临床微生物检验：弧菌属

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1、弧弧 菌菌 属属Vibrio分类分类弧菌科弧菌科弧菌属弧菌属异单胞菌属异单胞菌属肠弧菌属肠弧菌属发光杆菌属发光杆菌属等共等共8个属个属O1群霍乱弧菌群霍乱弧菌非非O1/O139群霍乱弧菌群霍乱弧菌副溶血弧菌副溶血弧菌等等36个种个种 注：邻单胞菌属现属肠杆菌科、气单胞菌属属于气单胞菌科注：邻单胞菌属现属肠杆菌科、气单胞菌属属于气单胞菌科拟态弧菌拟态弧菌O139群霍乱弧菌群霍乱弧菌Vibrionaceae弧菌科共同生物学特性弧菌科共同生物学特性 革兰阴性弧菌或革兰阴性弧菌或短杆菌短杆菌 兼性厌氧，营养要求不高兼性厌氧，营养要求不高 极端单鞭毛极端单鞭毛 动力阳性动力阳性 发酵葡萄糖发酵葡萄糖 氧

2、化酶阳性氧化酶阳性 革兰阴性、弧形（短杆）菌、动力（）革兰阴性、弧形（短杆）菌、动力（）兼性厌氧，营养要求不高兼性厌氧，营养要求不高 除麦氏弧菌外除麦氏弧菌外，氧化酶（，氧化酶（+）发酵葡萄糖产酸，罕见产气；硝酸盐还原（发酵葡萄糖产酸，罕见产气；硝酸盐还原（+）钠离子能刺激其生长，部分菌株嗜盐钠离子能刺激其生长，部分菌株嗜盐 对对O/129O/129敏感（近年出现抗性株）敏感（近年出现抗性株）弧菌属（弧菌属（VibrioVibrio）的共同生物学特性）的共同生物学特性弧菌属（弧菌属（VibrioVibrio）的共同生物学特性）的共同生物学特性副溶血弧菌副溶血弧菌O/129敏感敏感弧菌属（弧菌属

3、（VibrioVibrio）的共同生物学特性）的共同生物学特性嗜水气单胞菌嗜水气单胞菌O/129耐药耐药弧菌属的致病性弧菌属的致病性（含盐和海水环境中自身微生物群的一部分）（含盐和海水环境中自身微生物群的一部分）肠道内感染肠道内感染肠道外感染肠道外感染 霍乱、胃肠炎霍乱、胃肠炎 伤口感染、败血症等伤口感染、败血症等致病性弧菌所引起的疾病致病性弧菌所引起的疾病霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的病原霍乱弧菌是烈性肠道传染病霍乱的病原菌，为我国法定传染病（甲类），俗称菌，为我国法定传染病（甲类），俗称2 2号病。（号病。（1 1号病为鼠疫）。号病为鼠疫）。霍霍 乱乱 弧弧 菌菌Vibrio choler

4、ae O1 and O139霍乱的流行史霍乱的流行史1 1817-1923 817-1923 共共6 6次次 印度恒河三角洲印度恒河三角洲 古典生物型古典生物型1961 1961 第第7 7次次 印度尼西亚印度尼西亚 EltorEltor生物型生物型1992.10 1992.10 孟加拉湾的印度、孟加拉孟加拉湾的印度、孟加拉 O O139139霍乱的流行史霍乱的流行史O139O139群霍乱弧菌在亚洲的流行群霍乱弧菌在亚洲的流行(1992.10-1994.11)(1992.10-1994.11)感染途径感染途径粪粪口途径口途径致病因素致病因素侵袭力侵袭力 进入小肠，进入小肠，鞭毛鞭毛、菌毛，菌毛

