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1、,阴道微生态评价及其适宜技术,个旧市人民医院检验科 王锐,护理生殖道 关注微生态 最重要！,阴道 粘膜,阴道 正常 菌群,阴道 免疫 系统,阴道微生态概念,阴道防御系统,阴道微生态是阴道最重要的防御系统,阴道原籍菌(乳酸杆菌) 数量:8x107 cfu/ ml,5%,95%,正常育龄妇女阴道菌群由六种不同种类的 细菌以及念珠菌、支原体等组成。,正常阴道内有100种微生物存在。,这些微生物在阴道内形成生态平衡。,阴道菌群（阴道的微生态系统）,阴道微生态概念,CFU (Colony-Forming Units) 经培养所得菌簇形成单位的英文缩写。 细菌（可见）和真菌的测量单位。cfu:colony
2、- forming unit，菌落形成单位，将稀释后的一定量的菌液 通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分 散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌 落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同，主 要是对可见（即多数情况下形成菌落）的细菌数量进行 测量的单位。 意思就是每毫升菌液中含有多少单细胞！,阴道粘膜上皮细胞,纵切面示意图,（过路菌）,乳杆菌（原籍菌）,（条件致病菌）,是由不同种属 的宿主传来的,是其自身宿主个体对其 无免疫反应或低免疫反应， 是宿主个体固有的菌群,是由同种属不同 宿主个体传来的,阴道微生态概念,乳杆菌的作用机制,分解糖原，维持阴道酸性环境。 产生多种
3、抑菌物质：乙酸、16-18碳脂肪酸 H202、乳酸菌素、硬脂酸等。 竞争粘附：也称占位性保护。 竞争营养物质：大量定位于阴道中的乳杆菌处 于竞争优势状态，利用阴道上皮 细胞中的糖原，减少其他细菌的 碳源供应，通过竞争营养物质而 干扰一些厌氧菌如白色假丝酵母 菌（白念）的生长。,维持酸性环境,形成保护性菌膜,杀灭致病菌,乳酸杆菌,正常阴道菌群作用,阴道微生态平 衡的核心：,维持乳酸菌特别是产H2O2乳酸菌在阴道菌群中 的优势地位！,在阴道粘膜表面形成一层保护性菌膜， 防止入侵微生物在阴道粘膜上定植,乳酸菌产生的乳酸使阴道 分泌物维持酸性环境；,乳酸菌产生的H2O2可 杀灭入侵的致病菌。,阴道微生
4、态概念,乳杆菌 数量减少，生 化指标改变， 阴道微生 态破坏,阴道菌 群失调,各类 阴道炎,加重 阴道菌 群失调,各种 诱因,各类阴道炎的共性 -源于或伴有微生态破坏！,为什么要关注阴道微生态,菌群演变造成菌群结构改变，特点：,1、厌氧菌需氧菌、等条件致病菌大量增加,2、乳酸菌特别是产过氧化氢乳酸菌减少或消失,所有的阴道感染都源于或伴有阴道微生态改变,通过形态学、生物化学、 免疫学和分子生物学 等 方法所获得的阴道菌群 数量和功能方面的信息 分析阴道菌群结构的演替,条件致病 微生物菌 群数量与 功能变化,外来致病 微生物菌 群数量与 功能变化,机体反 应水平,如何评价阴道微生态？ -阴道微生态
5、评价的内涵,为什么要关注阴道微生态,形态学生物标志物 菌群数量与功能的变化,形态学评价-菌群数量的变化,：,形态学的方法,系统的方法,-阴道微生态评价内容,阴道微生态评价的内容,标本中细菌分布、排列的密集程度， 即每克或每毫升标本中的菌落数。 分级标准 (放大倍10100观察每视野平均细菌数) I级 （记为“+”） 1个9个 II级 （记为“+”） 10个99个 III级 （记为“+”） 100个以上 IV级 （记为“+ +”） 细菌聚集成团,(涂片中所见细菌种类) I级 （记为“+”） 能辨别13种细菌； II级 （记为“+”） 能辨别46种细菌； III级 （记为“+”） 能辨别710种细
6、菌； IV级 （记为+） 能辨别11种以上细菌。,(局部有无炎症 -菌群的致病性) 有无白细胞、脓细胞渗出， 有无吞噬现象等。,？,菌群的密集度,机体炎性反应,菌群的多样性,优势菌,阴道微生态形态学评价,存在的问题 形态学评价结果的可靠性 与实验室人员的技能和责任有关 不能了解阴道菌群中正常优势菌和有害菌的功能,阴道微生态评价的内容,A、正常优势菌功能生物学标志 B、致病微生物与条件致病微生 物增殖的生物学标志 C、机体反应性的生物学标志,了解菌群数量的变化,形态学评价,生物标志物,了解菌群 数量与功 能的变化,阴道微生态 系统评价,阴道微生态评价的内容,唾液酸苷酶,BV ,门冬酰胺蛋白酶,霉
