第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌

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1、第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌 第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第十二章第十二章 革兰氏阳性无芽胞杆菌革兰氏阳性无芽胞杆菌有有3 3个属：个属：李氏杆菌属李氏杆菌属丹毒丝菌属丹毒丝菌属1.1.肾杆菌属肾杆菌属第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第一节第一节 李氏杆菌属李氏杆菌属本属细菌为本属细菌为G+G+杆菌杆菌需氧或兼性厌氧需氧或兼性厌氧无芽胞无芽胞无荚膜无荚膜20252025下能运动下能运动3737不运动不运动第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌有有7 7个种：个种：产单核细胞李氏杆菌产单核细胞李氏杆菌伊氏李氏杆菌伊氏李氏杆菌韦氏李氏杆菌韦氏李氏杆菌塞氏李氏杆菌塞氏李氏杆菌格氏李氏杆

2、菌：不致病格氏李氏杆菌：不致病莫氏李氏杆菌：不致病莫氏李氏杆菌：不致病第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌产单核细胞李氏杆菌产单核细胞李氏杆菌 一、所致疾病：一、所致疾病：细胞内寄生菌，牛羊易感，小牛、羔细胞内寄生菌，牛羊易感，小牛、羔羊表现为败血症或肝脏坏死羊表现为败血症或肝脏坏死 ，成年，成年牛间表现为神经症状的牛间表现为神经症状的“转圈病转圈病”，母畜可致流产。母畜可致流产。孕妇可致流产，儿童出现神经症状，孕妇可致流产，儿童出现神经症状，兽医易患皮肤型李氏杆菌病。兽医易患皮肤型李氏杆菌病。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌产单核细胞李氏杆菌产单核细胞李氏杆菌 二、形态及染色特点：二、形态及染色特点：G

3、+G+规则的短杆菌，呈规则的短杆菌，呈“发渣发渣”状，状，两端钝圆，有时排列成两端钝圆，有时排列成V V型，型，20-20-2525下培养产生下培养产生4 4根周身鞭毛，根周身鞭毛，3737下一根鞭毛，无芽孢，无荚膜。下一根鞭毛，无芽孢，无荚膜。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌四、微生物学诊断四、微生物学诊断1 1分离培养及鉴定分离培养及鉴定取患畜血液，脑组织研磨液，取患畜血液，脑组织研磨液，加 入加 入 5 0 m l5 0 m l 胰 蛋 白 胨 肉 汤 中胰 蛋 白 胨 肉 汤 中3724h3724h划线含有划线含有5%5%绵羊血绵羊血

4、的胰蛋白胨琼脂的胰蛋白胨琼脂是否有是否有溶血溶血及淡蓝色小菌落。及淡蓝色小菌落。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌四、微生物学诊断四、微生物学诊断1 1分离培养及鉴定分离培养及鉴定挑取特征性菌落作纯培养后，用纯培养物作挑取特征性菌落作纯培养后，用纯培养物作以下试验：染色：以下试验：染色：G+G+短杆菌。溶血性检查：短杆菌。溶血性检查：溶血，溶血，20202525运动。运动。生化试验：略生化试验：略动物致病试验：肉汤培养物鸽子胸肌注射动物致病试验：肉汤培养物鸽子胸肌注射1ml1ml，豚鼠皮下豚鼠皮下1ml1ml，2-5d2-5d内鸽子死亡，豚鼠死亡。内鸽子死亡，豚鼠死亡。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌2

5、 2血清学检查：凝集反应。血清学检查：凝集反应。病羊，牛，猪血清凝集价达病羊，牛，猪血清凝集价达1250150012501500。马：马：11000110001250012500流产牛：流产牛：180018001160011600五、免疫防治五、免疫防治1 1灭活强毒菌株免疫小鼠产生数月坚强免疫力。灭活强毒菌株免疫小鼠产生数月坚强免疫力。2 2免疫能通过淋巴细胞被动转移，但不能通过血清免疫能通过淋巴细胞被动转移，但不能通过血清 被动转移。被动转移。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第二节第二节 丹毒丝菌属丹毒丝菌属只有只有1 1个种，即：猪丹毒丝菌（猪丹毒个种，即：猪丹毒丝菌（猪丹毒杆菌）杆菌）一、