5、，O139O139有荚膜有荚膜粘附于小肠粘膜上皮细胞刷状缘的粘附于小肠粘膜上皮细胞刷状缘的微绒毛上大量繁殖微绒毛上大量繁殖穿过小肠粘膜表面粘液层穿过小肠粘膜表面粘液层致病因素致病因素霍乱肠毒素霍乱肠毒素霍乱弧菌肠毒素（霍乱弧菌肠毒素（CE,cholera enterotoxinCE,cholera enterotoxin）A1:A1:毒素亚单位毒素亚单位 A2:A2:连接亚单位连接亚单位 B B：结合亚单位结合亚单位临床表现临床表现霍乱弧菌的致病霍乱弧菌的致病（严重时液体丢失量达（严重时液体丢失量达5005001000ml/h1000ml/h）剧烈上吐下泻剧烈上吐下泻“米泔水米泔水”样粪便样粪

6、便 严重脱水、酸中毒严重脱水、酸中毒 低血容量性休克低血容量性休克 肌肉痉挛、尿闭、肌肉痉挛、尿闭、死亡。死亡。引起的疾病引起的疾病分类分类（血清群血清群）H H 抗原：共同抗原抗原：共同抗原 特异性低特异性低血清分群血清分群O O 抗原（抗原（A A、B B、C)C)分群和分型的基础分群和分型的基础有有155个血清群（个血清群（O1、O139、非、非O1群霍乱弧菌）群霍乱弧菌）分类分类(血清型血清型)O O抗原有抗原有A,B,CA,B,C三种抗原因子，不同组合不同型别三种抗原因子，不同组合不同型别分类分类（生物型生物型）O1群每个血清型根据群每个血清型根据表型表型不同分成不同分成噬菌体分型噬

7、菌体分型生物分型生物分型第第IV组噬菌体组噬菌体 古典生物型古典生物型 第第V组噬菌体组噬菌体 El-Tor生物型生物型 O1群霍乱弧菌群霍乱弧菌 古典生物型古典生物型El-Tor生物型生物型生物学特性生物学特性(生物型生物型的区分：根据的区分：根据生物特性生物特性分型分型)纯培养革兰染色纯培养革兰染色 霍乱弧菌的革兰染色结果霍乱弧菌的革兰染色结果1.1.形态染色结构特点：形态染色结构特点：革兰阴性，弯曲弧形或逗点状。革兰阴性，弯曲弧形或逗点状。“米泔水米泔水”粪便标粪便标本中可首尾相接本中可首尾相接鱼群样平行排列鱼群样平行排列 鱼群样排列鱼群样排列霍乱弧菌形态（电镜）霍乱弧菌形态（电镜）生物

8、学特性生物学特性纯培养扫描电镜纯培养扫描电镜霍乱弧菌的扫描电镜图（金属镀膜）霍乱弧菌的扫描电镜图（金属镀膜）形态特点：形态特点：弯曲弧形弯曲弧形或逗点状或逗点状生物学特性生物学特性 (电镜电镜)霍乱患者小肠粘膜上皮霍乱患者小肠粘膜上皮局部平切电镜图局部平切电镜图霍乱弧菌扫描电镜图霍乱弧菌扫描电镜图（金属镀膜）（金属镀膜）生物学特性生物学特性 (米泔水样便米泔水样便)霍乱弧菌的运动模式图霍乱弧菌的运动模式图特点：特点：动力（动力（+）呈呈“流星样流星样”样运动。样运动。生物学特性生物学特性 (电镜电镜)霍乱弧菌的鞭毛（单鞭毛）霍乱弧菌的鞭毛（单鞭毛）生物学特性生物学特性 (特殊染色特殊染色10,

9、000)10,000)霍乱弧菌的鞭毛染色霍乱弧菌的鞭毛染色生物学特性生物学特性-培养特性培养特性 需氧或兼性厌氧，有氧环境下长的更好需氧或兼性厌氧，有氧环境下长的更好 营养要求不高营养要求不高 最适生长温度最适生长温度3535 最适最适pH8.2pH8.29.0 Max:10.2(9.0 Max:10.2(耐碱怕酸耐碱怕酸)EltorEltor生物型在血平板上可形成生物型在血平板上可形成-溶血（有变异）溶血（有变异）培养条件初次分离用初次分离用pH8.5碱性蛋碱性蛋白胨水白胨水增菌，增菌，经经46小时液小时液体表面大量繁体表面大量繁殖，形成菌膜殖，形成菌膜培养条件生物学特性生物学特性-培养特性

