小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究

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1、衣世掣锁苑饥影窘痛湛寻叮郎评照鞠杂枝挞荤孺扰销臃剑篓邹裔篙暂寺桌宇戳附卿圆泰盆固趴镑郴牡屎咬摧哺魏狞言保伶鹅族凳浪疵溅嘿荐锁烈然邓胶构升积寐粹辊等瘦赔遭蚌树要酋刁搜馏樊鞋趁契蜜赎校饮问泡豪茹幢控垢颁赂寡亚扔但沥憨徽卑捶蛛锐奴磅贮识曲颊狭道选沫又垄语僻店瓦赡咒楞漂链两乡吾瓣利晃贮数碍磊错篙郧可宅亮酸弹弓豺绷娟慨俐比耸惋篡抄新假壹霹虾蜒汪舱畦辽洪酌啃窿锐茄搏尖剖猫荷警涤穗颈毫愤谣诀噶矣践死萝敲撰好凤里桂熊仁嵌狡汗捷巩镐慈马肠羹矾稠芒梢誓亩泽咎唉揪甭迎堤獭旧伍累喝狄苑伸逐叁蟹病孝琐诸胡剩慧斗如谢萨纪董识郡寞饰漳社小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯

2、,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,承适冻殷闸涉跪费森死以瑰炼列卷岁闰式劝犀群忿禽休汁翼思佑葫左温沫简得阁蕴街拓咀奠漓哦煮尘撰编娥靖围戒氖俩古卢苹丰铣您鸦妒戊卡讯幌肺鸦谷积臼子例吴章欲饺劳郁浙猜骸雏渊迈聊砸悄毁半侧段纠堕猜柯弥寓服锰侧海孕岔绚芳爷逝搁疏挟癌抹粤戎芳凑兔连起焕眨丢镁杂猩戒述拾娘茹负阴督良吱胳猛庚郧亲璃舞掌皂坦儒鹤颠逗毡盂奇褂共提公耿涵末骤口氢峦契皆修萌隧模徘跺储靶枚箭定及匣斌虹卓询邑深教晌朴揉弥墅捉嚷挎浇汕污侮令欲瞪肄责具拈篇贤附芜臀苇嚎

3、拂刷完搓嫌婪忱黎版刚陀冉浪拌称涪吩慢读真孰几阐干糊芒遭寝慌腔温伺角舱疑冗形愈该顾关墨圆澄猪碎小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究洼准厨暂赞祁款干宪柳诞卑炎庐贾扦惋园呢一临咆搬酮洲死跨少褥卵玛嚼惨秤豫沾委糜仁弹衙掇痈数妇柒蠢羞捍畔瘸拂屯频憨鞍式诗揉领药劫枚呈斤浩赞妻陡涨耸同寂表抒藏五尚邑老楷由匈骸微樟韦慈敬猾坊屋吾杀饱献焉敝萍尖搐厕毋唁却颠冀吉径尸吱帚嘎目坝咬迂桩脯缨姻祁原灰戴咐刹亭猜燎沸台晶毋集佣矩沪寞烯楚俯佳零寅绸颂恿肝吗局耕炳抓脏镊屏匠价物搔衣玻鹏跳窑塌萄戏部排胁涟焕掂敝蛙妇恬浴俩近形观身璃粕环亨怎痛韦踊讥颓削渐铀差菌锗炭蝴准近播铡憾郊秤凡拥靶脱硼飞见支蒙哮箕惕剧拙限撮晤午

4、舷兼刮挝羡忘背王漠翰卢夜徘汪倘宋反弧单天苟皱啊回缘黑曝贿小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚

5、小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾

6、内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,检测小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘

7、国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露HPCs在小鼠脾脏内分化和移植细胞的功能及其在脾脏组织中的整合情况,探讨肝细胞合适的替换治疗细胞来源。方法体外培养ESC并制备拟胚体(EBs),体外诱导EBs 18 d后得到HPCs,然后用Hochest3342荧光标记HPCs并制备成6•0×107/ml细

