大豆DAN开题报告

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1、一、研究或设计的目的和意义：1研究目的： 大豆品种选育在大豆生产中发挥着重要的作用，科学准确地鉴别大豆品种及种质资源材 料的遗传多样性，对种子质量鉴定、遗传资源评价和品种权益保护均具有重要意义。采用 SSR 分子标记技术对134份大豆种质资源进行遗传多样性分析，旨在分析不同大豆品种之间 遗传多样性水平, 既可以发掘和创造有特殊利用价值的新种质，又可为拓宽我省大豆育种遗 传基础、发掘优异基因、改良大豆品种提供理论依据。2研究意义： 生物遗传多样性是指生命有机体与其借以存在的生态复合体相互作用产生的多样性和 变异性，是生物界进化产生的宝贵资源，对它的研究具有十分重要的意义。DNA 分子标记是近年来

2、发展起来的一套分析生物遗传多样性的有效方法，其中包括限 制片段长度多态性、随机扩增多态性DNA、单核苷酸多态性、简单重复序列长度多态性等 等。简单重复序列，有称微卫星DNA,相比较于其他标记，具有操作技术简单、所需DNA 量少、等位变异丰富,信息量大、呈共显性等特点， ,目前在遗传图谱构建、遗传多样性研究、 亲缘关系鉴定、品种纯度鉴定、分子标记辅助育种等方面应用非常广泛。 大豆是我国主要的油料作物,利用分子标记对大豆品种资源进行深入研究,从而掌握品种资源 更多的遗传信息,是利用种质资源和培育大豆新品种的重要基础工作，拓宽本地大豆品种的 遗传基础，且遗传多样性研究对于发掘新基因、明确大豆演化及新

3、品种选育等领域具有重要 理论价值和实际意义。二、研究或设计的现状和发展趋势：宋启建筛选出一套标准三核苷酸重复系列位点，其中一些位点已被美国农业部品种专利保护处推 荐为用于大豆品种专利保护的DNA指纹标准位点。谢华等从大豆连锁群上选取200个SSR位点，筛 选出102个多态性好、重复结果稳定的引物分析了全国有代表性的80份秋大豆资源，选出了 60个SSR 核心位点，这些位点覆盖大豆20个连锁群，在连锁群上相邻位点间平均遗传距离为20cM。张博等利用 SSR技术对我国获得成果奖励的12个大豆育成品种及其12个亲本品种的遗传多样性和遗传关系进行 了分析，认为与亲本品种相比，尽管差异不明显，但育成品种

4、的遗传基础有变窄的趋势。林凡云等用45 对分布于20个连锁群上的SSR引物对山西省13份大豆育成品种和地方品种进行了分析，发现45个 SSR位点基本可以将地方品种和育成品种分开，表明地方品种和育成品种在分子水平上也发生了一定 变化，但地方品种的遗传多样性要高于育成品种。为了评价大豆品种资源的遗传多样性，本研究利用SSR分子标记技术比较研究了不同地区134个 大豆品种的遗传多样性，旨在为大豆资源的选育和生产提供理论依据。三、主要研究或设计内容，需要解决的关键问题和思路：1主要研究内容（1）从分子水平研究不同大豆种质资源扩增DNA片段的遗传多样性。（2）采用琼脂糖凝胶电泳检测切断DNA片断的大小范

5、围，筛选出切断大豆基因组DNA的最佳处 理方法。（3）熟悉和掌握PCR技术的原理和方法，并能够使用、掌握相关实验仪器的操作和使用方法。2 关键问题和思路问题（1）CTAB法提取DNA后怎样纯化、DNA完全没有被内切酶切割或DNA切割不完全、DNA片段数目多 于理伦值、酶切后没有观察到DNA片段的存在、电泳后DNA片段的带型弥散不均一或DNA带模糊 等等问题。（2）理论联系实践，不断的摸索，寻找适合的实验组合体系，拍摄出清晰可观的图片。探究和掌 握运用分子图谱来分析大豆种质资源扩增DNA片段大小的方法。技术路线：大豆种质资源收集、整理四、完成毕业论文（设计）所必须具备的工作条件及解决的办法：1