6、所致疾病一、所致疾病1 1引起引起3 31212月龄猪丹毒，月龄猪丹毒，3 34 4周岁周岁羔羊慢性多发性关节炎，鸡，火鸡衰羔羊慢性多发性关节炎，鸡，火鸡衰弱和下痢、鸭的败血症并侵害输卵管。弱和下痢、鸭的败血症并侵害输卵管。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第二节第二节 丹毒丝菌属丹毒丝菌属一、所致疾病一、所致疾病2 2实验动物以小鼠和鸽子最易感，实验动物以小鼠和鸽子最易感，家兔和豚鼠抵抗力强。家兔和豚鼠抵抗力强。3 3人感染后发生皮肤病变称人感染后发生皮肤病变称“类类丹毒丹毒”，病状与人的丹毒病相似，病状与人的丹毒病相似，人的丹毒病由化脓性链球菌属致。人的丹毒病由化脓性链球菌属致。第21章革兰氏阳

7、性无芽胞杆菌猪丹毒病理猪丹毒病理一、发病机理一、发病机理二、病理变化（二、病理变化（如图如图）（一）、急性败血型（一）、急性败血型（二）、亚急性疹块型（二）、亚急性疹块型（三）、慢性型（三）、慢性型1、猪丹毒心内膜炎、猪丹毒心内膜炎2、慢性猪丹毒关节炎、慢性猪丹毒关节炎3、皮肤坏死、皮肤坏死第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌三、培养特性三、培养特性微需微需O O2 2或兼性厌氧，普通培养基上或兼性厌氧，普通培养基上不生长。不生长。1 1血平板：湿润，光滑透明，灰血平板：湿润，光滑透明，灰白色露珠样的圆形小菌落，白色露珠样的圆形小菌落，溶血溶血（

8、李氏杆菌狭窄的（李氏杆菌狭窄的溶血）。溶血）。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌三、培养特性三、培养特性2 2血清肉汤：轻度混浊，有少量血清肉汤：轻度混浊，有少量白色粘稠沉淀，无菌环，无菌膜。白色粘稠沉淀，无菌环，无菌膜。3 3明胶穿刺：沿穿刺线横向四周明胶穿刺：沿穿刺线横向四周生长，如试管刷状，不液化明胶。生长，如试管刷状，不液化明胶。4 4麦康凯平板：不生长。麦康凯平板：不生长。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌3 3动物致病性试验动物致病性试验病料制成盐水乳剂，小鼠皮下病料制成盐水乳剂，小鼠皮下0.2ml0.2ml，鸽子胸肌，鸽子胸肌1ml1ml，豚鼠皮，豚鼠皮下下1ml

9、1ml。结果：。结果：小鼠，鸽子，小鼠，鸽子，2-5d2-5d，死亡，尸，死亡，尸体剖检可分离大量丹毒菌。豚体剖检可分离大量丹毒菌。豚鼠不反应。鼠不反应。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌4 4血清学诊断：凝集反应。血清学诊断：凝集反应。（1 1）玻片法：取标准抗原）玻片法：取标准抗原2 2滴，滴，1 1个加病猪个加病猪血清，另一个加生理盐水，血清，另一个加生理盐水，2min2min内凝集为内凝集为+。（2 2）试管法：将血清作）试管法：将血清作150150和和11001100释释稀稀2 2管，每管管，每管1ml1ml，加标准抗原，加标准抗原1212滴。滴。3737放放2-4 h2-4 h，如，如1

10、50150凝集，为阳性。凝集，为阳性。免疫荧光试验，环状沉淀试验。免疫荧光试验，环状沉淀试验。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌五、免疫治疗五、免疫治疗1 1本菌有良好免疫原性，应用本菌有良好免疫原性，应用猪丹毒活菌苗猪丹毒活菌苗GCGC4242。2 2灭活疫苗：三联苗（猪瘟，灭活疫苗：三联苗（猪瘟，猪丹毒，猪肺疫）。猪丹毒，猪肺疫）。3 3抗猪丹毒血清预防及治疗。抗猪丹毒血清预防及治疗。4 4青霉素治疗。青霉素治疗。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第三节第三节 肾杆菌属肾杆菌属鲑肾杆菌：鲑肾杆菌：致鲑鱼、鳟鱼的细菌性肾病，致鲑鱼、鳟鱼的细菌性肾病，外观无明显变化，外观无明显变化，剖检可见肾脏的乳白色颗