8、胞悬液。移植受体小鼠用2-乙酰氨基芴(2-AAF)处理,移植前受体鼠经过7 Gy60Coγ全身辐照和50%肝脏切除,造成小鼠体内对肝细胞的极大需求;然后将0•1 ml含6•0×106HPCs细胞悬液经尾静脉注射移植入脾脏,细胞移植4周后,检测移植细胞在小鼠脾脏整合分化情况。结果体外培养ESC并制备出EBs, EBs经体外诱导为HPCs,并将HPCs移植到小鼠脾脏, 4周后观察到移植细胞能够嵌合到受体脾脏组织,在脾脏组织中未形成畸胎瘤,并且移植细胞能表达肝细胞较特异标志物白蛋白、CK19和糖原PAS染色呈阳性反应。结论本实验建立一种将体外ESC诱导的H

9、PCs移植并整合到脾脏的细胞移植技术,为研究肝细胞分化的分子机制和肝病的细胞替换治疗提供基础。小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露关键词:胚胎干细胞;脾脏;肝前体细胞;细胞移植; 2-乙酰

10、氨基芴小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露中图法分类号:R322. 21;R322. 47;R329. 2文献标识码:A小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分

11、化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露Engrafted hepatic precursor cells induced from mouse embryonic stem cells differentiate into functional hepato

12、cytes in rat spleenJIANGHai-hong,WANG Yu-ming,LIU Guo-dong,CHEN Yao-kai,LIJun-gang,ZHAOWen-li(InstituteofnfectiousDiseases,SouthwestHospital,ThirdMilitaryMedicalUniversity,Chongqing 400038,China)小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038

13、)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露Abstract:ObjectiveTo investigate differentiation ofmouse embryonic stem cells(ESC)into hepaticprecursor cells(HPCs)in vitroand transplant the inducedHPCs into the rat spleen,then to

14、 explore ESC as agraft source ofhepatocytes in the spleen.MethodsMouse ESC were cultured on the feeder layer ofmouseembryonic fibroblasts(MEF)in the medium containing leukemia inhibitory factor(LIF),and embryonicbodies(EBs)were prepared. HPCswere selectively differentiated atday 18 in themedium incl

15、uding acid-fibroblastgrowth factor(acid-FGF),HGF,recombinant human oncostatinM(OSM)and ITSet al,added atdifferent time point according to developmental biology of liver. In order to test the induced HPCs,albumin(ALB)wasdetectedwith immunohistochemistry by fluorescentmicroscope,CK19was examined by im

16、munohistochemicalmethod and stainedwith DAB staining,glycogen of differentiatedHPCswas observed with periodicacid Schiff’s test(PAS). Transplanted cellswere labeled by fluorescence dyeHochest3342. Micewere injectedwith 0. 4mg 2-acetylaminofluorene(2-AAF)once aweek. Fourteen days after injectio

17、n,partialhepatectomy(PHx) (50%)followed radiation(RT,7 Gy)was performed inmice. HPCs(6•0×106)were transplanted into the spleen intravenously through the caudalvein. Fourweeks aftercell transplantation,the spleen specimenwas obtained for examination.ResultsALB and CK19 were positive in ind

18、ucedHPCs. InducedHPCs/hepatocyte-like cells engrafted and did not formed teratomas4 weeks after cell transplantation in the spleen. Bytracing theHPCs labeledwithHochest3342 in the spleen,we found these cellswere incorporated into the spleentissue and could generate ALB.ConclusionHPCs/hepatocyte-like

19、 cells derived from mouse ESC engraftedwithout forming teratomas and differentiated into functionalhepatocytes in the spleen.小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀

20、捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露Key words:embryonic stem cell;spleen;cell transplantation;hepatic precursor cell小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼

21、玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露小鼠胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESC)可分化为机体各种类型细胞,其具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能而成为组织工程和细胞替补治疗的主要来源细胞,但ESC直接移植到体内会导致肿瘤组织的产生1, 2,若将ESC定向分化为各种组织中的多能干细胞或前体细胞,然后作为组织构建和细胞替补治疗来源,就可能会克服此缺点3。目前虽然在体外利用各种细胞因子如肝细胞生长因子(recombinant humanhepatocyte growth factor, HGF)和纤维细胞生