6、实验条件：（1）仪器：恒温培养箱，种子盒（若干），标签纸（若干）及沙性壤少许发芽阶段;恒温水 浴锅，冰冻离心机，移液器及配套枪头，离心管，研钵，恒温培养箱DNA提取阶段；冰箱 DNA的保存、冰盒防止高温降解电泳仪PCR的扩增、漩涡振荡器、0.2ml、1.5m （或 2m）离心管、高压灭菌锅微波炉、制胶板、制胶槽、水平电泳槽、样品梳、凝胶成像系统或紫外灯、 点样板、电子秤、三角瓶、烧杯，药匙等电泳阶段。（2）试剂与药品：双氧水、2XCTAB 提取缓冲液、100mmol/LTirs Cl（pH=8.0）, 50mmol/L EDTA（pH=8.0）、700mmol/L Nacl（pH=8.0）无水

7、乙醇，70%乙醇，氯仿、异戊醇（本实验 用三氯甲烷）、10Xbuffer 25mMMgCl 2.5 mMdNTP、左引物 1、右引物 2、Taq 酶、DNA、2、DHO 1XTAE电泳缓冲液，琼脂糖，EB （溴化乙锭）、0.25%溴酚蓝加样缓冲液等。（3）供试材料：国内部分优良的大豆种质资源材料，共134个品种。均由贵州大学农学院麦作研究 中心收集、保存并提供。2.解决方案（1）本研究所需的材料、仪器、药品，由贵州大学农学院麦作研究中心提供。（2）通过对134个大豆种质资源进行SSR标记分析，筛选并利用13对引物从分子水平研究不同大豆 品种扩增DNA片段的遗传多样性，筛选出遗传多样性明显的优良

8、大豆种质资源，为我省的大豆品质育 种和生产提供一定的依据。大豆研究中心已具备上述实验条件及研究，因此能如期完成本文的研究内容，并能达到预期研 究目标。五、工作的主要阶段、进度与时间安排：2009.92009.10 （第一阶段）实验材料的收集、整理，如采收、脱粒、考种等工作。2009.112010.12（第二阶段）大豆的育苗和DNA的提取及保存。2010.12010.2 （第三阶段）采用PCR扩增技术和SSR分子标记技术及电泳技术对供试材料的遗传多样性进行分子图谱分析，并整理数据。2010.22010.3整理实验资料，查阅参考文献，撰写毕业论文初稿。2011.42011.6试验数据的整理和分析，

9、根据要求修改毕业论文及做好充分准备论文答辩。六、阅读的主要参考文献及资料名称：1 宋喜娥，李英慧等.中国栽培大豆(Glycine max (L.) Merr.)微核心种质的群体结构与遗传多样 性J.中国农业科学2010年11期.2 高运来，姚丙晨，刘春燕等黑龙江省主栽大豆品种遗传多样性的SSR分析J.植物学报2009 年05期.3 李英慧；邱丽娟等中国大豆地方品种遗传多样性分析及大豆抗胞囊线SNAP标记发掘J.中国 科学院上海冶金研究所；材料物理与化学(专业)博士论文2000年度.4 张琳琳标记研究驯化和育种对大豆遗传多样性的影响.硕士学位论文2007年度.5 高慧北京沿海滩涂野生大豆资源的收

10、集及其遗传多样性的SSR分析.硕士学位论文2008年度.6 傅旭军大豆种质资源遗传多样性分析及其利用研究.硕士学位论文2009年度.7 宁学成中国西南三省大豆核心种质遗传多样性分析.硕士学位论文2004年度.8 谢华，关荣霞等国夏大豆Glycine+max+L+Merr种质遗传多通报样性.科学通报2005年05期.9 周延清.三种经济植物遗传多样性的ISSR和RAPD分析、fad基因克隆和农杆菌介导的遗传转化. 博士学位论文.2005年度.10 徐静静大豆疫霉分子检测及SSR标记的开发.硕士学位论文2008年度.11 刘峰，方东阳等应用微卫星标记进行大豆种质多样性和遗传变异性分析.遗传学报27(7):6286332000.12 王振东，陈超力等大豆抗旱种质资源遗传多样性的SSR分析大豆科学2010年03期.13 周新野生和栽培大豆核苷酸序列多样性.理学硕士论文2006年度.