11、粒肉剖检可见肾脏的乳白色颗粒肉芽肿病灶。芽肿病灶。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第十三章第十三章 G+G+形成芽孢的细菌形成芽孢的细菌产芽孢的细菌包括产芽孢的细菌包括6 6个属：个属：芽孢杆菌属：引起动物疾病芽孢杆菌属：引起动物疾病 梭菌属：引起动物疾病梭菌属：引起动物疾病 芽孢乳杆菌属芽孢乳杆菌属 脱硫肠状菌属脱硫肠状菌属 芽孢八叠球菌属芽孢八叠球菌属 颤螺菌属颤螺菌属第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第一节第一节 芽孢杆菌属芽孢杆菌属 本属种类繁多有本属种类繁多有3434个正式种和个正式种和2424个不个不正式种，对人畜致病的主要是：正式种，对人畜致病的主要是：炭疽芽孢

12、杆菌：致炭疽炭疽芽孢杆菌：致炭疽 蜡状芽孢杆菌：引起食物中毒蜡状芽孢杆菌：引起食物中毒 第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌炭疽病理炭疽病理一、发病机理一、发病机理二、病理变化二、病理变化（一）、败血型炭疽（一）、败血型炭疽（如图如图）（二）、痈型炭疽（二）、痈型炭疽1、咽炭疽、咽炭疽（1）、急性咽炭疽）、急性咽炭疽第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌（2）、慢性咽炭疽）、慢性咽炭疽2、皮肤炭疽痈、皮肤炭疽痈3、肠炭疽痈、肠炭疽痈4、肺炭疽痈、肺炭疽痈第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌（二）形态及染色特征

13、（二）形态及染色特征 G G+大杆菌，无鞭毛，不运动，芽胞位于菌体中央，大杆菌，无鞭毛，不运动，芽胞位于菌体中央，直径不大于菌体，可形成荚膜。直径不大于菌体，可形成荚膜。在动物组织或血液中，单在或在动物组织或血液中，单在或2 25 5个菌连接成短链，个菌连接成短链，菌体矢直，菌端平截而呈菌体矢直，菌端平截而呈“竹节状竹节状”，围绕以丰厚的，围绕以丰厚的荚膜，荚膜抗腐败能力强，菌体因腐败而消失后，荚荚膜，荚膜抗腐败能力强，菌体因腐败而消失后，荚膜仍可残留称为膜仍可残留称为“菌影菌影”。组织中的菌体只有遇到游离氧时，才形成芽孢。组织中的菌体只有遇到游离氧时，才形成芽孢。所以怀疑为炭疽病时，严禁剖检

14、，避免与所以怀疑为炭疽病时，严禁剖检，避免与O O2 2接触，耳接触，耳尖采血涂片。尖采血涂片。在培养基中，形成长链，在普通培养基上不形成荚在培养基中，形成长链，在普通培养基上不形成荚膜，并于培养膜，并于培养181824h24h开始形成芽孢。开始形成芽孢。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌体外炭体外炭疽杆菌疽杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌（三）培养特性（三）培养特性需氧兼性厌氧，营养要求不高。需氧兼性厌氧，营养要求不高。1 1普通培养基上：强毒株形成灰白色不透明，大普通培养基上：强毒株形成灰白色不透明，大而扁平，表面干燥，边缘呈卷发状的粗糙菌落而扁平，表面干燥，边缘呈卷

15、发状的粗糙菌落（R R）；弱毒株形成小而隆起，光滑湿润，边缘整）；弱毒株形成小而隆起，光滑湿润，边缘整齐的齐的S S型菌落。型菌落。2 2血平板：不溶血（类炭疽呈血平板：不溶血（类炭疽呈溶血）溶血）3 3普通肉汤：上部清朗，底部有絮状沉淀，无菌普通肉汤：上部清朗，底部有絮状沉淀，无菌环和菌膜，轻摇试管，沉淀物徐徐上升，缠绕成环和菌膜，轻摇试管，沉淀物徐徐上升，缠绕成团而不散开。团而不散开。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌（三）培养特性（三）培养特性4 4明胶穿刺：明胶穿刺：沿穿刺线缓慢液

