动物实验的基本技术和方法优质分析

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1、上海中医药大学实验动物中心上海中医药大学实验动物中心汤家铭汤家铭1严选文书一、动物福利和动物实验伦理问题一、动物福利和动物实验伦理问题 什么是动物福利？什么是动物福利？动物福利是指动物在整个生命过程中应得到人类的保护，动物福利是指动物在整个生命过程中应得到人类的保护，其基本原则是要善待动物，保证动物的健康和快乐。其基本原则是要善待动物，保证动物的健康和快乐。动物福利的提出是基于这样一个观点，即动物与人一样，动物福利的提出是基于这样一个观点，即动物与人一样，有思维、有情感，应当给予与人一样的生存权。有思维、有情感，应当给予与人一样的生存权。台湾学者夏良宙（台湾学者夏良宙（19901990年）把动

2、物福利概括成两句话：年）把动物福利概括成两句话：善待活着的动物，善待活着的动物，减少动物死亡的痛苦。减少动物死亡的痛苦。应该再加一句：应该再加一句：动物死后应得到妥善处理。动物死后应得到妥善处理。2严选文书 在国际上被普遍认可的动物福利包括以下在国际上被普遍认可的动物福利包括以下5 5个个内容，即：内容，即：1.1.应提供给动物满足生长发育和繁衍后代的营养食应提供给动物满足生长发育和繁衍后代的营养食物和清洁的饮水，使其免受饥渴。（吃好喝好）物和清洁的饮水，使其免受饥渴。（吃好喝好）2.2.应提供给动物适当的栖息之地和饲养场所，使其应提供给动物适当的栖息之地和饲养场所，使其能休息和睡眠。（休息好

3、）能休息和睡眠。（休息好）3.3.应提供预防动物疾病和患病后及时诊疗的措施，应提供预防动物疾病和患病后及时诊疗的措施，使其免受疾病和伤害的痛苦。（健康成长）使其免受疾病和伤害的痛苦。（健康成长）4.4.应提供给动物安静的饲养环境，无刺激动物发生应提供给动物安静的饲养环境，无刺激动物发生应激和恐惧的场面和声音。（平静生活）应激和恐惧的场面和声音。（平静生活）5.5.应提供给动物同类一起自由玩耍、表达天性的空应提供给动物同类一起自由玩耍、表达天性的空间和自由。（表达天性）间和自由。（表达天性）3严选文书 饲养繁殖实验动物的目的是用实验动物作饲养繁殖实验动物的目的是用实验动物作为人类的替难者进行各种

4、生物医学研究。为人类的替难者进行各种生物医学研究。一方面随着生物医学的发展，实验动物的一方面随着生物医学的发展，实验动物的使用量逐年增加，使用种类也逐年扩大；使用量逐年增加，使用种类也逐年扩大；另一方面从动物福利和动物实验伦理学考另一方面从动物福利和动物实验伦理学考虑，又需要尽量减少一些不必要的动物实虑，又需要尽量减少一些不必要的动物实验，特别是人类的宠物诸如验，特别是人类的宠物诸如猫、犬、猴猫、犬、猴等等，或者在不得不做的动物实验中尽可能将，或者在不得不做的动物实验中尽可能将动物的痛苦、压迫和不适降到最低。动物的痛苦、压迫和不适降到最低。4严选文书 动物实验的伦理判断标准：动物实验的伦理判断

5、标准：1.1.必须权衡实验的目和得出的结论与动物由必须权衡实验的目和得出的结论与动物由此而受到的伤害和死亡。此而受到的伤害和死亡。2.2.必須清楚而且明确沒有任何替代方法可必須清楚而且明确沒有任何替代方法可达到所做的动物实验的目的这个前提。达到所做的动物实验的目的这个前提。3.3.必须将动物的痛苦、压迫和不适减到最低必须将动物的痛苦、压迫和不适减到最低程度。程度。5严选文书二、二、动物实验是实践性非常强的技术动物实验是实践性非常强的技术和方法，不能仅靠书本理论知识，需和方法，不能仅靠书本理论知识，需要通过反复实践加以掌握。要通过反复实践加以掌握。目的：目的：保证实验的顺利进行。保证实验的顺利进

6、行。减少动物承受的痛苦。减少动物承受的痛苦。6严选文书 成为熟练掌握成为熟练掌握动物实验操作技动物实验操作技术的能手或专家术的能手或专家应该是大学应该是大学/研究所每一个动物饲养管理人研究所每一个动物饲养管理人员所追求的目标。员所追求的目标。7严选文书1.1.所用动物实验设施是否符合本实验要求所用动物实验设施是否符合本实验要求 普通设施，清洁级、普通设施，清洁级、SPFSPF设施，感染性设施，设施，感染性设施，有毒有害供试品设施，放射性设施有毒有害供试品设施，放射性设施 实验室、手术室实验室、手术室2.2.所用实验动物的品种、品系、性别、数量等能所用实验动物的品种、品系、性别、数量等能否得到否

7、得到3.3.所需要的动物实验技术是否熟练掌握所需要的动物实验技术是否熟练掌握4.4.所用动物实验器具、试剂是否准备好所用动物实验器具、试剂是否准备好5.5.所用的仪器设备是否处于可运行状态所用的仪器设备是否处于可运行状态8严选文书6.6.预实验预实验 正式实验前的演习正式实验前的演习 预实验可用少量动物进行预实验可用少量动物进行 预实验结果不能并入正式实验结果一预实验结果不能并入正式实验结果一起分析。起分析。9严选文书动物的抓取是顺利进行各项动物实验操作最动物的抓取是顺利进行各项动物实验操作最基本的一个环节。基本的一个环节。应熟练掌握各种实验动物的抓取方法，用轻应熟练掌握各种实验动物的抓取方法

