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1、1.材料与方法1.1材料处理生菜，选取整齐、质地脆嫩、颜色翠绿或深绿，且无腐烂、无虫食的作为实验试材。适当剥去外部一些受损苞叶，使其大小整齐一致，将生菜用0.02%次氯酸钠浸泡3min,晾干水分后，五棵作为一个实验组，用塑料袋包装，分别在-4C,0C,4C以及室温下贮藏。每隔2d测定一次贮藏生菜的生理指标，贮藏期间相对湿度为70%。1.2实验使用的化学试剂碳酸钙粉（石英砂），80%的丙酮；1mg.ml-i葡萄糖标准液，3,5-二硝基水杨酸试剂；去离子水；0.6%的硫代巴比妥蒜（TBA）,10%的三氯乙酸（TCA）;0.2mol/L的磷酸缓冲液H202溶液;0.05mol/LPH=7.8磷酸缓冲
2、液，提取介质（0.05mol/LPH=7.8磷酸缓冲液，内含质量分数为1%的聚乙烯吡咯烷酮），130mmol/LMet溶液，750umo1/LNBT溶液,100umol/LEDTA溶液，20umo1/L核黄素，蒸馏水；质量分数2%H202溶液，pH5.5磷酸缓冲液，0.05mol/L愈创木酚，20%的三氯乙酸（TCA）；pH5.5磷酸缓冲液,20%的三氯乙酸（TCA）,PVP,0.1mol/L儿茶酚；1.3实验的仪器设备天平，分光光度计，水浴锅，离心机，研钵，打孔器，烧杯，容量瓶，移液管，试管，漏斗，滤纸，光照箱，培养箱，冰箱，电导仪，1.4实验方法1.4.1失重率采用差量法计算。失重率（）=
3、（入贮前重量一贮藏后重量）/入贮前重量X100%1.4.2叶绿素含量叶绿素含量的测定采用分光光度比色法1。取0.5g生菜叶片研磨，加少量的碳酸钙粉及80%丙酮进行研磨，匀浆过滤后用80%的丙酮定容至15ml,以80%的丙酮作对照，在分光光度计上测定665nm,649nm,470nm处的光密度值。以Amon法公式计算叶绿素的含量。色素的浓度C）提取液体积稀释倍数，叶绿素总量（mg/g）=样品鲜重（或干重丿1.4.3还原糖含量采用3,5一二硝基水杨酸（DNS）比色法。称取生菜叶片样品1g,加8mL蒸馏水匀浆，10000rpm离心20min,吸取上清液2.0mL,力口1.5mL的DNS试剂，沸水中煮
4、5min,冷却后蒸馏水用定容到25.0mL,测A540。以葡萄糖作标准曲线并计算还原糖含量。1.4.4电导率测定用打孔器取10片68mm的生菜叶片，用自来水冲洗数次，再用去离子水冲洗，然后用50ml的去离子水加盖浸泡1h,测电导率S1，（以蒸馏水为空白对照组。煮沸12min,静置1h,再测电导率s2。相对电导率L=S/S2）。1.4.5丙二醛（MDA）含量采用硫代巴比妥酸（TBA）比色法。取生菜叶片样品1g加入2mL10%TCA和少量石英砂,研磨，再加8mlTCA进一步研磨，匀浆液4000r/min离心10min。取2mL上清液，加2ml质量分数为0.6%TBA溶液，沸水中煮15min,冷却后
5、离心，取上清液测定450,532和600nm波长下的吸光度值，以TCA溶液取代酶液作为空白。根据公式MDA质量摩尔浓度（mol.L-1）=c.N.W-1计算出MDA浓度及生菜样品中的含量1.4.6超氧化物歧化酶（SOD）活性取生菜样品0.5g,加入6mL提取介质（0.05mol/LPH=7.8磷酸缓冲液，内含质量分数为1%的聚乙烯吡咯烷酮），冰浴研磨，加入提取介质使得终体积为10ml。4C下10500r/min离心20min，上清液为SOD粗酶液。酶活力测定：反应体系中顺次加入0.05mol/LpH7.8磷酸缓冲溶液3mL,130mmol/LMet溶液0.6mL,750umo1/LNBT溶液0
6、.6mL,100umol/LEDTA溶液0.6mL,粗酶液0.2mL,20umo1/L核黄素0.6mL,蒸馏水0.4ml振荡摇匀，以缓冲液作空白对照,不加酶液（以PBS代替）的反应管作为最大光化还原管，在40001ux下照光20min后立即避光迅速测定A560的值。SOD活性=（A0-AS）比活力总活性1.4.7过氧化物酶POD活力测定愈创木酚比色法测定过氧化物酶活性，取生菜叶片样品0.5g，加入pH5.5磷酸缓冲液6mL,冰浴研磨匀浆，匀浆液转移至离心管中，4000r/min离心10min，上清液转入25ml容量瓶，沉淀物用5mlpH5.5磷酸缓冲液再提取两次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度
7、。酶活性测定反应体系：2.9mL磷酸缓冲液（pH5.5）,1.0mL0.05mol/L愈创木酚,0.1mL粗酶液，最后加入0.1mL质量分数2%H202溶液，迅速颠倒混匀，于3C水浴中15min,转入冰浴中，并加2.0ml20%三氯乙酸终止反应，过滤，稀释，以煮沸5min酶液代替粗酶液作为对照，测D470。以每分钟内D470变化0.01为1个过氧化物酶活性单位（U）过氧化物酶活性=1.4.8多酚氧化酶PPO活力测定比色法测定多酚氧化酶活性，L称取马转薯克,雪入盍SmLpHM磷酸缓冲液，少许PVP，研刖匀浆，转移到离心乐冉用2.5mI.pH7.2磷酸缓冲液冲洪研钵，合并提収液.4UC50Qrpni离心茁分钟，I：清液即为粗酶液。2. 在试管小，加入2.5】讥pH72磷酸缓冲液,1.5mL儿茶酚以及lniL粗酶液，空白调零以1!血磷酸缓冲液代替粗酶液1.4.9紫外缓冲容至液3, A值测定：加入粗酶液肩迅速混匀，立刻于525nmK测定反应氢系的AT值，每隔30秒记录一次，共记录5次。勺的磷酸合并冲洗液，定清液为提取粗酶收计算i过活力氢按下式计取和少活性英砂研磨，转入度。于加C下静定义为一个上部力清部分
植物生理指标测定的实验方法简介