16、化，形成倒立的松树状。沿穿刺线缓慢液化，形成倒立的松树状。5 5青霉素串珠试验：青霉素串珠试验：在含有在含有0.50.5单位单位/ml/ml的青霉素培养基中培养的青霉素培养基中培养时，由于细胞壁中粘肽合成受到抑制，因时，由于细胞壁中粘肽合成受到抑制，因而形成原生质体相互连接成串称为而形成原生质体相互连接成串称为“串珠串珠反应反应”，这是该菌特有的反应。，这是该菌特有的反应。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌（四）生化特性（四）生化特性糖发酵：糖发酵：G+G+蔗蔗+麦麦+菊菊+蕈糖蕈糖+果糖果糖+甘油甘油+伯胶糖伯胶糖 木甘露醇淀粉木甘露醇淀粉+硝酸盐还原硝酸盐还原+吲哚吲哚 H H2 2S S H

17、H2 2O O2 2+（五）抵抗力（五）抵抗力1 1繁殖体的抵抗力不强：繁殖体的抵抗力不强：60 3060 3060min60min杀死杀死75 575 515min15min杀死。一般消毒剂短时间内可将其杀死，未剖杀死。一般消毒剂短时间内可将其杀死，未剖检的尸体，细菌随腐败而迅速死亡。检的尸体，细菌随腐败而迅速死亡。2 2芽胞抵抗力特强：干燥状态下存活芽胞抵抗力特强：干燥状态下存活1010年，土壤中年，土壤中20203030年年。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌（六）抗原性：（六）抗原性：有有4 4种主要抗原成分种主要抗原成分1 1荚膜多肽抗原：与毒力有关，是荚膜多肽抗原：与毒力有关，是一种半抗

18、原，此抗原的抗体无保护一种半抗原，此抗原的抗体无保护作用，但有特异性较强，可用该抗作用，但有特异性较强，可用该抗体进行荚膜肿胀试验及荧光抗体法体进行荚膜肿胀试验及荧光抗体法进行鉴定细菌。进行鉴定细菌。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌（六）抗原性：（六）抗原性：有有4 4种主要抗原成分种主要抗原成分2 2菌体多糖抗原：当毒力无关，但性质稳定，耐菌体多糖抗原：当毒力无关，但性质稳定，耐高温高压，抗原性不被破坏。可用来制备炭疽热沉高温高压，抗原性不被破坏。可用来制备炭疽热沉淀反应用抗原，即淀反应用抗原，即AscoliAscoli氏反应。此法特异性不高，氏反应。此法特异性不高，与其它芽孢菌能发生交叉反应。

19、与其它芽孢菌能发生交叉反应。3 3保护性蛋白抗原（保护性蛋白抗原（PAPA）：是毒素组成成分，具）：是毒素组成成分，具有免疫原性，能使机体产生抗体保护被感染。有免疫原性，能使机体产生抗体保护被感染。4.4.芽孢抗原芽孢抗原第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌（七）毒素和毒力（七）毒素和毒力1 1荚膜：抗吞噬和消除抗体作用，利于细菌扩散。荚膜：抗吞噬和消除抗体作用，利于细菌扩散。2 2炭疽毒素：包括水肿毒素和致死性毒素炭疽毒素：包括水肿毒素和致死性毒素2 2种，由种，由3 3个亚单位组成：个亚单位组成：水肿因子（水肿因子（EFEF）（脂蛋白）（脂蛋白）致死因子（致死因子（LFLF）（蛋白质）（蛋白质）保

