免疫组化步骤

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1、免疫组化步骤1. 石蜡切片（防脱片处理）2烤片：65口，30min（切片带有温度进行脱蜡可加速脱蜡的过程）3. 二甲苯脱蜡： 20minX3 RT4. 无水乙醇：lOminXl RT5. 水化：100%，95%, 80%，70%乙醇 5min6. dH2O： 5minXl7. PBST 洗： 5minX38抗原修复：0.01M柠檬酸盐缓冲液（PH 6.0） 1L置高压锅煮沸后，将切片架置入其 中全部浸没，控制时间 2min 后，将缓冲液自然冷却至室温后取出片子。9. dH2O 洗： 0.5minX310. PBST 洗： 5minX311. 阻断：加内源性过氧化物酶阻断剂50ul/片，RT l

2、h12. PBST 洗 5minX313. 封闭：加动物非免疫血清 RT 2h14. 一抗：4过夜（例如 CD31 1:100）15. PBST 洗： 5minX316. 二抗（生物素标记）： 20min17. PBST 洗： 5minX318. 三抗：链霉菌抗生素蛋白一过氧化物酶 RT 20min19. PBST 洗： 5minX320. DAB显色：50ul/片显色时间2min21. 水洗 10min22苏木素复染：50ul/片25s（若复染过度，可用0.1%盐酸乙醇（40ul:40ml） 23.水冲洗 10min24脱水：70%、80%、90%、95%、100% 5min/次25. 二甲苯脱水透明： 5minX226. 中性树胶封片27. 观察结果，照相PBST（1ml） 配方：PBS 1mlTween-20 1 ： 10005%BSA 0.05g抗原修复液（柠檬酸钠缓冲液）（0.01mol/l）配方：柠檬酸三钠 3g柠檬酸 0.4g调 PH 6.0定容至 1L