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1、HPLC法测定醋酸奥曲肽的聚合物初虹 盛伟红 徐龙芳 马青铁（苏州中科天马肽工程中心有限公司 苏州 215101）摘要 目的；建立HPLC法测定醋酸奥曲肽的聚合物。方法：采用凝胶色谱柱（TSK GEL 2000SWXL 7.8mm300mm,5m），以三氟乙酸-乙腈水（0.032：20：80）为流动相，流速为0.7ml/min，检测波长为210nm。结果：理论塔板数高，峰形好，系统适应性符合规定，分子量标准曲线线性回归的相关系数为0.995，结论：本方法准确、快速、简捷。关键词：HPLC法 醋酸奥曲肽 聚合物Determination of the Polymer of Octreotide
2、Acetate By HPLCCHU Hong,SHENG Wei-hong,XU Long-fang,MA Qing-tie(ChinaTech Peptide CO.，Ltd. SUZHOU 215101)Abstract Objective:To establish HPLC method for determination of the polymer of octreotide acetate . Methods:using gelatin chromatographic column(TSK GEL 2000SWXL 7.8mm300mm,5m),mobile phase was
3、Trifluoroacetic acid-acetonitrile-water(0.032:20:80),The flow rate was 0.7ml/min The wavelength used for detection was 210nm.Results: The theoretical plate number is high,the peak shape is good,the system suitability Complies to the prescription,the correlation coefficient of standard curve is 0.995
4、. Conclusion:The method is rapid,simple and accurate.Key words HPLC Octreotide Acetate Polymer醋酸奥曲肽（octreotide acetate）是一个以生长抑素活性片段为骨架人工合成的长效生长激素释放抑制素，可选择性的直接作用于血管平滑肌，使内脏循环血量降低25%35%，门脉血流量和门静脉压力下降，还能抑制胃酸和胃蛋白酶的分泌，从而防止血凝块破坏而再出血1，临床主要用于治疗肝硬化并发食管胃底静脉曲张破裂出血，其止血率为80%90%2。有HPLC法测定醋酸奥曲肽含量和有关物质3的报道，但未见醋酸奥曲肽聚
5、合物测定的报道。本文采用HPLC法测定醋酸奥曲肽的聚合物，方法准确、快速、简捷。一、仪器和试剂1、仪器：Agilent 1200高效液相色谱仪系统(含一台G1322A脱气机、G1311A四元泵、G1329自动进样器、G1316A柱温箱、G1314B紫外检测器和一套Agilent 1200 CHEMSTATION 软件)。2、药品；醋酸奥曲肽（由中国药品生物制品检定所提供，批号为140730-200601）；胸腺肽1 （由中国药品生物制品检定所提供，批号为140655-200301）；生长抑素（由中国药品生物制品检定所提供，批号为140656-200301）；醋酸奥曲肽原料（P20070701、
6、P20070702、P20070703）由苏州天马医药集团天吉生物制药有限公司提供。3、试剂：乙腈（色谱纯，德国默克公司），三氟乙酸（色谱纯，德国默克公司），水（超纯水）。二、方法与结果1、色谱条件 用凝胶色谱柱（TSK GEL 2000SWXL 7.8mm300mm,5m）；以三氟乙酸-乙腈水（0.032：20：80）为流动相；流速为0.7ml/min；检测波长为210nm；进样量为20l。2、系统适用性试验 用凝胶色谱柱（TSK GEL 2000SWXL 7.8mm300mm,5m）；以三氟乙酸-乙腈水（0.032：20：80）为流动相；胸腺肽1（分子量3108）、生长抑素（分子量1638
7、）、奥曲肽（分子量1019），加水制成每1ml中含 0.1mg的溶液作为分子量标准溶液。将上述三种溶液等量混合，作为分子量标准溶液混样，取分子量标准溶液混样溶液20l注入液相色谱仪，记录色谱图，计算理论塔板数和分离度，结果见表1。表1 系统适应性试验结果名称保留时间分离度理论塔板数胸腺肽113.8199714生长抑素15.3433.1723539奥曲肽16.1051.9227039图1 系统适应性HPLC图谱结论：在上述色谱条件下，理论塔板数符合要求，分离度良好，符合系统适应性试验要求，色谱峰形好，说明该流动相适合本品聚合物的测定。3、标准曲线的制备 分别取胸腺肽1（分子量3108）、生长抑素
