28贮藏条件下保存期限。2、 适用范围适用于金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、铜绿假单胞菌、白色念珠菌和黑曲霉的浓菌液贮存周期验证。3、 内容
3、1. 概述微生物检查试验中，试验菌的制备至关重要，加入菌量的都少直接影响检测结果。而中华人民共和国药典2010年版二部对试验菌的制备和菌量都提出了明确的要求，并对试验菌菌液贮藏条件都有严格规定。为保证微生物检测实验的准确性，需要对浓菌液的贮藏时间和贮藏条件进行验证。 2. 验证项目及认可标准试验菌 项目贮藏条件菌落计数结果金黄色葡萄球菌2850100cfu/ml大肠埃希菌2850100cfu/ml枯草芽孢杆菌2850100cfu/ml生孢梭菌2850100cfu/ml铜绿假单胞菌2850100cfu/ml白色念珠菌2850100cfu/ml黑曲霉2850100cfu/ml3. 验证依据中华人民
4、共和国药典2010年版二部4. 验证方法与内容4.1. 验证方法：平皿计数法4.2. 验证内容4.2.1. 环境条件要求：所有检查在环境洁净度10000级下的局部100级洁净度的单向流空气区（生物安全柜）内进行，其全过程严格遵守无菌操作，能防止微生物再污染。4.2.2. 仪器设备：实验中所用的玻璃仪器及金属器皿在使用前均经过121湿热灭菌至少30分钟。名称生产厂家型号校验情况生化培养箱电热恒温培养箱自动台式灭菌器电子天平数字酸度计生物安全柜4.2.3. 验证前准备：a. 验证用试验菌 均来自贵州省药品检验所试验菌 项目试验菌编码代数接种日期金黄色葡萄球菌大肠埃希菌枯草芽孢杆菌生孢梭菌铜绿假单胞
5、菌白色念珠菌黑曲霉b. 培养基的制备：名称生产厂家批号配制批号营养肉汤培养基硫乙醇酸盐流体培养基改良马丁培养基营养琼脂培养基改良马丁琼脂培养基以上培养基按照说明书配制后灌装于洁净的容器中，加塞，按经过验证合格的灭菌程序进行灭菌，培养基的适用性检查应符合规定。c. 稀释液的制备： 0.9无菌氯化钠溶液：取氯化钠9.0g，加水溶解至1000ml，121灭菌20min。 0.05聚山梨酯80无菌氯化钠溶液：取土温80 0.5ml，加0.9无菌氯化钠溶液至1000ml，121灭菌20min。d. 菌原液制备： 将金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物分别接种至营养肉汤培养基
6、中，经30-35培养18-24小时。 将生孢梭菌的新鲜培养物接种至硫乙醇酸盐流体培养基中，经30-35培养18-24小时。 将白色念珠菌的新鲜培养物接种至改良马丁培养基中，经23-28培养24-48小时。 接种黑曲霉的新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基上，2328培养57天，加入35ml含0.05（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，备用。e. 新制备原菌液计数 取金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌、白色念珠菌的菌原液，用稀释液0.9无菌氯化钠溶液，以十倍递增稀释法制备菌液。金黄色葡萄球菌
7、、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌用营养琼脂培养基计数；生孢梭菌用硫乙醇酸盐流体培养基计数；白色念珠菌用改良马丁琼脂培养基计数。 取黑曲霉孢子悬液，用稀释液0.05聚山梨酯80无菌氯化钠溶液，以十倍递增稀释法制备菌液，用改良马丁琼脂培养基计数。f. 保存条件的确认 将上述原菌液及各稀释级别菌液包扎好后，置冰箱（2-8）保存，原菌液一定时间计数一次，计数方法严格同上，使操作带来的误差减少到最少。g. 各项计数结果见验证报告。 5. 组织实施5.1. 验证机构的组成5.1.1. 公司验证委员会，负责所有验证工作的领导和组织、审批验证方案和验证报告、发放验证证书。5.1.2. 试验菌浓菌液贮藏
8、周期验证工作小组，负责该验证项目的验证方案起草、实施、组织与协调实施，负责验证样品检测，完成各项记录，根据检验和确认结果进行评定、完成验证报告。部门部门职责责任人工作划分质量部方案起草、实施、书写报告操作实施质量部取样、检验、出报告操作实施验证委员会方案审定、批准、实施、发放验证合格证方案审核方案批准4、 附件及相关表格文件试验菌浓菌液贮藏周期验证报告文件编码：项 目姓 名签 名日 期起 草审 核审 核批 准生效日期年 份试验菌浓菌液贮藏周期验证报告页码：5/51、 验证概述由于中华人民共和国药典2010年版二部对试验菌的制备和菌量都提出了明确的要求，并对试验菌菌液贮藏条件都有严格规定。为保证
9、微生物检测实验的准确性，对浓菌液的贮藏时间和贮藏条件进行验证，以规范实验室试验菌的制备和使用。 1. 验证组织与实施1.1. 验证小组成员及职责分工部门部门职责责任人工作划分质量部方案起草、实施、书写报告操作实施质量部取样、检验、出报告操作实施验证委员会方案审定、批准、实施、发放验证合格证方案审核方案批准1.2. 本验证由质量部负责并由相关人员根据试验菌浓菌液贮藏周期验证方案所规定的方法与步骤实施。2. 实施时间为：年月日年月日。2、 各项目验证结论1. 新制备原菌液计数结果菌液名称稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期结果判断平皿1平皿1平均数金黄色葡萄球菌铜绿假单胞菌大肠埃希菌枯草芽孢
10、杆菌生孢梭菌白色念珠菌黑曲霉操作人：复核人：2. 浓菌液贮藏期间菌落计数结果2.1. 金黄色葡萄球菌贮藏日期稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期结果判断平皿1平皿1平均数操作人：复核人：2.2. 铜绿假单胞菌贮藏日期稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期结果判断平皿1平皿1平均数操作人：复核人：2.3. 大肠埃希菌贮藏日期稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期结果判断平皿1平皿1平均数操作人：复核人：2.4. 枯草芽孢杆菌贮藏日期稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期结果判断平皿1平皿1平均数操作人：复核人：2.5. 生孢梭菌贮藏日期稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期
11、结果判断平皿1平皿1平均数操作人：复核人：2.6. 白色念珠菌贮藏日期稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期结果判断平皿1平皿1平均数操作人：复核人：2.7. 黑曲霉贮藏时间稀释度稀释日期计数（cfu/ml）计数日期结果判断平皿1平皿1平均数操作人：复核人：3、 建议、结果分析和验证总结1. 建议 1.1. 加强生测室检验人员的操作技能培训，使试验菌浓菌液的制备过程标准化，程序化。2. 结果分析及验证总结2.1. 根据上述验证过程及结果分析，本公司生测实验室试验菌浓菌液贮藏周期进行验证，其验证过程符合中华人民共和国药典（2010年版二部）的要求，其贮藏周期定为7天。日常试验菌浓菌液的制备按此验证程序进行。2.2. 再验证周期 根据中华人民共和国药典（2010年版二部）的规定，当浓菌液在贮藏日期内使用时菌液计数不符合要求时，应重新对试验菌浓菌液贮藏周期进行验证。
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