20、护性抗原（保护性抗原（PAPA）（蛋白质）（蛋白质）三者单独均无毒性作用，只有三者单独均无毒性作用，只有PA-EFPA-EF或或PA-LFPA-LF结合才有结合才有致病作用。致病作用。作用机理：毒素作用于微血管内皮作用机理：毒素作用于微血管内皮C C，使之通透性增，使之通透性增强，损害肾脏，干扰糖代谢，引起弥散性血管内凝血，强，损害肾脏，干扰糖代谢，引起弥散性血管内凝血，导致动物死亡。导致动物死亡。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌（八）微生物学诊断（八）微生物学诊断严禁剖检，自耳根部采血，必要时切开肋间取脾脏，严禁剖检，自耳根部采血，必要时切开肋间取脾脏，皮肤炭疽取渗出液。皮肤炭疽取渗出液。1 1

21、细菌学检查细菌学检查取材、涂片、染色、镜检：发现有荚膜的竹节状取材、涂片、染色、镜检：发现有荚膜的竹节状大杆菌（初步诊断）。大杆菌（初步诊断）。分离培养：分离培养：a.a.普通平板。普通平板。b.b.血平板。血平板。c.c.选择性培养基：如戊烷脒琼脂、选择性培养基：如戊烷脒琼脂、溶菌酶正铁溶菌酶正铁 血红素琼脂、血红素琼脂、KniselyKnisely培养基，培养基，37 1637 1620h20h挑挑选可疑菌落与其它大杆菌作鉴别诊断。选可疑菌落与其它大杆菌作鉴别诊断。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌生化试验生化试验致病性试验：被检病料制成致病性试验：被检病料制成1515悬液，小白悬液，小白鼠鼠0

22、.1ml0.1ml皮下注射，兔、豚鼠皮下注射，兔、豚鼠0.2-0.3ml0.2-0.3ml，动物，动物死于败血症，剖检取脏器涂片镜检可见死于败血症，剖检取脏器涂片镜检可见G+G+有荚有荚膜大杆菌，确诊。膜大杆菌，确诊。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌（九）防治（九）防治1 1号炭疽芽胞苗：巴斯德将强毒株号炭疽芽胞苗：巴斯德将强毒株 42.5 42.5 培培养养10-1210-12天，使其丧失形成芽孢的能力，然后天，使其丧失形成芽孢的能力，然后35 35 培育培育4-74-7天，使其恢复形成芽孢的能力，用这种细天，使其恢复形成芽孢的能力，用这种细菌制成疫苗叫菌制成疫苗叫号

23、炭疽芽胞苗。号炭疽芽胞苗。2 2无毒炭疽芽孢苗：南非畜牧兽医研究所选育的无毒炭疽芽孢苗：南非畜牧兽医研究所选育的一株弱毒变种，失去形成荚膜能力，比一株弱毒变种，失去形成荚膜能力，比号炭疽芽号炭疽芽孢易余毒力强。此疫苗对山羊有强烈反应孢易余毒力强。此疫苗对山羊有强烈反应,可引起可引起严重反应，甚至死亡。严重反应，甚至死亡。3 3抗炭疽血清抗炭疽血清以下图片为鼠疫相关以下图片为鼠疫相关第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌鼠疫的坏死及出血鼠疫的坏死及出血第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌二、蜡样芽孢杆菌二、蜡样芽孢杆菌广泛存在在于自然界，如土壤、水、空气、饲料、食品，一定条广泛存在在于自然界，如土壤、水、空气、饲

24、料、食品，一定条件下，对人致病：引起人胃肠道感染（食物中毒）、眼球炎、新件下，对人致病：引起人胃肠道感染（食物中毒）、眼球炎、新生儿上呼吸道感染和脐带炎。自然情况下，引起牛的乳腺炎，驴生儿上呼吸道感染和脐带炎。自然情况下，引起牛的乳腺炎，驴的皮下水肿，犬，猫腹泻。的皮下水肿，犬，猫腹泻。蜡样芽孢杆菌蜡样芽孢杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第二节第二节 梭菌属梭菌属一、属的特性一、属的特性 厌氧芽孢杆菌，芽孢呈卵圆形或圆形，直径大于菌厌氧芽孢杆菌，芽孢呈卵圆形或圆形，直径大于菌体，使菌体膨大呈梭形，故得名。大多数有鞭毛体，使菌体膨大呈梭形，故得名。大多数有鞭毛（魏氏梭菌除外），无荚膜（魏氏梭菌除