8、，用轻柔的手法把对动物施加的恐惧和痛苦降到最柔的手法把对动物施加的恐惧和痛苦降到最低。低。一般说来动物是不会主动攻击人的。一般说来动物是不会主动攻击人的。1.1.小鼠抓取的注意点小鼠抓取的注意点2.2.大鼠抓取的注意点大鼠抓取的注意点3.3.豚鼠抓取的注意点豚鼠抓取的注意点10严选文书4.4.兔抓取的注意点兔抓取的注意点最好戴人造革围裙和袖套，以免爪子抓伤。最好戴人造革围裙和袖套，以免爪子抓伤。采用正确地抓取方法。采用正确地抓取方法。可采用兔固定器固定进行实验操作，或一人可采用兔固定器固定进行实验操作，或一人抓取固定，一人实验操作。抓取固定，一人实验操作。11严选文书豚鼠和兔的抓取豚鼠和兔的抓

9、取12严选文书5.5.犬抓取注意点犬抓取注意点 实验用犬有专用的实验用犬有专用的比格犬比格犬和农村收购来的和农村收购来的草犬草犬。犬是通人性的，草犬购入后，饲养人员和实验犬是通人性的，草犬购入后，饲养人员和实验人员要经常亲近它们，使它放松对你的警惕，人员要经常亲近它们，使它放松对你的警惕，容易直接抓取它们。容易直接抓取它们。不要轻易使用长柄铁钳不要轻易使用长柄铁钳，钳伤造成的伤害会使，钳伤造成的伤害会使它对你更加恐惧，影响以后实验的进行。它对你更加恐惧，影响以后实验的进行。抓取后用绳子将嘴绑住。抓取后用绳子将嘴绑住。13严选文书（一）一般动物试验分组设计的基本原则：（一）一般动物试验分组设计的

10、基本原则：随机、对照和重复。随机、对照和重复。随机：随机：就是按照机遇均等的原则来进行分就是按照机遇均等的原则来进行分组。其目的是尽量减少各种干扰因素造成组。其目的是尽量减少各种干扰因素造成的实验误差，不受实验者主观因素或其他的实验误差，不受实验者主观因素或其他偏性误差的影响。偏性误差的影响。随机化的手段可采用编号卡片抽签法，随随机化的手段可采用编号卡片抽签法，随机数字表或采用计算器的随机数字键。机数字表或采用计算器的随机数字键。14严选文书 对照：对照：是要求在实验中设立可与实验组比较，用以消是要求在实验中设立可与实验组比较，用以消除各种无关因素影响的对照组。除各种无关因素影响的对照组。对照

11、应有可比性：同时同地同条件对照应有可比性：同时同地同条件 对照设立有两种方式：对照设立有两种方式：自体对照自体对照1.1.实验前后对照实验前后对照2.2.身体左右对照身体左右对照 组间对照组间对照（以手术造成兔腹主动脉损伤动脉粥样硬化模型为例）（以手术造成兔腹主动脉损伤动脉粥样硬化模型为例）1.1.正常（空白）对照组：正常饮食，不做手术正常（空白）对照组：正常饮食，不做手术2.2.假手术组：正常饮食，做手术假手术组：正常饮食，做手术3.3.模型组：手术模型组：手术+高脂饲料高脂饲料4.4.已知疗效药物组：手术已知疗效药物组：手术+高脂饲料高脂饲料+已知疗效药物已知疗效药物5.5.未知疗效药物组

12、：手术未知疗效药物组：手术+高脂饲料高脂饲料+未知疗效药物未知疗效药物6.6.赋型剂对照：手术赋型剂对照：手术+高脂饲料高脂饲料+赋型剂赋型剂15严选文书 重复：重复：是指同一处理要设置多个样本数。是指同一处理要设置多个样本数。重复的主要作用是估计试验误差、降低试重复的主要作用是估计试验误差、降低试验误差和增强代表性，提高实验结果的精验误差和增强代表性，提高实验结果的精确度，保证实验结果能在不同个体中稳定确度，保证实验结果能在不同个体中稳定地重复出来。地重复出来。样本数过少，实验处理效应不能充分显样本数过少，实验处理效应不能充分显示；样本数过多，又会增加实际工作中的示；样本数过多，又会增加实际

13、工作中的困难。因此在进行实验前必须确定最少的困难。因此在进行实验前必须确定最少的样本例数。最少的样本例数可按一般估测样本例数。最少的样本例数可按一般估测方法确定，也可通过统计学方法进行测算方法确定，也可通过统计学方法进行测算确定。确定。16严选文书（二）动物实验分组设计的基本类型（二）动物实验分组设计的基本类型1.1.完全随机化设计完全随机化设计2.2.按体重分层随机区组设计按体重分层随机区组设计3.3.配对设计配对设计17严选文书（二）按体重分层随机区组设计（二）按体重分层随机区组设计 先确定实验的组数，将动物称重，按体重的轻重顺序编号，再用随机化先确定实验的组数，将动物称重，按体重的轻重顺

14、序编号，再用随机化工具，如随机数字表等，将动物随机分配至处理组及对照组。工具，如随机数字表等，将动物随机分配至处理组及对照组。随机区组法举例随机区组法举例以用四氧嘧啶诱发小鼠糖尿病模型，用药物进行治疗观察疗效为例，以用四氧嘧啶诱发小鼠糖尿病模型，用药物进行治疗观察疗效为例，实验中可分为实验中可分为5 5组：正常对照组、模型组、药物治疗低剂量组、高剂量组：正常对照组、模型组、药物治疗低剂量组、高剂量组和已知可治疗糖尿病药物组，每组组和已知可治疗糖尿病药物组，每组1010只，只，5 5雌雌5 5雄。按下列步骤进行雄。按下列步骤进行分组：分组：1 1）雌雄分开：分组时雌、雄动物分开分别进行。）雌雄分

15、开：分组时雌、雄动物分开分别进行。2 2）用记号笔在小鼠尾巴上随机编）用记号笔在小鼠尾巴上随机编1-251-25号。号。3 3）按编号称重，记录每只小鼠的体重。）按编号称重，记录每只小鼠的体重。4 4）按动物体重顺序依次重新编号。）按动物体重顺序依次重新编号。5 5）共）共5 5个实验组分成个实验组分成5 5个区组，每个区组都有个区组，每个区组都有5 5只体重相近的动物。第一区只体重相近的动物。第一区组组5 5只动物为只动物为1 1、2 2、3 3、4 4、5 5号，第二区组为号，第二区组为6 6、7 7、8 8、9 9、1010号，余类号，余类推。推。6 6）抄录随机数表。抄录数字的个数等于