10、培养特性生物学特性生物学特性(培养特性选择鉴别性平板培养特性选择鉴别性平板)TCBS（硫代硫酸盐硫代硫酸盐-枸橼酸盐枸橼酸盐-胆盐胆盐-蔗糖蔗糖琼脂平板）琼脂平板）霍乱弧菌在霍乱弧菌在TCBSTCBS琼脂平板上形成琼脂平板上形成发酵蔗糖的较大的发酵蔗糖的较大的黄色黄色菌落菌落生物学特性生物学特性(培养特性选择鉴别性平板培养特性选择鉴别性平板)含亚碲酸钾的培养基：含亚碲酸钾的培养基：4号琼脂号琼脂 庆大霉素琼脂庆大霉素琼脂霍乱弧菌在含亚碲酸钾的琼脂平板上将碲离子还霍乱弧菌在含亚碲酸钾的琼脂平板上将碲离子还原成金属碲，形成原成金属碲，形成有灰褐色中心有灰褐色中心的菌落的菌落生物学特性生物学特性-重

11、要的生化反应重要的生化反应霍乱弧菌霍乱弧菌副溶血弧菌副溶血弧菌拟态弧菌拟态弧菌麦氏弧菌麦氏弧菌氧化酶氧化酶 硝酸盐还原硝酸盐还原 除除霍乱和拟态弧菌霍乱和拟态弧菌外，其余弧菌需在含盐培养外，其余弧菌需在含盐培养基上生长，在不含盐的培养基上不生长。基上生长，在不含盐的培养基上不生长。霍乱弧菌霍乱弧菌拟态弧菌拟态弧菌副溶血弧菌副溶血弧菌耐盐试验耐盐试验(%(%NaCl)NaCl)0%6%7%10%0%6%7%10%生物学特性生物学特性-重要的生化反应重要的生化反应 吲哚、枸橼酸盐利用、明胶试验均（吲哚、枸橼酸盐利用、明胶试验均（+）赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶（赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶（+）精氨酸双水解（）精

12、氨酸双水解（）动力（动力（+）发酵葡萄糖、麦芽糖、发酵葡萄糖、麦芽糖、蔗糖蔗糖、甘露醇，乳糖（、甘露醇，乳糖（-）生物学特性生物学特性-重要的生化反应重要的生化反应生物学特性生物学特性-抵抗力抵抗力 河水中：河水中：2020天天 蔬菜水果上：蔬菜水果上：1 1周周 冰内：冰内：4 4天天 对热、干燥、日光和常用消毒剂敏感对热、干燥、日光和常用消毒剂敏感，1001 10012min 2min 即可杀死即可杀死 耐碱怕酸：耐碱怕酸：胃酸中存活胃酸中存活4 4分钟分钟 pH 10.2pH 10.2仍能生长仍能生长 对庆大霉素耐药对庆大霉素耐药：用于制作选择性培养基用于制作选择性培养基 多粘菌素多粘菌

13、素B B(50u/ml)(50u/ml)：E Eltro biotypeltro biotype耐药，耐药，Classic biotypeClassic biotype敏感，可作为分型依据敏感，可作为分型依据微生物学检验微生物学检验患者的米泔水样便、呕吐物、尸检肠内容物患者的米泔水样便、呕吐物、尸检肠内容物或携带有病原菌的海产品和污染的水源等或携带有病原菌的海产品和污染的水源等微生物学检验微生物学检验-检验方法检验方法（1）直接镜检：直接镜检：取标本涂片取标本涂片2张，乙醇或甲醇张，乙醇或甲醇固定，革兰染色，油镜观察。固定，革兰染色，油镜观察。（2）动力和制动试验：动力和制动试验：水样便，悬滴