25、外），（魏氏梭菌除外），无荚膜（魏氏梭菌除外），G+G+。二、分类及所致疾病二、分类及所致疾病本属有本属有8080个种，多为非致病菌，常见致病菌约为个种，多为非致病菌，常见致病菌约为1111种。种。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌三、疾病类型及诊断原则三、疾病类型及诊断原则疾病类型有疾病类型有5 5大类。大类。1 1气肿疽与恶性水肿：急性败血症且有气性水肿气肿疽与恶性水肿：急性败血症且有气性水肿症状。症状。气肿疽：气肿疽梭菌引起，经消化道感染。气肿疽：气肿疽梭菌引起，经消化道感染。恶性水肿：病原复杂，动物（腐败梭菌）、人恶性水肿：病原复杂，动物（腐败梭菌）、人 （A A型产气荚膜梭菌）。型产气荚膜

26、梭菌）。诊断原则：病原菌的检查。诊断原则：病原菌的检查。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌3 3羔羊痢疾，犊牛痢疾，人禽的坏死性肠炎羔羊痢疾，犊牛痢疾，人禽的坏死性肠炎由魏氏梭菌在肠道内产生毒素所致，细菌不一定侵由魏氏梭菌在肠道内产生毒素所致，细菌不一定侵入体内，主要查毒素。入体内，主要查毒素。4 4人畜的肉毒中毒、人魏氏梭菌食物中毒：均由人畜的肉毒中毒、人魏氏梭菌食物中毒：均由病原菌在食物或饲料中生长繁殖，产生毒素被食入病原菌在食物或饲料中生长繁殖，产生毒素被食入而中毒。而中毒。肉毒症：主要检查肉毒毒素，其次细菌学检查。肉毒症：主要检查肉毒毒

27、素，其次细菌学检查。魏氏梭菌食物中毒：可疑食物分离细菌，并测定其魏氏梭菌食物中毒：可疑食物分离细菌，并测定其 毒素产生能力。毒素产生能力。5 5破伤风：破伤风梭菌经伤口感染，产生破伤风破伤风：破伤风梭菌经伤口感染，产生破伤风毒素引起，症状极为特征毒素引起，症状极为特征“木马状木马状”，不需微生物，不需微生物诊断。诊断。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌四、梭菌属分离鉴定应注意事项四、梭菌属分离鉴定应注意事项1 1专性厌氧，必须采用厌氧培养物。焦性没专性厌氧，必须采用厌氧培养物。焦性没食子酸法、共栖法，肝块肉汤、铁钉牛乳。食子酸法、共栖法，肝块肉汤、铁钉牛乳。2 2培养基必须是新鲜配制，厌氧条件下保存

28、。培养基必须是新鲜配制，厌氧条件下保存。3 3梭菌在培养基表面蔓延生长，不易得到单梭菌在培养基表面蔓延生长，不易得到单个菌落，为了得到单个菌落，可将琼脂量加到个菌落，为了得到单个菌落，可将琼脂量加到46%46%（一般（一般2%2%），或划线接种后在表面再加注），或划线接种后在表面再加注一层琼脂培养基，以限制其蔓延生长。一层琼脂培养基，以限制其蔓延生长。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌四、梭菌属分离鉴定应注意事项四、梭菌属分离鉴定应注意事项4 4污染严重时，污染严重时，80 20min80 20min杀死杂菌，杀死杂菌，2525下培养。下培养。5 5腐败梭菌，魏氏梭菌容易在死后侵入腐败梭菌，魏氏梭菌

29、容易在死后侵入动物体，而诺维梭菌、溶血梭菌存在正动物体，而诺维梭菌、溶血梭菌存在正常动物体内，故从动物体分离出这些梭常动物体内，故从动物体分离出这些梭菌，并不能肯定它们就是病原，应进行菌，并不能肯定它们就是病原，应进行毒力测定。毒力测定。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌五、产气荚膜梭菌五、产气荚膜梭菌旧名：魏氏梭菌，自然界分布广，可见旧名：魏氏梭菌，自然界分布广，可见于污水，土壤，饲料，食物及人畜肠道于污水，土壤，饲料，食物及人畜肠道中，一定条件下，引起多种严重疾病。中，一定条件下，引起多种严重疾病。（一）形态染色特征（一）形态染色特征 G G+粗大正直杆菌，单在或成双排列，无粗大正直杆菌，单在或