16、区组数减）抄录随机数表。抄录数字的个数等于区组数减1 1，如，如5 5个区组就抄录个区组就抄录4 4个个数字。第数字。第5 5个动物无随机数字，其分组为调剂。以后的区组按顺序依次个动物无随机数字，其分组为调剂。以后的区组按顺序依次抄录数字。抄录数字。7 7）将小鼠分到各组中。）将小鼠分到各组中。18严选文书动物编号动物编号1 12 23 34 45 56 67 78 89 9101011111212131314141515随机数字随机数字0 50 52 72 78 48 43 73 74 14 16 86 83 83 85 15 15 65 69 69 68 18 18 08 0除数除数5 5

17、5 55 55 55 55 55 55 55 55 55 55 5余数余数0 02 24 42 21 13 33 31 11 11 11 10 0组别组别5 52 24 43 31 11 13 34 42 25 51 12 23 35 54 4动物编号动物编号1616171718181919202021212222232324242525随机数字随机数字4 74 78 88 87 47 45 95 97 27 24 04 02 32 36 36 3除数除数5 55 55 55 55 55 55 55 5余数余数2 23 34 44 42 20 03 33 3组别组别2 23 34 45 51

18、12 25 53 34 41 1按体重分层随机区组分组按体重分层随机区组分组19严选文书 适用需要个体识别的实验适用需要个体识别的实验1.1.染料标记法：适合白色被毛的动物，如小鼠、染料标记法：适合白色被毛的动物，如小鼠、大鼠、豚鼠、兔等。大鼠、豚鼠、兔等。黄色：常用黄色：常用35%35%苦味酸溶液苦味酸溶液 红色：常用红色：常用0.5%0.5%中性红溶液中性红溶液 咖啡色咖啡色:2%:2%硝酸银溶液硝酸银溶液 黑色：煤焦油酒精溶液黑色：煤焦油酒精溶液 优点：简单、易识别优点：简单、易识别 缺点：长期易退色；不能编大号码。缺点：长期易退色；不能编大号码。20严选文书21严选文书2.2.剪耳（打

19、孔）法：啮齿类小动物剪耳（打孔）法：啮齿类小动物3.3.号码钳法：适用于兔、犬等大动物号码钳法：适用于兔、犬等大动物4.4.耳牌法：适用于羊、牛等大家畜耳牌法：适用于羊、牛等大家畜5.5.电子芯片植入法：电子芯片植入法：22严选文书1.1.剪毛法：用剪毛法：用弯头剪弯头剪逆毛方向剪逆毛方向剪 适用于各种实验动物适用于各种实验动物2.2.拔毛法：常用于兔的耳缘静脉注射拔毛法：常用于兔的耳缘静脉注射3.3.剃毛法：剃须刀、手术刀剃毛法：剃须刀、手术刀 适用于大动物适用于大动物4.4.脱毛法：脱毛剂脱毛法：脱毛剂23严选文书 常用脱毛剂配方常用脱毛剂配方 配方配方1 1：硫化钠：硫化钠8g8g溶于溶

20、于100mL100mL水中。水中。配方配方2 2：硫化钠：肥皂粉：淀粉的比例为：硫化钠：肥皂粉：淀粉的比例为3 3：1 1：7 7，再加水调成糊状。，再加水调成糊状。配方配方3 3：硫化钠：硫化钠10g10g和生石灰和生石灰15g15g溶于溶于100mL100mL水中。水中。配方配方1 1和和2 2适用于家兔和啮齿类动物的脱适用于家兔和啮齿类动物的脱毛，配方毛，配方3 3适合给犬脱毛。适合给犬脱毛。脱毛后用清水将脱毛区清洗干净。脱毛后用清水将脱毛区清洗干净。24严选文书 对实验动物进行麻醉的目的是，消除实验过程对实验动物进行麻醉的目的是，消除实验过程中引起的痛苦和不适，确保实验动物的安全和中引

21、起的痛苦和不适，确保实验动物的安全和动物实验的顺利进行，是动物实验伦理的一个动物实验的顺利进行，是动物实验伦理的一个重要方面。重要方面。麻醉方法有全身麻醉和局部麻醉两种。在实验麻醉方法有全身麻醉和局部麻醉两种。在实验动物的麻醉中绝大多数采用全身麻醉。动物的麻醉中绝大多数采用全身麻醉。应结合实验目的、实验动物种类、日龄及健康应结合实验目的、实验动物种类、日龄及健康状况等因素进行综合考虑，决定选用的麻醉剂状况等因素进行综合考虑，决定选用的麻醉剂和麻醉方法。和麻醉方法。25严选文书 全身麻醉简称全麻。全麻是指麻醉药通全身麻醉简称全麻。全麻是指麻醉药通过过呼吸道吸入、静脉和肌肉注射呼吸道吸入、静脉和肌

22、肉注射等途径，等途径，进入实验动物体内，使其产生短时间意进入实验动物体内，使其产生短时间意识丧失、痛觉消失、肌肉松弛和反射抑识丧失、痛觉消失、肌肉松弛和反射抑制等中枢神经系统抑制现象。当麻醉药制等中枢神经系统抑制现象。当麻醉药从体内排出或在体内代谢破坏后，实验从体内排出或在体内代谢破坏后，实验动物逐渐清醒，不留后遗症。动物逐渐清醒，不留后遗症。全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法两种途全麻有吸入麻醉法和注射麻醉法两种途径，吸入麻醉法用挥发性麻醉药，注射径，吸入麻醉法用挥发性麻醉药，注射麻醉法用非挥发性麻醉药。麻醉法用非挥发性麻醉药。26严选文书（1 1）吸入麻醉法）吸入麻醉法 常用药物为乙醚、氟烷和异