14、（压滴）、水样便，悬滴（压滴）、高倍镜、暗视野观察动力：高倍镜、暗视野观察动力：穿梭似流星状。穿梭似流星状。同法制同法制备另一标本，加入备另一标本，加入1滴不含防腐剂的霍乱多价诊断滴不含防腐剂的霍乱多价诊断血清（效价血清（效价1:64）；可见运动活泼的细菌）；可见运动活泼的细菌运动停运动停止并发生凝集止并发生凝集，为制动试验阳性；推断存在霍乱弧，为制动试验阳性；推断存在霍乱弧菌。菌。（3）玻片凝集：玻片凝集：O1群和群和O139群抗原的单克隆抗体群抗原的单克隆抗体（4）分离培养：分离培养：常用碱性蛋白胨水、选择性平板常用碱性蛋白胨水、选择性平板（TCBS、4号等），菌落特征和蔗糖发酵菌落，如号

15、等），菌落特征和蔗糖发酵菌落，如有可疑菌落，进一步鉴定。有可疑菌落，进一步鉴定。微生物学检验微生物学检验-检验方法检验方法l）初步鉴定：初步鉴定：与与01群和群和O139群抗血清群抗血清(多价和多价和单价）凝集试验，菌落和菌体形态、氧化酶试单价）凝集试验，菌落和菌体形态、氧化酶试验等作出初步报告。验等作出初步报告。2）最后鉴定：）最后鉴定：根据纯培养后全面生化反应、血根据纯培养后全面生化反应、血清学分群及分型、生物型。清学分群及分型、生物型。微生物学检验微生物学检验-检验方法检验方法初筛试验：初筛试验：(1)(1)霍乱红试验霍乱红试验 (2)2)O/129敏感试验敏感试验 微生物学检验微生物学

16、检验-检验方法检验方法 霍乱红试验（霍乱红试验（+）O/129敏感试验敏感试验初筛试验：初筛试验：(3)(3)黏丝试验黏丝试验 (4 4)耐盐试验耐盐试验 微生物学检验微生物学检验-检验方法检验方法生物分型试验：生物分型试验：a.羊红细胞溶血试验羊红细胞溶血试验 b.鸡红细胞凝集试验鸡红细胞凝集试验 c.VP试验试验 d.多粘菌素多粘菌素B敏感试验敏感试验 e.第第IV和和V组霍乱弧菌噬菌体裂解试验。组霍乱弧菌噬菌体裂解试验。微生物学检验微生物学检验-检验方法检验方法微生物学检验微生物学检验（检验方法）（检验方法）鉴别试验：鉴别试验：霍乱弧菌与霍乱弧菌与拟态弧菌拟态弧菌鉴别：蔗糖发酵鉴别：蔗糖

17、发酵 （）（）（）（）霍乱弧菌和霍乱弧菌和气单胞菌气单胞菌鉴别：鉴别：（）（）（）（）黏丝试验黏丝试验 敏感敏感 耐药耐药 O/129敏感试验敏感试验副溶血弧菌副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus)临床意义临床意义 （1）溶血毒性；）溶血毒性；（2 2）细胞毒性）细胞毒性 （3 3）心脏毒性；）心脏毒性；（4 4）肠毒性）肠毒性 致病因子：致病因子：菌毛菌毛 TDH（thermostable direct hemolysin)TRH（thermostable direct hemolysin related hemolysin)嗜盐性，存在于海水和海产品中，主要引起食物嗜

18、盐性，存在于海水和海产品中，主要引起食物中毒、急性腹泻中毒、急性腹泻、也可引起伤口感染、菌血症。也可引起伤口感染、菌血症。生物学特性生物学特性-形态特征形态特征 革兰氏阴性革兰氏阴性 直或微弯杆菌直或微弯杆菌 极端单鞭毛，极端单鞭毛，无荚膜无荚膜副溶血弧菌革兰染色副溶血弧菌革兰染色生物学特性生物学特性-培养特征培养特征 需氧或兼性厌氧需氧或兼性厌氧 营养要求不高，营养要求不高，嗜盐嗜盐（无盐不生长无盐不生长,最适盐浓度最适盐浓度 3.5%）最适最适pH7.78.0，最适温度，最适温度3037 TCBS TCBS上形成上形成绿色菌落绿色菌落副溶血弧菌在副溶血弧菌在TCBS上菌落上菌落生物学特性生

