B细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22抗原表达检测及临床意义

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1、B 细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22抗原表达检测及临床意义作者：张东生 丁娅 李苏 黄慧强 夏忠军 李志铭 林旭滨 姜文【摘要】 【目的】 检测CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织中的表达，初步探讨CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织的表达和临床病理特征的关系。【方法】 采用免疫组化方法检测B细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22抗原的表达，分析肿瘤组织CD22抗原表达和临床病理特征等的关系。【结果】 CD22抗原在B细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织阳性表达主要见于细胞浆和细胞膜。全组21例，阳性率100.00%(21/21)，强阳性(+)率14.29%(3/21)，中等阳性(+)率33.33%(7/

2、21)，弱阳性率(+)52.38%(11/21)。CD22表达与病理亚型、性别、年龄以及其它临床病理特征等无明显相关性。【结论】 CD22抗原在B细胞非霍奇金淋巴瘤中广泛表达，可以采用免疫组化的方法检测出，该方法简单易行，有一定临床应用前景;B细胞非霍奇金淋巴瘤组织CD22表达和临床病理特征的关系需进一步研究。 【关键词】 非霍奇金淋巴瘤; CD22抗原; 免疫组化Abstract： 【Objective】 To examine the CD22 antigen expression in B cell non-Hodgkins lymphoma (NHL) tissues and inves

3、tigate its relationship with clinicopathological characteristics. 【Methods】 CD22 antigen expression in B cell NHL tissues was detected with immunohistochemistry staining. The correlation between CD22 expression and clinicopathological characteristics was analyzed. 【Results】 CD22 antigen was detected

4、 in B cell NHL tissue section by immunohistochemistry staining. The positive staining particles were located in cytoplasma and/or membrane. CD22 expression was showed in the total 21 cases (positive rate 100.00%). Strong expression in 3 cases (14.29%)， moderate expression in 7 cases (33.33%)， and we

5、ak expression was detected in 11 cases (52.38%). CD22 expression in B cell NHL tissue was not correlated with pathologic subtypes， gender， age， or other clinicopathological characteristics. 【Conclusion】 CD22 antigen is generally expressed in B cell NHL and easily detected by immunohistochemistry sta

6、ining， and the detection method can be used in clinical practice. CD22 expression in B cell NHL tissue and its relationship with clinicopathological characteristics needs further study.抗原分子是一个相对分子质量为135 k的跨膜蛋白，为B淋巴细胞限制性抗原。在B细胞和前B细胞，CD22抗原仅存在于胞浆中，分化至成熟B细胞时，该抗原表达在细胞膜上，激活时表达量增加。B细胞分化至终末阶段浆细胞时，CD22抗原消失。

7、CD22为粘附分子，可以放大B细胞激活信号。CD22广泛表达于正常B细胞和B细胞淋巴瘤细胞1-2。CD22作为B细胞非霍奇金淋巴瘤治疗的新靶点，是目前研究的热点和焦点，已取得较大的进展1-7。目前国内外均有针对CD22靶点的新药在进行临床试验，国外的/期研究结果以及国内本课题组完成的期临床研究结果，均令人较为鼓舞，有进一步研究的前景1-6。因此，找到简单、临床使用方便的检测CD22抗原的方法，不仅具有理论意义，更具有实际的临床应用前景。目前检测CD22表达抗原表达常用流式细胞仪检测的方法8-9，但流式细胞仪只能检测新鲜肿瘤组织或细胞株中CD22抗原表达，临床应用较为不便。我们在国内首次采用免疫

8、组化的方法检测21例非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22抗原表达，效果确实，方法简便可行，并初步探讨CD22表达水平和临床病例特征的关系。1 材料和方法1.1 实验标本21例B细胞非霍奇金淋巴瘤患者肿瘤组织石蜡块中，12例取自中山大学肿瘤防治中心病理科，均为存档石蜡组织块，9例取自外院病理科，由患者借出。将组织蜡块切成4 m厚的切片粘在涂胶玻片上备用。1.2 患者资料患者为自2007年4月至2008年11月来中山大学肿瘤医院就诊，共21例B细胞非霍奇金淋巴瘤患者。21例患者中，男10例，女11例，年龄范围24 67岁，中位年龄52岁，体力情况0 2级。21例患者的病理亚型，滤泡性淋巴瘤8例，滤泡转弥