23、氟烷等。吸入麻醉法有开放常用药物为乙醚、氟烷和异氟烷等。吸入麻醉法有开放吸入和气管内插管吸入两种方法。吸入和气管内插管吸入两种方法。开放吸入：适用于啮齿类小动物，可用乙醚、氯仿开放吸入：适用于啮齿类小动物，可用乙醚、氯仿 小动物吸入麻醉机国外已有售。小动物吸入麻醉机国外已有售。气管内插管：适用于犬、猴、羊等大动物，氟烷和异氟气管内插管：适用于犬、猴、羊等大动物，氟烷和异氟烷是最常用的麻醉药。烷是最常用的麻醉药。吸入麻醉的优点：吸入麻醉的优点：麻醉平稳、安全可靠、麻醉平稳、安全可靠、停止吸入后很快苏醒停止吸入后很快苏醒 缺点：缺点：需要一定的仪器设备，需要一定的仪器设备，注意自身防护。注意自身防

24、护。27严选文书大小鼠麻醉法28严选文书（2 2）注射麻醉法）注射麻醉法 注射麻醉法是使用非挥发性麻醉药进行全麻注射麻醉法是使用非挥发性麻醉药进行全麻的方法。在动物实验中比较常用。的方法。在动物实验中比较常用。常用麻醉药：常用麻醉药：戊巴比妥钠戊巴比妥钠 硫喷妥钠硫喷妥钠 氯氨酮氯氨酮 乌拉坦乌拉坦 大动物：静脉注射或肌肉注射大动物：静脉注射或肌肉注射 啮齿类动物：腹腔注射啮齿类动物：腹腔注射29严选文书实验动物麻醉应注意的事项实验动物麻醉应注意的事项1.1.大动物麻醉之前应禁食。大动物麻醉之前应禁食。2.2.麻醉之前应准确称量动物体重，作为计算麻麻醉之前应准确称量动物体重，作为计算麻醉剂用量

25、的依据。醉剂用量的依据。3.3.应注意不同麻醉药对动物的作用是不同的，应注意不同麻醉药对动物的作用是不同的，如戊巴比妥钠、硫贲妥钠等能抑制心肌收缩如戊巴比妥钠、硫贲妥钠等能抑制心肌收缩力，使肌肉松弛，而氯胺酮则相反。力，使肌肉松弛，而氯胺酮则相反。4.4.大动物犬、猴、羊等麻醉前半小时应注射麻大动物犬、猴、羊等麻醉前半小时应注射麻醉前给药如阿托品和苯巴比妥钠。醉前给药如阿托品和苯巴比妥钠。5.5.静脉注射麻醉药是必须缓慢，边注射边观察静脉注射麻醉药是必须缓慢，边注射边观察动物的意识、角膜反射、肌肉紧张性和对疼动物的意识、角膜反射、肌肉紧张性和对疼痛的反应，达到麻醉要求时应停止注射。痛的反应，达

26、到麻醉要求时应停止注射。30严选文书6.6.大动物手术时应配备麻醉师，在麻醉过大动物手术时应配备麻醉师，在麻醉过程中密切观察动物的反应，如血压、脉程中密切观察动物的反应，如血压、脉搏、呼吸和体温，及时调节麻醉药剂量，搏、呼吸和体温，及时调节麻醉药剂量，保证手术顺利进行。保证手术顺利进行。7.7.动物在麻醉期间、手术后至苏醒期体温动物在麻醉期间、手术后至苏醒期体温会下降，应注意手术室的室温。会下降，应注意手术室的室温。8.8.注意术后护理。注意术后护理。31严选文书 麻醉意外的抢救麻醉意外的抢救 原因：原因：麻醉药速度过快、剂量过大、麻醉过深麻醉药速度过快、剂量过大、麻醉过深 后果：后果：中枢神

27、经系统抑制导致呼吸系统、循环系统功能障中枢神经系统抑制导致呼吸系统、循环系统功能障碍，引起呼吸、心跳停止。碍，引起呼吸、心跳停止。抢救方法：抢救方法：要针对具体情况，采取对症治疗的措施。要针对具体情况，采取对症治疗的措施。1.1.立即停止供给麻醉剂立即停止供给麻醉剂 2.2.人工呼吸，吸氧人工呼吸，吸氧 3.3.苏醒剂苏醒剂 4.4.呼吸中枢兴奋剂如可拉明等和心脏和呼吸兴奋剂，呼吸中枢兴奋剂如可拉明等和心脏和呼吸兴奋剂，如如0.1%0.1%肾上腺素适量作心内或静脉注射，静脉滴注肾上腺素适量作心内或静脉注射，静脉滴注50%50%葡萄糖溶液等。葡萄糖溶液等。32严选文书经口给药法经口给药法注射法注

28、射法其它途径给药方法其它途径给药方法1.1.呼吸道给药呼吸道给药2.2.皮肤给药皮肤给药3.3.脊髓腔内给药脊髓腔内给药4.4.脑内给药脑内给药5.5.直肠内给药直肠内给药6.6.关节腔内给药关节腔内给药33严选文书经口给药经口给药1.1.拌入饲料、饮水中自由摄取拌入饲料、饮水中自由摄取 优点：省人力优点：省人力 缺点：因个体差异，摄入量不等缺点：因个体差异，摄入量不等2.2.灌胃灌胃 优点：能准确定量优点：能准确定量 缺点：给动物造成一定的痛苦，需缺点：给动物造成一定的痛苦，需熟练掌握技术熟练掌握技术34严选文书大小鼠灌胃注意点大小鼠灌胃注意点1.1.用灌胃针。用灌胃针。2.2.从嘴角处插入

29、，到达咽部后从嘴角处插入，到达咽部后改变灌胃针的方向，使其与改变灌胃针的方向，使其与食管的走向一致，然后顺利食管的走向一致，然后顺利插入。插入。3.3.成年大鼠由于体型较大，不成年大鼠由于体型较大，不易保定。办法：易保定。办法：1 1）一人保定，一人灌胃）一人保定，一人灌胃2 2）操作者抓取后，将大鼠尾部按）操作者抓取后，将大鼠尾部按在自己的胸部，达到固定尾在自己的胸部，达到固定尾部的目的，然后灌胃。部的目的，然后灌胃。灌胃量：小鼠灌胃量：小鼠0.2-0.4ml/100.2-0.4ml/10克，克，大鼠大鼠1.0ml/1001.0ml/100克克大小鼠灌胃大小鼠灌胃35严选文书 兔灌胃法兔灌胃