30、成双排列，无鞭毛，一般条件下培养芽孢很少产生，鞭毛，一般条件下培养芽孢很少产生，有荚膜。有荚膜。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌产气荚膜梭菌产气荚膜梭菌（二）培养特性（二）培养特性厌氧要求不高，普通培养基上易生长。厌氧要求不高，普通培养基上易生长。1 1葡萄糖血平板：圆形，光滑，隆起，淡灰葡萄糖血平板：圆形，光滑，隆起，淡灰白色中等大小菌落，有的可形成圆盘形边缘呈白色中等大小菌落，有的可形成圆盘形边缘呈锯齿状，表面有辐射状条纹的锯齿状，表面有辐射状条纹的“勋章勋章”样大菌样大菌落，产生落，产生“双重溶血环双重溶血环”内环内环溶血，外环为溶血，外环为溶血。溶血。2 2肝块肉汤：肝块肉汤：5-6h5-

31、6h，均匀浑浊，产生大量气，均匀浑浊，产生大量气体。体。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌（三）生化特性（三）生化特性1 1牛乳暴烈发酵：魏氏梭菌接种牛乳培养牛乳暴烈发酵：魏氏梭菌接种牛乳培养基基8-10h8-10h后，发酵牛乳中的乳糖使牛乳酸凝，后，发酵牛乳中的乳糖使牛乳酸凝，同时产生大量气体使凝块变多孔的海绵状，同时产生大量气体使凝块变多孔的海绵状，严重时，被冲成数段，甚至喷出管外。严重时，被冲成数段，甚至喷出管外。2 2明胶液化，糖发酵明胶液化，糖发酵 H H2 2S+S+吲哚吲哚 HNOHNO3 3第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌（五）微生物学诊断（五）微生物学诊断细

32、菌学诊断意义不大，因为魏氏梭菌是人畜肠道中常见菌，细菌学诊断意义不大，因为魏氏梭菌是人畜肠道中常见菌，或者死后被侵入，从病料中检出该菌并不能说明它就是病或者死后被侵入，从病料中检出该菌并不能说明它就是病原。必须进行肠内容物毒素检查。原。必须进行肠内容物毒素检查。1 1方法：方法：回肠内容物回肠内容物加适量灭菌生理盐水作加适量灭菌生理盐水作1-31-3倍稀释倍稀释离心取上离心取上清，滤过除菌清，滤过除菌滤液静脉注射家兔（滤液静脉注射家兔（1-3ml1-3ml），小鼠（），小鼠（0.1-0.1-0.3ml0.3ml）数分钟至数分钟至1010小时内死亡，证明有毒素存在。小时内死亡，证明有毒素存在。2

33、 2为了进一步证明是否为魏氏梭菌毒素及毒素型，必须进为了进一步证明是否为魏氏梭菌毒素及毒素型，必须进行毒素中和试验。行毒素中和试验。方法：上述滤液方法：上述滤液3 3份。份。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌 I+C型魏氏梭菌抗毒素血清型魏氏梭菌抗毒素血清 +D型魏氏梭菌抗毒素血清型魏氏梭菌抗毒素血清 37作用作用40min静脉注射小鼠或兔子静脉注射小鼠或兔子 +生理盐水生理盐水观察观察12h,记录结果如下：记录结果如下：D型抗毒素血清可保护型抗毒素血清可保护 C型抗毒素血清也可保护型抗毒素血清也可保护A型毒素型毒素 C型抗毒素血清不能保护型抗毒素血清不能保护D型毒素型毒素D型抗毒素血清不保护型抗毒

34、素血清不保护 C型抗毒素血清可保护型抗毒素血清可保护B型或型或C型毒素型毒素 C型也不保护型也不保护可能是可能是E型或不是魏氏梭菌毒型或不是魏氏梭菌毒 素，再用素，再用E型血清试验确定型血清试验确定第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌 E E型能保护型能保护E E型毒素型毒素。E E型不能保护型不能保护不是魏氏梭菌毒不是魏氏梭菌毒素素。不能区分不能区分B B型或型或C C型毒素时，滤液中加入型毒素时，滤液中加入0.250.5%0.250.5%胰酶，胰酶，3737作用作用30-60min30-60min，离心沉淀取上清再与，离心沉淀取上清再与C C型抗血清进行中和保型抗血清进行中和保护试验。护试验。C