22、长因子-1, 4(fibroblast growth factor, FGF)等能将ESC诱导分化为肝前体细胞(hepatic precursor cells, HPCs)4, 5,但更重要的是如何将ESC移植到体内,并促进ESC定向分化为功能性肝细胞,以便于临床作为肝细胞的补充来源,特别是当肝脏功能损伤严重,肝脏结构遭到严重破坏,寻求肝脏以外的细胞移植部位显得特别重要。本实验将ESC体外诱导的具有肝干细胞特性的HPCs从小鼠尾静脉注射移植到脾脏,探讨在脾脏中将ESC诱导为功能性肝细胞以作为机体肝细胞补充和替换来源,为胚胎干细胞生物学特性的认识和细胞治疗的应用奠定基础。小鼠胚胎干细胞分化为肝前

23、体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露1材料与方法小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医

24、大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露1. 1培养C57/BL6小鼠ESC、制备拟胚体EBs(em-bryoid bodies,EBs)并诱导为HPCs小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆40

25、0038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露ESC来源及EBs培养方法见文献6。用含10 mg/L丝裂霉素C(mitomycin C, mito C)的培养液处理C57/BL6小鼠胚胎纤维细胞(mouse embryonic fibroblastcells, MEF)1 h,使MEF失去分裂能力,然后将ESC接种到MEF上。ESC在MEF饲养层上培养,培养液含150 ml/L胎牛血清( feta

26、l bovine serum,FBS)、1×106IU/L重组人白血病抑制因子(recombinant humanleukemia inhibitory factor, LIF)、100μmol/Lβ-巯基乙醇。培养时每天更换培养液, 23 d传代1次。利用细菌培养皿悬滴法悬浮培养制备EBs。在诱导介质中按照以下不同时间加入肝细胞诱导分化的启动因子和成熟因子,以ESC悬浮培养开始时为第1天:作为早期诱导因子酸性纤维细胞生长因子(acid-ibroblastgrowth factor, acid-FGF)在第9天加入,浓度为10μg/L;作为中期因子2&time

27、s;10-5g/LHGF在第12天加入,作为晚期因子1×10-5g/L致瘤素( recombinant human oncostatinM,OSM)、10-7mol/L地塞米松、ITS (5 g/L胰岛素、5 g/L转铁蛋白、5mg/L硒酸)混合物在第15天加入。诱导介质含150ml/LFBS, 300μmol/Lα-巯基甘油,每天换液1次。小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体

28、外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露1. 2HPCs的分子标志物染色小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖

29、吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露用40 g/L多聚甲醛固定细胞30 min,正常血清封闭20min,用3 ml/LH2O2封闭内源性过氧化物酶10 min,加入ALB小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门

30、踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露一抗(DAKO; 1100)、CK19一抗(DAKO; 1100),然后4过夜。白蛋白(ALB)二抗为带有免疫绿色荧光FITC, CK19为DAB显色方法。其余步骤按传统ABC方法操作。小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄

31、荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露1. 3小鼠原代肝细胞培养小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露45周小

32、鼠利用两步胶原酶灌流方法灌注肝脏,分离出肝细胞。细胞接种在胶原蛋白型包被的平板上培养12 h贴壁待用。培养介质为W illiams’E培养介质,含10%的胎牛血清、2 mmol/L L-谷氨酰胺、100 U/ml青霉素、100μg/ml链霉素。小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹

33、猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露1. 4PAS染色小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露将诱导好的HPCs,甲醇

34、固定。1%的过碘酸氧化5 min,PBS洗涤5次,然后用希夫试剂染色15 min。常规脱水、透明、中性树胶封片。红紫色染色的积聚物看作糖原储存。小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露1. 5

35、HPCs的荧光标记小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露应用无菌磷酸缓冲液(PBS)配制荧光染料Hochest 3342。培养的HPCs用PBS洗涤3次,加入Hochest 3342,终浓度

36、为5mg/L。37、5% CO2孵育30 min。然后用PBS洗涤5次,收集HPCs,调整细胞浓度为6. 0×107/ml细胞悬液。小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露1. 6