7、菌性阴道炎,胱胺酰蛋白酶,滴虫性阴道炎,乳酸脱氢酶,急性化脓性阴道炎,透明质酸酶,BV、淋菌性阴道炎,白细胞酯酶,宫颈炎及各种阴道感染,短链脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加 单胺和多胺增加（胺试验阳性） 菌胞壁糖类（如阿拉伯醇糖）增加,阴道微生态评价的方法,生物化学方法,微生物学方法,分子生物学方法,免疫学方法,1 优势菌(乳酸菌)功能的生化标志物,2 致病与条件致病微生物 增殖的生化标志物,3 机体反应性的生化标志物,乳酸菌代谢包括：过氧化氢、 乳 酸 乳酸菌素,微生物 代谢产物,细菌、衣原体等病原体大量增殖白细胞 吞噬病原体过多病原体释放的水解酶和 毒素分解白细胞壁白细胞酯酶释放到胞 外分泌物
8、中白细胞酯酶活性增高。,过氧化氢浓度,SNA活性,LE活性,生态优势菌指标,致病菌指标,宿主反应指标,卫生部十年百项计划推广项目 江西省星火计划项目 浙江省医药卫生科技重点推广项目,了解阴道菌群结构 和功能的变化， 评价阴道的微生态状况,阴道微生态评价适宜技术,阴道微生态评价适宜技术- 细菌性阴道病联合测定技术介绍,标本采集要规范,各种病原体的性质和检测要求的不同，决定了标本的种类、取材部位、和保存条件标本运输方式等都有不同，采集标本上如有错误或疏忽，都会影响检验结果。,标本采集的规范,一般阴道感 染诊断的取 材，须取阴 道后穹隆部 位的分泌物。,取材前，要用一 支棉签揩去取材 部位堆积的脓液
9、， 用另一支棉签取 材，为提高阳性 率，还可采用重 复两次取材或两 个部位的标本混 合后检验的方法。,要尽量使用 大一些的棉 签取样，要 将棉签在取 材部位旋转 并停留20秒,要使用试剂盒 配套的保存液 保存标本。标 本在2-8保存 不宜超过2天。,取材之前24小时 内，应无性交、 无盆浴或阴道冲 洗；在48小时内 未使用阴道润滑 剂或阴道“兴奋剂” 等化学物质,一般要求,取材部位要准确,取材方法要得当,标本量要充足,标本要正确保存 及时检验,正确取材要把握一下几点,标本采集的规范,检验原理,H2O2阴道乳酸杆菌标志物 唾液酸苷酶NAase加德纳菌、游动弯曲杆 菌等BV致病菌的标志物。 白细胞
10、酯酶炎性细胞的标志物。,H2O2（反应装置上部的反应孔）,阴道液中过氧化氢经过过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯-2-羟基苯磺酸氧化成红色或紫色，在反应系统中加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸的拮抗物，当标本中H2O2浓度2mol/L，反应结果呈红色或紫色，呈色深度与H2O2 浓度成正比，标本中H2O2浓度 2mol/L，反应结果呈蓝色。 结果判读： 阴性：显红色、紫色或蓝紫色 阳性：蓝色 参考范围： 2mol/L为阴性,唾液酸苷酶活性测定（反应装置中部的反应孔）,唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐，释放出溴吲哚基遇重氮盐起反应呈红色或紫色
11、，呈色深度与唾液酸苷酶活性呈正比。 结果判读： 阴性：不显色或黄色 阳性：红色、紫色或蓝色，显蓝色表示唾液酸 苷酶活性浓度很高。 参考范围： 7U/ml为阴性,白细胞酯酶（反应装置下部的反应孔）,白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在氧的条件下呈蓝色或绿色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。 结果判读：参照比色板比色判读结果 阴性：“-”或“” 阳性：“+”、“+”、“+” 参考范围：白细胞酯酶7U/ml为阴性,产过氧化氢乳酸 菌占优势地位,粘膜修复 炎症消失,无引发BV的 细菌繁殖,正 常,正 常,阴 性,异 常,增 高,阳 性,过氧化氢浓度,LE活性,SNa活性
12、,乳酸菌减少或消失,各种阴道感染,致病菌、条件致 病菌增加,阴道微生态评价适宜技术,纠正了以白细胞 升高才为“炎症”的 生殖道感染的概念,阴道感染诊断 治疗思路的新 突破,临床用途,指导妇产科临床医师从微生态角度重 新审视妇科感染性疾病； 关注感染及治疗后的阴道微生态状况， 树立“将阴道微生态恢复正常作为阴道 炎治疗的最终目标”的理念。,A、弥补现有白带常规检查只做形态学检查、不做生化检查，不能准确判断感染的程度及阴道微生态、不能评价预后等不足； B、 阴道微生态评价 C、从微生态角度评价阴道炎是否治愈； D、阴道生态制剂的用药指标； E、了解产后阴道生态，确定是否恢复性生活； F、BV诊断与疗效评价，需氧菌阴道炎、衣原体感染筛查。,阴道微生态评价意义,机体反应的生化标志物 白细胞对细菌的吞噬过程,阴道微生态评价的内容,白细胞酯酶与被破坏的白细胞数量成正比 而白细胞数量与采样、涂片、月经周期有关,检测结果参考,阴道分泌物检验结果,线索细胞（clue cell）,在脱落的阴道鳞状上皮细胞上粘附有大量的加德纳尔菌,上皮细胞互相粘连成团,细胞边缘不齐似锯齿壮,表面粗糙,有许多大小不等的颗粒或斑点,似撒有一层胡椒粉。核结构模糊不清或碎解,有时细胞呈溶解样。,
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