8、（分子量1638）、奥曲肽（分子量1019）适量，加水制成每1ml中含 0.1mg的溶液作为分子量标准溶液。分别取分子量标准溶液20l注入色谱仪，记录色谱图，重复进样6次，以各峰保留时间的平均值为横坐标，分子量对数为纵坐标作标准曲线，进行线性回归，求得回归方程为LogM=-0.2047t+6.3194（M为分子量，t为峰的保留时间），r=0.995。结果表明：在上述色谱条件下，分子量标准溶液重复进样保留时间相对偏差均小于2.0，其标准曲线线性关系良好。4、溶液稳定性 取P20070701批样品约12.5mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；分别于0、0
9、.5、1、1.5、2、2.5、3、4、8小时，取供试品溶液20l注入液相色谱仪，同时做1对照溶液，按自身对照法以峰面积计算杂质含量，即得。聚合物检查结果一致，表明，以水做溶剂，样品溶液稳定性好，故选水为溶剂溶解样品。5、线性 精密称取醋酸奥曲肽对照品约12.5mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，分别取0.1ml、0.2ml、0.5ml、1ml、2ml、4ml置100ml量瓶中，加水至刻度，混匀，得到一系列溶液，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以峰面积为纵坐标，浓度为横坐标，求得回归方程为。A = 64.343C + 2.9704（A为峰面积，C为溶液浓度，单位为ug
10、/ml），r=0.99996。结果表明，醋酸奥曲肽在浓度为0.125ug/ml到5.00ug/ml的范围内，峰面积与浓度的线性关系良好。6、检测限 当信噪比约为3:1时即为检测限，结果表明醋酸奥曲肽聚合物测定的检测限0.087 ug/ml。7、样品聚合物测定 取本品约12.5mg，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取1ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取供试品溶液和对照溶液各20l注入液相色谱仪，按上述条件进行测定，供试品溶液的色谱图主峰之前如有杂质峰，按自身对照法以峰面积计算杂质含量，结果见表2。表2 样品聚合物
11、检查结果批号聚合物（）P200707010.20%P200707020.18%P200707030.21%图2 样品聚合物测定HPLC图三、讨论1、凝胶色谱法又叫分子排阻色谱法，分子量大的物质先被洗脱，分子量小的物质后出峰，奥曲肽主峰之前的峰的分子量大于奥曲肽的分子量，故都作为奥曲肽的聚合物计算。2、所建立的HPLC法准确、快速、简捷。醋酸奥曲肽在浓度为0.125ug/ml到5.00ug/ml的范围内，峰面积与浓度的线性关系良好。醋酸奥曲肽聚合物测定时醋酸奥曲肽的检测限0.087 ug/ml。可有效测定奥曲肽中的聚合物。参考文献1 WANG Ya-dong(王亚东),ZHU Jia-yi(蛛家
12、沂),SHEN Hong-zhang(沈洪章),et al. Treatment effect of bleeding esophageal varices by somatostatian(生长抑素治疗食道静脉曲张破裂大出血效果观察). Chin J Dig Endosc(中华消化内镜杂志),1998,15(4):235(in Chinese)2 YANG Ning(杨宁)，XU Hong-bo(许红波)，Clinical study of somatostatian analog octreotide(生长抑制类似物奥曲肽的临床)，New Drugs Clin Rem(新药与临床),1997,13(1):31(in Chinese)3 WU Qiong-zhu(吴琼珠)，DAI Yong-jian(戴永健),LIU Wei-wei(刘卫卫),QIAO Shan-lei(乔善磊),Determination of the Content of Octreotide and its Related substances by HPLC(HPLC法测定奥曲肽的含量及其有关物质). Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis(药物分析杂志).2002,22(4):301(in Chinese)
HPLC法测定醋酸奥曲肽的聚合物(精品)