30、法 采用用固定器一人操作，或采用用固定器一人操作，或一人保定一人操作法。一人保定一人操作法。操作者用左手拇指和中指挤操作者用左手拇指和中指挤压家兔两颊，将下颌挤开使兔压家兔两颊，将下颌挤开使兔被动张口，右手将开口器从一被动张口，右手将开口器从一侧口角插入口腔并固定，用泡侧口角插入口腔并固定，用泡在水中的在水中的1414号细导尿管，经开号细导尿管，经开口器的孔插入，向前推进约口器的孔插入，向前推进约15cm15cm，可达胃内，确认泡在水，可达胃内，确认泡在水中的导管另一端没有冒气泡，中的导管另一端没有冒气泡，说明没有误入气管，即可注入说明没有误入气管，即可注入药液。灌胃量为每只每次药液。灌胃量为

31、每只每次80-80-150mL150mL。兔灌胃法兔灌胃法36严选文书 1.1.口服给药口服给药 用右手将口服药片用右手将口服药片夹在拇指和食指之间，夹在拇指和食指之间，把左手放在犬的圈套上，把左手放在犬的圈套上，用拇指和食指压着犬的用拇指和食指压着犬的上唇，用力使犬的头向上唇，用力使犬的头向后仰，继而把右手中指后仰，继而把右手中指放在犬的下颌向下压。放在犬的下颌向下压。当犬的嘴张大时，快速当犬的嘴张大时，快速把药片放在舌根隆起的把药片放在舌根隆起的部位，合上犬的嘴，维部位，合上犬的嘴，维持头后仰姿势，右手在持头后仰姿势，右手在咽喉部轻轻按摩。借助咽喉部轻轻按摩。借助犬本能的吞咽动作服下犬本能

32、的吞咽动作服下药片。药片。犬的胶囊给药法犬的胶囊给药法37严选文书 2.2.灌胃给药灌胃给药 在给犬灌胃时，将犬在给犬灌胃时，将犬固定于特制的固定架上，固定于特制的固定架上，实验时将木制开口器从一实验时将木制开口器从一侧口角放入犬的口腔，用侧口角放入犬的口腔，用左手或绳子固定，右手持左手或绳子固定，右手持1212号胃管由开口器的小圆号胃管由开口器的小圆孔向咽后壁方向不断插入，孔向咽后壁方向不断插入，导管另一端置于一杯清水导管另一端置于一杯清水中，若连续出现气泡，说中，若连续出现气泡，说明插入呼吸道，应立即拔明插入呼吸道，应立即拔出胃管，重新操作。如无出胃管，重新操作。如无气泡，说明没有插入气管

33、，气泡，说明没有插入气管，插至约插至约20cm20cm，即可到达胃，即可到达胃内。犬的灌药量为每只每内。犬的灌药量为每只每次次200-500mL200-500mL。犬的灌胃给药法犬的灌胃给药法38严选文书动物种类动物种类 体重（体重（g g）最大容积（最大容积（mlml）动物种类动物种类体重（体重（g g）最大容积（最大容积（mlml）小鼠小鼠20-2420-241.01.0豚鼠豚鼠250-300250-3004-54-525-3025-301.51.53003006.06.030302.02.0兔兔2kg-2.4kg2kg-2.4kg100100大鼠大鼠100-199100-1993.03.

34、02.5kg-2.5kg-3.5kg3.5kg150150200-249200-2494-54-53.5kg3.5kg200200250-300250-3006.06.0猫猫2.5kg-2.5kg-3.0kg3.0kg50-8050-803003008.08.03.0kg3.0kg100-050100-050犬犬10kg-15kg10kg-15kg200-500200-50039严选文书 注射法注射法 注射法有皮下注射、腹腔注射、静脉注射、注射法有皮下注射、腹腔注射、静脉注射、肌肉注射以及皮内注射、脑内注射等。肌肉注射以及皮内注射、脑内注射等。药物吸收速度：药物吸收速度：静脉注射腹腔注射肌肉注

35、射静脉注射腹腔注射肌肉注射 皮下注射。皮下注射。皮内注射常用于观察皮肤血管通透性变化或皮内注射常用于观察皮肤血管通透性变化或反应，如过敏试验反应，如过敏试验 脑内注射常用于病毒学接种脑内注射常用于病毒学接种40严选文书静脉注射静脉注射1.1.大小鼠尾静脉和足背正中静脉注射大小鼠尾静脉和足背正中静脉注射尾静脉尾静脉大小鼠尾静脉注射大小鼠尾静脉注射41严选文书豚鼠阴茎静脉注射豚鼠阴茎静脉注射豚鼠足背正中静脉注射豚鼠足背正中静脉注射42严选文书兔耳缘静脉注射兔耳缘静脉注射犬前肢头静脉和后犬前肢头静脉和后肢小隐静脉注射肢小隐静脉注射43严选文书其它途径给药方法其它途径给药方法1.1.呼吸道给药：呼吸道

36、给药：2.2.皮肤给药：皮肤给药：3.3.脊髓腔内给药：脊髓腔内给药：4.4.脑内给药：脑内给药：5.5.直肠内给药：直肠内给药：6.6.关节腔内给药：关节腔内给药：44严选文书 在药理学毒理学上常涉及到给动物多少剂在药理学毒理学上常涉及到给动物多少剂量的问题：量的问题：不同种属动物间的剂量换算不同种属动物间的剂量换算 动物与人之间的剂量换算动物与人之间的剂量换算 人与动物间的计量换算人与动物间的计量换算 等效剂量：不同动物间或动物与人之间可能等效剂量：不同动物间或动物与人之间可能产生相同药效的剂量。产生相同药效的剂量。等效剂量与单位体重的动物体表面积成正比等效剂量与单位体重的动物体表面积成正

37、比45严选文书小鼠小鼠b b大鼠大鼠b b地鼠地鼠b b豚鼠豚鼠b b兔兔b b比格犬比格犬b b猕猴猕猴b b成人成人b b标准体重标准体重0.0200.0200.1500.1500.0800.0800.40.41.81.810.010.03.03.060.060.0小鼠小鼠a a1.001.000.500.500.600.600.3750.3750.250.250.1500.1500.250.250.0810.081大鼠大鼠a a2.002.001.001.001.201.200.750.750.500.500.300.300.500.500.1620.162地鼠地鼠a a1.671.67

38、1.201.201.001.000.6250.6250.4170.4170.250.250.4170.4170.1350.135豚鼠豚鼠a a2.672.671.331.331.601.601.001.000.6670.6670.400.400.6670.6670.2160.216兔兔a a4.004.002.002.002.402.401.501.501.001.000.600.601.001.000.3240.324比格犬比格犬a a6.676.673.333.334.004.002.502.501.671.671.001.001.671.670.5410.541猕猴猕猴a a4.004.