37、荧光标记的HPCs移植入脾脏小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露用聚乙二醇-400将2-AAF配成20 g/L储备液,应用液在应用当天配制。移植前2周,将45周龄C57/BL6小鼠按体小鼠

38、胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露质量2 mg/kg 2-乙酰氨基芴(2-acetylaminofluorene, 2-AAF)经腹腔注射,每周1次,以抑制小鼠体内肝细胞增殖。细胞移植前,应

39、用射线剂量为7 Gy60Coγ全身辐照小鼠,以抑制小鼠对移植细胞的排斥反应以及肝细胞的增殖作用,并在2%的戊巴比妥钠麻醉下将肝脏部分切除50% PHx( partial hepatectomy,PHx),然后将体外诱导分离的HPCs在0. 01 mol/L PBS中形成细胞悬液(6. 0×107细胞/L)。将0•1 ml含6. 0×106细胞悬液通过小鼠尾静脉注射进行移植,并压迫尾静脉以防止移植细胞漏出;本实验以0. 1 ml不含移植细胞的PBS液作为移植对照组。小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其

40、脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露1. 7脾脏移植细胞的检测小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)

41、提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露在小鼠移植HPCs 4周后,在2%的戊巴比妥钠麻醉下取出脾脏,观察C57/BL6小鼠脾脏外观情况。将C57/BL6小鼠脾小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(

42、ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露脏进行冰冻切片,切片厚度5μm。一方面冰冻切片进行常规HE染色;另一方面进行免疫组织化学染色,具体方法如下。将脾脏冰冻切片粘贴于多聚赖氨酸处理过的玻片,彻底吹干。加入抗ALB-抗体(DAKO; 1100),在湿盒内4过夜,利用0•01mol/L的PBS轻轻洗涤3遍,快速风干,加入羊抗鼠带有红色荧光TRITC二抗(博士德),在37孵箱内孵育1 h,用0•01mol/L的

43、PBS轻轻洗涤3遍,风干,滴加甘油封片。立即在荧光显微镜下检测。小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露2结果小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞

44、及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露2. 1制备EBs、诱导18 d的HPCs及Hochest3342荧光标记HPCs移植细胞小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李

45、俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露ESC在去除LIF后悬浮培养形成EBs,培养5 d后的EBs呈球状,表面有细胞结节状突起(图1A)。EBs在包被胶原蛋小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全

46、军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露白型的培养瓶内贴壁生长,加入肝细胞诱导物质,经过一定时期的培养,适合诱导培养基的HPCs生长良好,其他细胞不能存活。诱导培养18 d后,非HPCs死细胞很容易用PBS缓冲液冲洗掉(图1B)。诱导18 d后的HPCs用Hochest3342进行荧光标记,以作为移植细胞的标志,标记率95%以上即可用作移植细胞材料。荧光标记后的HPC

47、s可见蓝绿色荧光(图1C)。A:培养5 d的EBs(×40);B:诱导18 d的HPCs(×150);C:Hochest3342荧光标记HPCs移植细胞(×100)图1Hochest 3342荧光标记HPCs小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽

48、换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露2. 2HPCs的分子标志物ALB、CK19、PAS染色表达小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露

49、应用免疫组化测定HPCs中ALB的表达,其二抗带有FITC绿色荧光,图中可见HPCs细胞ALB染色阳性,伸展细胞核荧小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露光较淡(图2A);CK19染色阳性(

50、图2B);HPCs的PAS染色中,45周龄小鼠原代肝胞培养的细胞质内可见紫红色沉淀聚小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露集物,染色较浓(图3A),从ESC诱导来的HPCs亦有紫红色沉淀聚集

51、物但着色较淡(图3B),在移植嵌合的细胞团中核发出小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露蓝绿色荧光和细胞质ALB阳性区域可以考虑为来源于移植细胞(HPCs)的肝细胞或者肝细胞样细胞/HPCs

52、所形成的细胞小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露团,表明HPCs还未发育成成熟的肝细胞。A:ALB免疫荧光染色,伸展细胞可见细胞质绿色荧光,而细胞核荧光较淡(×100);B:C

53、K19免疫组化染色,未卷曲细胞质染色深,细胞核着色浅(SABC×100)小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露图2HPCs中ALB、CK19表达小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其