9、漫2例，弥漫大B细胞淋巴瘤8例，小淋巴细胞淋巴瘤/慢性淋巴细胞白细胞(SLL/CLL)2例，伯基特淋巴瘤1例;19例为复治患者，2例为初治患者，均为滤泡性淋巴瘤;复治患者既往使用过CD20单抗治疗，或一种或多种方案化疗，部分患者接受过放射治疗。8例患者既往使用过美罗华或国产CD20单抗，1例移植后复发，1例既往使用过Zevalin。1.3 实验主要试剂和步骤抗CD22抗体购自武汉博士德生物工程有限公司(进口分装)，为1只0.2 mL 兔抗人IgG多抗。S-P超广谱免疫组化试剂盒(含阻断血清、二抗与三抗)及DAB购自迈新公司。免疫组化步骤按照迈新公司推荐的S-P法免疫组化实验步骤进行。切片放入二

10、甲苯梯度稀释液中脱蜡，无水乙醇梯度至水，新鲜配置3%过氧化氢，室温10 min灭活内源性过氧化物酶，PBS微波修复抗原，滴加血清封闭以减少非特异性染色，滴加1：100稀释的CD22兔抗人多抗，4 反应过夜，滴加生物素化二抗IgG 37 反应30 min，DAB显色，苏木素轻度复染30 s左右，盐酸分化，二甲苯透明，用中性树胶封片。1.4 免疫组化结果判断对照HE切片，确定肿瘤细胞区域。以肿瘤细胞胞浆或胞膜见到棕黄色或棕褐色颗粒染色为阳性细胞，连续数10个高倍镜视野中的肿瘤细胞数，10个视野中阳性肿瘤细胞数之和除以10个视野中肿瘤细胞数之和即为肿瘤细胞染色的百分比，根据肿瘤细胞染色的百分比划分为

11、不同的等级：(-)或阴性为阳性细胞0;(+)或弱阳性为阳性细胞比例25%;(+)或中等阳性为阳性细胞比例达 > 25% < 50%;(+)或强阳性为阳性细胞比例50%。(-)和(+)为低表达，(+)和(+)为高表达。1.6 统计学方法采用SPSS 16.0统计软件进行统计分析，频数资料采用Fisher精确概率法以及非参数的Kruskal-Wallis H检验，以P < 0.05定义为有统计学意义。2 结 果2.1 CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织中的表达CD22抗原可以采用免疫组化方法在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织中检测出，阳性表达的棕黄色或棕褐色颗粒主要见于细胞浆和细胞膜。全

12、组21例，阴性0例，弱阳性(+)11例，中等阳性(+) 7例，强阳性(+)3例，高表达10例，低表达11例，阳性率100.00%(21/21)，中等阳性率33.33%(7/21)，强阳性率14.29%(3/21)。CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织中的弱阳性、中等阳性、强阳性以及阴性表达分别见图1A D。2.2 CD22抗原在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织中的表达和临床病理特征的关系全组8例弥漫大B细胞淋巴瘤患者，肿瘤组织中CD22抗原呈弱阳性表达2例，中等阳性表达4例，强阳性表达2例;8例滤泡性淋巴瘤患者，弱阳性表达7例，中等阳性表达1例;2例滤泡转弥漫的非霍奇金淋巴瘤患者，1例为中等阳性的表达，

13、1例为强阳性表达，2例慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤患者，肿瘤组织CD22表达均为弱阳性。1例伯基特淋巴瘤患者，肿瘤组织CD22抗原呈中等阳性表达。非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22表达与病理亚型、性别、年龄以及其它临床病理特征无明显相关性(表1)。3 讨 论CD22是B细胞非霍奇金淋巴瘤细胞表面重要的标记性抗原之一，针对CD22分子靶点的研究，越来越深入。目前已有研究出针对B细胞非霍奇金淋巴瘤CD22抗原分子靶点药物：国外的人缘化单抗Epratuzumab(依帕珠单抗)，国内的人鼠嵌合单克隆抗体SM03。前者已完成/期临床研究，并正在进行期临床研究，后者在中山大学肿瘤防治中心本课题组已完成