39、002.002.002.402.401.501.501.001.000.600.601.001.000.3240.324人人a a12.3312.336.176.177.407.404.634.633.083.081.851.853.083.081.001.00表表1.1.标准体重动物由动物标准体重动物由动物a a到动物到动物b b的的mg/kgmg/kg换算系数换算系数:剂量剂量换算系数换算系数动物剂量换算成人剂量：动物剂量换算成人剂量：例例1 1：已知：已知150g150g大鼠用大鼠用5mg/kg5mg/kg，换算成成，换算成成人的用药剂量：查表大鼠人的用药剂量：查表大鼠a a行，成人行，

40、成人b b列的列的换算系数为换算系数为0.1620.162，故成人的剂量，故成人的剂量=5=50.162=0.81mg/kg0.162=0.81mg/kg。一种动物剂量换算成另一种动物剂量：一种动物剂量换算成另一种动物剂量：例例2 2：已知：已知20g20g小鼠用小鼠用4mg/kg4mg/kg，换算成，换算成8kg8kg比格犬的用药剂量：查表小鼠比格犬的用药剂量：查表小鼠a a行，比格行，比格犬犬b b列的换算系数为列的换算系数为0.150.15，故比格犬的剂，故比格犬的剂量量=4=40.15=0.60mg/kg0.15=0.60mg/kg46严选文书非标准动物的换算非标准动物的换算1.1.非

41、标准动物换算成标准动物：非标准动物换算成标准动物：给药剂量给药剂量校正系数校正系数Sa Sa 换换算系数算系数标准动物换算成非标准动物：标准动物换算成非标准动物：给药剂量给药剂量换算系数换算系数校正系校正系数数SbSb非标准动物换算成非标准动物非标准动物换算成非标准动物:给药剂量给药剂量校正系数校正系数Sa Sa 换换算系数算系数校正系数校正系数SbSb例例3 3：长期毒性试验：长期毒性试验350g350g大鼠用大鼠用10mg/kg10mg/kg，换算成，换算成8kg8kg比格犬的比格犬的用药剂量：查表用药剂量：查表2 2，350/150=2.3350/150=2.3，校正系数，校正系数Sa=

42、1.301Sa=1.301。再查表。再查表1 1大鼠大鼠a a行，行，比格犬比格犬b b列的换算系数为列的换算系数为0.300.30，故，故8kg8kg比格犬的剂量比格犬的剂量=10=101.3011.3010.30=3.90mg/kg0.30=3.90mg/kgB=W/WB=W/W标标校正系数校正系数SaSa校正系数校正系数SbSb0.30.30.6690.6691.4941.4940.40.40.7370.7371.3571.3570.50.50.7940.7941.2601.2600.60.60.8430.8431.1861.1860.70.70.8880.8881.1261.1260.

43、80.80.9280.9281.0771.0770.90.90.9650.9651.0361.0361.01.01.0001.0001.0001.0001.11.11.0321.0320.9690.9691.21.21.0631.0630.9410.9411.31.31.0911.0910.9160.9161.41.41.1191.1190.8940.8941.51.51.1451.1450.8740.8741.61.61.1701.1700.8550.8551.71.71.1931.1930.8380.8381.81.81.2161.2160.8220.8221.91.91.2391.239

44、0.8070.8072.02.01.2601.2600.7940.7942.22.21.3011.3010.7690.7692.42.41.3391.3390.7470.7472.62.61.3751.3750.7270.7272.82.81.4091.4090.7090.7093.03.01.4421.4420.6930.6933.23.21.4741.4740.6790.679表表2.非标准体重动物的校正系数非标准体重动物的校正系数47严选文书（一）采血法（一）采血法大小鼠大小鼠1.1.剪尾剪尾2.2.尾静脉切割尾静脉切割3.3.大鼠后肢足中静脉采血大鼠后肢足中静脉采血4.4.眼眶后静脉丛

45、采血眼眶后静脉丛采血5.5.摘眼球采血摘眼球采血6.6.腋窝动静脉采血腋窝动静脉采血7.7.心脏采血心脏采血8.8.腹主动脉采血腹主动脉采血48严选文书心心 脏脏 采采 血血眼眶后静脉丛采血眼眶后静脉丛采血足背正中静脉采血足背正中静脉采血腹主动脉采血腹主动脉采血49严选文书小鼠颌下静脉采血法50严选文书采血方法采血方法采血量（采血量（mlml）应应 用用小鼠小鼠大鼠大鼠断头采血法断头采血法0.2-1.00.2-1.01.5-5.01.5-5.0大批动物集中处死采血，速度快大批动物集中处死采血，速度快摘眼球采血法摘眼球采血法0.2-1.50.2-1.51.0-8.01.0-8.0大批动物集中采血

46、，若一次少量采，可大批动物集中采血，若一次少量采，可反复几次反复几次尾静脉切割采血法尾静脉切割采血法0.01-0.01-0.050.050.1-0.50.1-0.5用于用血量少的检验，如血常规，能长用于用血量少的检验，如血常规，能长时期反复多次采血时期反复多次采血眼眶后静脉采血法眼眶后静脉采血法0.02-0.10.02-0.10.2-1.00.2-1.0能反复多次采血能反复多次采血腋窝动静脉采血法腋窝动静脉采血法0.5-1.50.5-1.51.0-5.01.0-5.0需处死动物，麻醉后采血需处死动物，麻醉后采血心脏采血法心脏采血法-0.2-1.00.2-1.0腹主动脉采血法腹主动脉采血法-5.

