巨噬细胞的吞噬作用

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1、巨噬细胞的吞噬作用巨噬细胞的吞噬作用巨噬细胞体内吞噬鸡红细胞实验巨噬细胞体内吞噬鸡红细胞实验前言：病原微生物一旦突破体表防御屏障侵入体内，首先接触的是遍布全身的大、小吞噬细胞，他们分布于血液和组织中，并可以在某些趋化因子的作用下被吸引至微生物侵入部位。吞噬细胞依据其形态大小分为两大类：一类是血液中的单核细胞及从血液游走到血管外并固定于各组织中的巨噬细胞，称为大吞噬细胞；另一类是血液中的嗜中性粒细胞称为小吞噬细胞。它们是机体非特异性免疫的重要因素。今我设计的实验是检测巨噬细胞的吞噬功能，淀粉可以在实验动物腹腔内引起非感染性炎症渗出，在腹腔局部聚集较多巨噬细胞；将鸡红细胞注入实验动物腹腔内，可检测

2、腹腔内的巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬功能。【实验目的】熟悉巨噬细胞吞噬功能的体外测定功能。【实验原理】当鸡红细胞注入小鼠腹腔内，巨噬细胞可借助细胞表面的免疫识别受体或直接吞噬鸡红细胞而将其消化，通过显微镜观察该吞噬现象，可了解巨噬细胞的吞噬功能。【实验材料及试剂配制】（1）体重 25g 左右的小鼠。（2）5ml、1ml 无菌注射器，6 号、9 号针头，10ml 离心管，清洁载玻片，烧杯，解剖剪，眼科镊，湿盒，解剖板，图钉，37水浴箱。（3）4%淀粉肉汤：称面粉 3 克、可溶性淀粉 5 克、加营养肉汤至 100ml，混匀，先微火加热，不断搅拌使成糊状，再高压灭菌。临用时，与无菌营养肉汤等量混合。（4

3、）D-Hanks 液：NaCl 8.0g、KCl 0.4g、Na2HPO4H2O 0.12g、KH2PO4 0.06g、葡萄糖 1.0g、1%酚红 2.0ml。将上述成分溶于 1000ml 双蒸水，分装于 500 毫升盐水瓶，8 磅 15min灭菌，4冰箱保存，临用时用3.5%NaHCO3调pH至7.27.4.（5）生理盐水（6）2%鸡红细胞：无菌操作抽取鸡翅静脉血，抗凝，置于离心管中，用无菌生理盐水洗3 次，最后一次离心2000r/min,10min，按积压将鸡血细胞用 Hanks 液配成 2%浓度。（7）瑞氏染色液：称取瑞氏染料 0.1g、并量取甲醇 60ml。先将染料放于乳钵中研细，加入

4、少量甲醇再研，待染料全部溶解，倒入棕色瓶内，并用余下的甲醇将乳钵中染料逐一洗入棕色瓶内。加入 3ml 中性甘油，可防止染色时甲醇蒸发过快，同时使细胞染色较清晰。染色液保存时间越长，染色效果就越好。（8）pH6.46.8 磷酸盐缓冲液 20ml1%Na2HPO4，30ml1%KH2PO4，加蒸馏水至 1000ml，混匀。【实验方法】（1）实验前三天给小鼠腹腔内注射 1ml4%淀粉肉汤。（2）实验当天给小鼠腹腔内注射 Hanks 液 34ml，轻揉腹部，让小鼠活动 10min。（3）眼球放血后颈椎脱臼处死小鼠，并将小鼠钉在解剖班上。（4）碘酒、酒精消毒腹部皮肤，左手持镊提起腹中部，用解剖剪在皮肤上

5、剪 5mm 长的小口，将皮肤朝头尾部方向剥开，暴露腹壁。（5）用镊子提起腹壁，避开血管剪一小口，用 5ml 注射器或毛细吸管吸取腹腔液滴于载片上，每片23 滴，并滴加等量的 2%鸡红细胞悬液，充分混匀。（6）将玻片置于湿盒内，放 37水浴箱内 3545min，期间轻晃动玻片 2 次。（7）取出后，将载玻片在生理盐水中漂洗 2 次，洗去未吸附在玻片上的细胞。待其自然干燥。（8）用瑞氏染色液染色1）于玻片上滴加瑞氏染色液数滴覆盖盖涂片，染色1min。2）滴加相当于染色液 1.5 倍量的 pH6.8 磷酸盐缓冲液于涂片上，轻摇玻片，混匀染色液，染 810min。3）流水冲洗，印干后用油镜观察结果【实

6、验结果】因巨噬细胞为贴壁生长细胞，能黏附在清洁载玻片上，故经瑞氏染色后，镜下可见巨噬细胞呈椭圆形、肾形或马蹄形，其核较大，染色质比较疏松，染成淡紫蓝色，胞质染成浅灰蓝色，如有吞噬作用发生，可见巨噬细胞质中有一个以上的有核鸡红细胞。如果吞噬的鸡红细胞较多，则巨噬细胞核被挤到一侧，其形态不典型。随机计数 100 个巨噬细胞，分别计数吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数和被吞噬的鸡红细胞总数。吞噬百分率=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/100 个巨噬细胞*100%吞噬指数=100 个吞噬细胞中所吞噬的鸡红细胞数/100 个巨噬细胞*100%此外，在计数时，应同时注意鸡 RBC 被消化的程度，分四级：级 未消化胞质浅红

7、色或浅黄绿色、胞核浅紫红色。级 轻度消化胞质浅黄绿色；胞核固缩，染成紫蓝色。级 重度消化胞质淡染，胞核成浅灰黄色。级 完全消化巨噬细胞内只见形状似红细胞大小的空泡，边缘整齐，胞核隐约可见。吞噬百分率和吞噬指数增高，表明机体大吞噬细胞的吞噬功能强，反之则吞噬能力弱。【注意事项】（1）所有器材要干净（2）越接近涂片末梢细胞越多，估计数时应取片子的前、中、后三段计数，以提高准确性。（3）凡需要瑞氏染色的涂片必须在空气中自然干燥后再染色，避免加热干燥。否则细胞因受热脱水而皱缩，影响吞噬现象的观察。（4）各实验室要根据自己的条件建立正常参考值。【参考文献】.医学免疫学实验 主编 胡四海 曾铁兵科学出版社.医学免疫学实验技术 主编 柳忠辉（吉林大学基础医学院）吴雄文（华中科技大学同济医学院）人民卫生出版社