14、期临床研究(论文待发表)。可以预见CD22抗体在不久的将来，很有可能广泛用于临床治疗B细胞非霍奇金淋巴瘤。因此如何找到临床实用方便检查和筛选CD22靶点的方法就摆在我们面前。CD22抗原的检测方法常用流式细胞仪检测8-9，但流式细胞只能检测新鲜肿瘤组织中或细胞株中的CD22抗原表达，对于在石蜡组织，流式细胞仪不能检测出。用免疫组化的方法检测石蜡组织中CD22的表达，检测方法简单、实用，临床使用方便10-11。我们采用免疫组化的方法，检测了21例非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织患者肿瘤石蜡组织中CD22的表达，结果表明：CD22抗原可以采用免疫组化方法在非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织中检测出，阳性表达的棕黄色或棕

15、褐色颗粒主要定位于细胞浆和细胞膜。全组21例，阴性0例，弱阳性(+)11例，中等阳性(+)7例，强阳性(+)3例，高表达10例，低表达11例，阳性率100.00%(21/21)，中等阳性率33.33%(7/21)，强阳性率14.29%(3/21);8例弥漫大B细胞淋巴瘤患者，肿瘤组织中CD22抗原呈弱阳性表达2例，中等阳性表达4例，强阳性表达2例;8例滤泡性淋巴瘤患者，弱阳性表达7例，中等阳性表达1例;2例滤泡转弥漫的非霍奇金淋巴瘤患者，1例为中等阳性的表达，1例为强阳性表达，2例慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤患者，肿瘤组织CD22表达均为弱阳性。1例伯基特淋巴瘤患者，肿瘤组织CD22抗

16、原呈中等阳性表达。文献报道B细胞非霍奇金淋巴瘤CD22抗原表达率非常高，约80%左右，也有100%表达的报道1-2，11。CD22肿瘤组织抗原表达可以采用免疫组化方法检测出。采用免疫组化的方法检测B细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组中CD22抗原的表达，国内未见报道，国外报道较少。我们在国内首次采用免疫组化的方法，检测到B细胞非霍奇金淋巴瘤肿瘤组织CD22抗原的表达，效果确实，方法简便可行。我们研究表明，CD22阳性表达率100%，表达率高，可能是我们采用的判断标准较为较宽。我们的研究判断标准中，定义10个视野中未见到CD22染色阳性的肿瘤细胞才认为是阴性表达。CD22抗原表达和临床和病理特征的关系，国

17、外很少有报道。由于我们研究的病例数较少，没有观察到CD22表达和临床病理特征的相关性，但我们也注意到，弥漫大B细胞淋巴瘤患者肿瘤组织CD22抗原表达较强，滤泡型淋巴瘤肿瘤组织中CD22抗原表达较弱，CD22抗原表达和临床和病理特征的关系有待进一步研究。【参考文献】 Leonard JP， Coleman M， Ketas JC， et al. Epratuzumab， a humanized anti-CD22 antibody， in aggressive non-Hodgkins lymphoma： phase / clinical trial resultsJ. Clin Cancer

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19、ombination with cyclophosphamide， doxorubicin， vincristine and prednisone chemotherapy (ER-CHOP) in patients with previously untreated diffuse large B-cell lymphoma J. J Clin Oncol， 2008， (May 20 suppl; abstr 8500).Strauss SJ， Morschhauser F， Rech J， et al. Multicenter phase II trial of immunotherap

20、y with the humanized anti-CD22 antibody， epratuzumab， in combination with rituximab， in refractory or recurrent non-Hodgkins lymphoma J. J Clin Oncol， 2006， 24(24)： 3880-3886.Leonard JP， Goldenberg DM. Preclinical and clinical evaluation of epratuzumab (anti-CD22 IgG) in B-cell malignancies J. Oncog

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