47、0-10.05.0-10.0需处死动物，麻醉后采血需处死动物，麻醉后采血51严选文书豚鼠心脏采血豚鼠心脏采血兔耳缘静脉采血兔耳缘静脉采血兔心脏采血兔心脏采血兔颈总动脉采血兔颈总动脉采血52严选文书 一个动物到底能采多少血，取决于动物一个动物到底能采多少血，取决于动物的体重、定期活体采血还是处死采血。的体重、定期活体采血还是处死采血。动物的全血量为动物体重的动物的全血量为动物体重的8%8%左右，其左右，其中约中约30%30%储藏在全身毛细血管内。全血中储藏在全身毛细血管内。全血中约约50%50%是有形成分。据此可测算处死后的是有形成分。据此可测算处死后的采血量和血清量。采血量和血清量。采血为全血

48、量的采血为全血量的10%10%时，两个星期恢复；时，两个星期恢复；采血为全血量的采血为全血量的30%30%时，将危及生命。时，将危及生命。53严选文书血清和血浆的区别血清和血浆的区别 不同的实验对血液样品的要求不同，有的要求不同的实验对血液样品的要求不同，有的要求全血，有的要求血清或血浆。全血，有的要求血清或血浆。血清血清是指血液凝是指血液凝固后析出的淡黄色的液体，固后析出的淡黄色的液体，血浆血浆是指血液经过是指血液经过抗凝后去除有形成份后的淡黄色液体。血清和抗凝后去除有形成份后的淡黄色液体。血清和血浆的区别在于血清中不含纤维蛋白，而血浆血浆的区别在于血清中不含纤维蛋白，而血浆中含有与凝血有关

49、的许多酶原和纤维蛋白原。中含有与凝血有关的许多酶原和纤维蛋白原。常用的抗凝剂有肝素、枸橼酸钠、乙二胺四乙常用的抗凝剂有肝素、枸橼酸钠、乙二胺四乙酸（酸（EDTAEDTA）钠盐或钾盐。）钠盐或钾盐。54严选文书动物种类动物种类最大安全采血量（最大安全采血量（mlml）最小致死采血量（最小致死采血量（mlml）小鼠小鼠0.30.30.50.5大鼠大鼠2 25 5豚鼠豚鼠5 51010兔兔10104040犬犬5050300300猴猴1515606055严选文书（二）采尿法（二）采尿法 反射排尿法反射排尿法 代谢笼法代谢笼法 导尿法导尿法 膀胱穿刺法膀胱穿刺法兔采粪尿兔采粪尿比格犬采粪尿比格犬采粪尿大

50、鼠采粪尿大鼠采粪尿56严选文书 安死术的概念安死术的概念 “安死术安死术”是指以人道的方法处死动物是指以人道的方法处死动物的过程。在处死动物过程中减少动物的惊的过程。在处死动物过程中减少动物的惊恐或焦虑，安静地、无痛苦地死亡。恐或焦虑，安静地、无痛苦地死亡。57严选文书采用安死术必须符合的标准采用安死术必须符合的标准1.1.死亡时没有惊恐、疼痛的表现死亡时没有惊恐、疼痛的表现2.2.使其在最短时间内失去意识，迅速死亡使其在最短时间内失去意识，迅速死亡3.3.方法可靠且可重复方法可靠且可重复4.4.对操作人员安全对操作人员安全5.5.采用的方法要与研究要求和目的一致采用的方法要与研究要求和目的一

51、致6.6.对观察者和操作者的情绪影响最小对观察者和操作者的情绪影响最小7.7.对环境污染的影响最小对环境污染的影响最小8.8.设备简单、价廉、易操作设备简单、价廉、易操作9.9.处死动物地点应远离，并与动物室隔开处死动物地点应远离，并与动物室隔开58严选文书大鼠小鼠大鼠小鼠1.1.颈椎脱臼法颈椎脱臼法2.2.急性失血法急性失血法3.3.麻醉致死法麻醉致死法4.4.气体窒息致死法气体窒息致死法59严选文书猫、犬、兔猫、犬、兔1.1.空气栓塞法空气栓塞法优点：优点：方法简单、迅速，方法简单、迅速，缺点：由于动物死于急性循环衰竭，各脏器凝血十分明显。缺点：由于动物死于急性循环衰竭，各脏器凝血十分明显

52、。2.2.急性失血法急性失血法 先行麻醉，再分离颈动脉或股动脉，将一根较粗的塑料管插入动脉内先行麻醉，再分离颈动脉或股动脉，将一根较粗的塑料管插入动脉内放血。动物在放血。动物在3 35min5min内即可死亡。内即可死亡。优点：优点：动物十分安静，对脏器无损伤，对活杀采集病理切片标本是一种比较动物十分安静，对脏器无损伤，对活杀采集病理切片标本是一种比较好的方法。好的方法。3.3.化学药物致死法化学药物致死法 通过注射一定量的化学药物而使动物迅速致死。常用的化学药物有：通过注射一定量的化学药物而使动物迅速致死。常用的化学药物有：1010氯化钾溶液：静脉注射，用量为犬氯化钾溶液：静脉注射，用量为犬

53、202030ml/30ml/只，兔只，兔5 510ml10ml只。只。1010福尔马林：静脉注射，用量为犬福尔马林：静脉注射，用量为犬20ml20ml只。只。60严选文书大小鼠安乐死法大小鼠安乐死法豚鼠二氧化碳窒息法豚鼠二氧化碳窒息法61严选文书1.1.麻醉苏醒前麻醉苏醒前 注意保温注意保温 保持呼吸道通畅保持呼吸道通畅 定时观察记录动物的生命体征定时观察记录动物的生命体征2.2.创口处理创口处理 彻底清创处理，必要时放置引流条彻底清创处理，必要时放置引流条 可以不用敷料覆盖创口可以不用敷料覆盖创口3.3.抗菌素治疗抗菌素治疗4.4.饮食和输液饮食和输液 大手术后适当输液能加快恢复大手术后适当