35、C型抗毒素血清不能保护型抗毒素血清不能保护B B型毒素型毒素C C型抗毒素血清能保护型抗毒素血清能保护C C型毒素型毒素（原因（原因B B型毒素中的型毒素中的毒素尚为不显毒性的原生毒素时，可毒素尚为不显毒性的原生毒素时，可被被C C型型血清中和；血清中和；原生毒素被细菌产生的蛋白酶激活，显示出原生毒素被细菌产生的蛋白酶激活，显示出毒力，毒力，C C型血清就不能中和它了）。型血清就不能中和它了）。（六）免疫防治（六）免疫防治羊快疫，羊猝狙，肠毒血症，三联苗防治羊快疫，羊猝狙，肠毒血症，三联苗防治第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌六、肉毒梭菌六、肉毒梭菌一种腐生性细菌，分部广泛，不能在活的机体内生长繁殖

36、。在一种腐生性细菌，分部广泛，不能在活的机体内生长繁殖。在一定条件下，生长繁殖产生肉毒毒素，人畜食入毒素污染的食一定条件下，生长繁殖产生肉毒毒素，人畜食入毒素污染的食物饲料引起中毒。肉毒毒素是迄今已知化学毒素及细菌毒素中物饲料引起中毒。肉毒毒素是迄今已知化学毒素及细菌毒素中毒性最强的一种，比毒性最强的一种，比KCNKCN强强1000010000倍，倍，1g1g杀死杀死2020亿只老鼠，亿只老鼠，100100万个人。万个人。七、气肿疽梭菌七、气肿疽梭菌又名费氏梭菌，俗称黑腿病杆菌，引起气肿疽。主要发生于牛，又名费氏梭菌，俗称黑腿病杆菌，引起气肿疽。主要发生于牛，症状主要是肌肉丰满部位发生气性水肿

37、，受害肌肉呈暗红色，症状主要是肌肉丰满部位发生气性水肿，受害肌肉呈暗红色，故又称为黑腿病。故又称为黑腿病。八、腐败梭菌八、腐败梭菌引起人和动物的恶性水肿，还引起羊快疫。引起人和动物的恶性水肿，还引起羊快疫。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌九、诺维梭菌九、诺维梭菌按照其毒素差异，可分按照其毒素差异，可分4 4个菌型：个菌型：A A型：引起人和动物恶性水肿，又称水肿梭菌，公羊因斗殴引型：引起人和动物恶性水肿，又称水肿梭菌，公羊因斗殴引起头部感染而发生起头部感染而发生“大头病大头病”。B B型：引起绵羊的黑疫，患病动物皮下静脉显著充血，使皮肤型：引起绵羊的黑疫，患病动物皮下静脉显著充血，使皮肤呈暗黑色外

38、观。呈暗黑色外观。C C型：引起水牛骨髓炎，表现为骨髓的渐进性坏死与化脓型：引起水牛骨髓炎，表现为骨髓的渐进性坏死与化脓 （仅发病于印尼）。（仅发病于印尼）。D D型：引起牛的细菌性血红尿，（我国尚无报道）。型：引起牛的细菌性血红尿，（我国尚无报道）。第21章革兰氏阳性无芽胞杆菌十、破伤风梭菌十、破伤风梭菌引起人畜的破伤风，以骨骼肌发生强直性痉挛的症状为特征。引起人畜的破伤风，以骨骼肌发生强直性痉挛的症状为特征。必须有伤口才感染。必须有伤口才感染。破伤风梭菌，革兰染色破伤风梭菌，革兰染色 破伤风梭菌是细的末端有芽胞的破伤风梭菌是细的末端有芽胞的革兰阳性杆菌。芽胞中心不染氏。（革兰染色，放大革兰阳性杆菌。芽胞中心不染氏。（革兰染色，放大10001000倍倍）