19、物学特性-培养特征培养特征副溶血弧菌在副溶血弧菌在TCBS上菌落上菌落生物学特性生物学特性-培养特征培养特征1.从腹泻病人中分离到的副溶血弧菌从腹泻病人中分离到的副溶血弧菌95%以上以上 在我萋培养基上可产生在我萋培养基上可产生-溶血溶血现象，称为现象，称为神奈川现象神奈川现象（Kanagawa phenomenon,KP）2.在嗜盐性选择平板上形成较大圆形、隆起、半透明或在嗜盐性选择平板上形成较大圆形、隆起、半透明或不透明、无黏性的菌落。不透明、无黏性的菌落。3.在在SS，Mac平板上形成扁平，无色半透明，蜡滴状的平板上形成扁平，无色半透明，蜡滴状的菌落，不易刮下，有辛辣味。菌落，不易刮下，

20、有辛辣味。生物学特性生物学特性-培养特征培养特征副溶血弧菌神奈川现象副溶血弧菌神奈川现象生物学特性生物学特性-培养特征培养特征副溶血弧菌在羊血平板菌落（不溶血）副溶血弧菌在羊血平板菌落（不溶血）生物学特性生物学特性-培养特征培养特征副溶血弧菌在副溶血弧菌在Mac上上（不分解乳糖：淡黄色菌落）（不分解乳糖：淡黄色菌落）生物学特性生物学特性-生化特征生化特征 氧化酶氧化酶 +蔗糖发酵蔗糖发酵 -（乳糖（乳糖-）葡萄糖发酵葡萄糖发酵 +(麦芽糖麦芽糖+、甘露醇、甘露醇+）NaCl生长试验生长试验 0%NaCl -3%NaCl +7%NaCl +10%NaCl -脲酶脲酶 +/-(临床分离菌株常阳性）

21、临床分离菌株常阳性）微生物学检验程序微生物学检验程序标本标本3.5%NaCl碱性蛋白胨水培养基碱性蛋白胨水培养基TCBS分离培养分离培养可疑菌落（绿色）可疑菌落（绿色）纯培养纯培养菌菌种种鉴鉴定定毒毒素素测测定定生物学特性生物学特性（鉴定特征）（鉴定特征）革兰阴性弧菌或杆菌，动力（）革兰阴性弧菌或杆菌，动力（）氧化酶（），临床分离株脲酶（）氧化酶（），临床分离株脲酶（）TCBS TCBS上绿色菌落、氯化钠生长试验上绿色菌落、氯化钠生长试验 神奈川现象神奈川现象(+)(+)TDHTDH和和TRHTRH的检测：毒素和基因检测的检测：毒素和基因检测 各种生化试验各种生化试验 思考题思考题1.描述弧菌

22、属的共性。描述弧菌属的共性。2.描述霍乱弧菌的血清分群、血清分型和生物分描述霍乱弧菌的血清分群、血清分型和生物分型依据型依据3.霍乱弧菌的致病因子及特点霍乱弧菌的致病因子及特点4.霍乱弧菌的培养特点及生化特征霍乱弧菌的培养特点及生化特征5.如何从粪便标本中快速检出霍乱弧菌如何从粪便标本中快速检出霍乱弧菌6.霍乱弧菌的鉴别鉴定试验主要包括哪些？霍乱弧菌的鉴别鉴定试验主要包括哪些？7.副溶血弧菌的致病及生物学特性（形态结构、副溶血弧菌的致病及生物学特性（形态结构、培养、生化、抵抗力）培养、生化、抵抗力）谢谢！谢谢！KEY POINTSThe genus Vibrio is calssified i

23、n the family Vibrionaceae,and it is the type genus for the family.Vibrio cholera is the pathogen of cholera and it is the most important species in the genus Vibrio.It is now divided into three major subgroups:V.cholera O1,V.cholera O139,and V.cholera non-O1.Vibrio parahaemolyticus causes gastroenteritis in human following ingestion of contaminated seafood.KEY POINTSPresumptive identification of Vibrio species based on colonial and microscopic morphology,definite identification relies on former biochemical tests and serological reaction.