54、输液能加快恢复 犬、猴手术后给与高蛋白、高能量饮食犬、猴手术后给与高蛋白、高能量饮食62严选文书十、动物活体解剖、脏器称重十、动物活体解剖、脏器称重及病理取材方法及病理取材方法 动物实验后进行活体解剖是动物实验最动物实验后进行活体解剖是动物实验最后一个重要步骤，通过活体解剖和病理后一个重要步骤，通过活体解剖和病理学观察，可以分析药物的作用、各器官学观察，可以分析药物的作用、各器官病变特点，观察实验效果，为分析实验病变特点，观察实验效果，为分析实验结果提供大体病理和组织病理学依据。结果提供大体病理和组织病理学依据。63严选文书活体解剖程序活体解剖程序体表检查体表检查胸腹部皮下检查胸腹部皮下检查腹

55、腔检查腹腔检查胸腔检查胸腔检查颅脑检查颅脑检查麻麻 醉醉放放 血血64严选文书 腹腔检查腹腔检查 胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、胃、十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠、直肠结肠、直肠 肝、脾、胰腺、肾、肾上腺、肠系膜肝、脾、胰腺、肾、肾上腺、肠系膜淋巴结淋巴结 睾丸、副睾、输精管、前列腺、精囊睾丸、副睾、输精管、前列腺、精囊腺腺 卵巢、输卵管、子宫、卵巢、输卵管、子宫、65严选文书 胸腔检查胸腔检查 心脏、肺、气管、支气管、胸腺心脏、肺、气管、支气管、胸腺 颅脑检查颅脑检查 大脑、小脑、脑干、脊髓大脑、小脑、脑干、脊髓66严选文书脏器秤重脏器秤重 由于动物的各组织器官在肿瘤、增生、炎症、由于动

56、物的各组织器官在肿瘤、增生、炎症、萎缩等病变时会产生重量上的改变，这种改变萎缩等病变时会产生重量上的改变，这种改变对病理形态学诊断、分析实验结果有着重要的对病理形态学诊断、分析实验结果有着重要的参考价值及意义，因此脏器称重是病理解剖学参考价值及意义，因此脏器称重是病理解剖学常用的手段，尤以药理学、毒理学实验常用。常用的手段，尤以药理学、毒理学实验常用。用器械仔细剥离脂肪及其他附着物后，置于秤用器械仔细剥离脂肪及其他附着物后，置于秤量纸上用天平称取重量并记录量纸上用天平称取重量并记录 注意双侧器官应记录左右，子宫应注明是否连注意双侧器官应记录左右，子宫应注明是否连胎盘，睾丸应注明是否连附睾胎盘，

57、睾丸应注明是否连附睾 根据体重算出各器官占体重的百分数，并列表根据体重算出各器官占体重的百分数，并列表分析。分析。67严选文书动物组织标本的选取和固定动物组织标本的选取和固定组织块的选取：选取组织和固定时间应越早越组织块的选取：选取组织和固定时间应越早越好，以免发生自溶。选取组织块首先应选取病好，以免发生自溶。选取组织块首先应选取病灶与正常交界处的组织，即包括病变本身及病灶与正常交界处的组织，即包括病变本身及病变周围的正常组织。其次切出的组织，也应注变周围的正常组织。其次切出的组织，也应注意包括所有脏器的重要结构部分。同时，切出意包括所有脏器的重要结构部分。同时，切出时要取其最大的组织面。采取

58、组织时还要尽量时要取其最大的组织面。采取组织时还要尽量保持肉眼标本的完整性。保持肉眼标本的完整性。切取组织块的大小与形状：组织块的厚度要适切取组织块的大小与形状：组织块的厚度要适宜，一般厚约宜，一般厚约3 35mm5mm，大小为，大小为1.51.52cm2cm2 2。组。组织块的形状在成对器官或同一器官切取多块组织块的形状在成对器官或同一器官切取多块组织时，应切成不同的形状，以便易子辨别而不织时，应切成不同的形状，以便易子辨别而不致混淆。例如，左肾切成长方形或三角形，右致混淆。例如，左肾切成长方形或三角形，右肾切成正方形。肾切成正方形。68严选文书保持组织块的完整性：切取的组织块不保持组织块的

59、完整性：切取的组织块不要挤压。切时宜用锋利的刀，少用剪，要挤压。切时宜用锋利的刀，少用剪，而且切时不能将刀来回拉据，必须用力而且切时不能将刀来回拉据，必须用力一刀切下以免挤压组织，造成变形。一刀切下以免挤压组织，造成变形。组织块的固定：根据实际情况来选取固组织块的固定：根据实际情况来选取固定液。固定液要新鲜，应取定液。固定液要新鲜，应取10102020倍于倍于固定组织的体积，固定时间一般在固定组织的体积，固定时间一般在24h24h或或更长。更长。69严选文书总结报告和论文中总结报告和论文中关于动物实验的描述关于动物实验的描述一、论文题目中关于动物种的描述：一、论文题目中关于动物种的描述：例：汞

60、化合物致例：汞化合物致小鼠小鼠骨髓细胞微核及染色体畸变研究骨髓细胞微核及染色体畸变研究 长爪沙鼠长爪沙鼠生物学特性研究生物学特性研究二、材料和方法中关于实验动物和动物实验的描述二、材料和方法中关于实验动物和动物实验的描述1.1.实验动物及饲养管理实验动物及饲养管理 品种、品系、性别、数量、级别、来源、生产许可证号、在何处做动品种、品系、性别、数量、级别、来源、生产许可证号、在何处做动物实验、使用许可证号、饲养环境控制、饲养方式（饲料、饮水）、物实验、使用许可证号、饲养环境控制、饲养方式（饲料、饮水）、垫料更换垫料更换2.2.动物实验方式动物实验方式 施加试验因素方式：给药、取样、麻醉、处死施加试验因素方式：给药、取样、麻醉、处死3.3.动物实验伦理审查动物实验伦理审查 经实验动物伦理委员会审查，审查表编号经实验动物伦理委员会审查，审查表编号70严选文书71严选文书