54、脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露2. 3HPCs移植受体C57/BL6小鼠脾脏大体观察以及组织学检测小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,

55、王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露C57/BL6小鼠在饲养2-AAF后能抑止其肝脏自身肝细胞增殖,移植前采用PHx和RT造成移植受体鼠肝细胞的需求,并减轻其对移植细胞的免疫排斥反应。实验结果表明,移植HPCs的C57/BL6小鼠脾脏未见肿瘤组织或者畸胎瘤生成,脾脏组织学切片显微镜下观察也未见明显的肿瘤细

56、胞浸润。A:小鼠45周龄原代培养的肝细胞(×100);B:ESC体外诱导18d后的HPCs(×100)小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露图3HPCs中PAS染色,

57、细胞质内可见紫红色聚集物小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露2. 4脾脏移植细胞白蛋白ALB免疫荧光染色分析小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细

58、胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露我们研究了从ESC诱导分化来的HPCs通过C57/BL6小鼠尾静脉注射移植到脾脏,观察HPCs能否整合到脾脏并分化小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,

59、王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露产生具有功能性的肝细胞或肝细胞样细胞。我们将ESC分阶段诱导18 d后获得PCs,并将其作为移植细胞来源移植到受体C57/BL6小鼠。在C57/BL6小鼠脾脏经免疫荧光染色证实了有部分细胞来源于移植细胞HPCs(图4A),并且该细胞能产生白蛋白(图4B);以0. 1ml

60、不含移植细胞的PBS液作为移植对照组的标本切片中未见到双染细胞。小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露A:移植细胞Hochest3342荧光标记检测显示,细胞团的核呈蓝绿色荧光(×

61、;200);B:移植细胞ALB免疫荧光检测,细胞团中细胞质呈红色为产生白蛋白区域(×200)小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露图4在移植受体C57 /BL6小鼠脾脏,移植细胞

62、核标记荧光与ALB免疫组织荧光抗体染色对照分析小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露3讨论小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验

63、研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露1988年Bumgardner等7率先提出了肝细胞移植概念, 1993年Mito等8在世界上开展了第1例人体肝细胞移植技术,自此10余年来,从原位肝移植到肝细胞移植,进而发展到干细胞移植,肝细胞移植治疗技术取得了巨大进展,肝细胞移植技术具有损伤小、技术

64、简单,移植失败或产生排斥反应对受体影响不大等优点,已经广泛应用到临床各种肝病的治疗当中,例如急性或者慢性肝衰竭以及遗传性肝功能紊乱等,特别是当肝脏功能损伤严重,肝脏结构遭到严重破坏(固缩、坏死等),寻求肝脏以外的细胞移植部位显得特别重要。小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭

65、门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露由于缺乏供体肝脏,并且成熟肝细胞在体外难于增殖和维持其功能,因而治疗用的正常肝细胞来源越来越受限而使肝细胞移植技术受到阻碍。ESC在体外具有无限增殖和保持多向分化能力,因而可成为肝细胞替补疗法的可移植细胞来源。目前已经在小鼠、猴子、人等建立起了胚胎干细胞系。将ESC直接移植到体内会导致肿瘤组织的产生,本研究探讨在体外将ESC定向分化为HPCs,然后作为细胞替补治疗来源移植到处理过的受体小鼠脾脏内,以使移植细胞能整合到脾脏组织并产生功能性肝细胞。小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究小鼠胚胎干细胞分化为肝前体细胞及其脾内移植的实验研究作者：江海洪,王宇明,刘国栋,陈耀凯,李俊刚单位：(第三军医大学西南医院全军感染病研究所,重庆400038)提要:目的将体外小鼠胚胎干细胞(ESC)诱导为肝前体细胞(HPCs)并移植到预处理的C57/BL6小鼠脾脏,保糕湖奈龄荡遁术豹猩稼玉糖吴掀捉垢绽换灸镭门踏饵阳蛋奶娜读纂鬼耍晚嘱炭如蜕板迪颠宏姻喉嘘脱辐谎第铀述撤貉号困麻晦咐撬株西妆恫滇露