p53基因治疗的基础与临床研究

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1、p53基因治疗的基础与临床研基因治疗的基础与临床研究究 第一部分研究第一部分研究 p53对人胃癌细胞放射对人胃癌细胞放射敏感性和热敏感性的作用敏感性和热敏感性的作用 国家自然科学基因课题（国家自然科学基因课题（95规划）规划）4种不同种不同p53状况胃癌细胞状况胃癌细胞4Gy剂量剂量照射后，仅照射后，仅wtp53细胞出现了明显的细胞出现了明显的G1期阻滞期阻滞(分别占原细胞总数的分别占原细胞总数的67.967.9和和61.161.1)，和细胞凋亡，和细胞凋亡(比例分比例分别达别达13.0%和和15.3%)。而其他。而其他3种种p53异常的细胞都没有出现明显的异常的细胞都没有出现明显的G1期阻滞

2、和凋亡效应。期阻滞和凋亡效应。4种胃癌细胞种胃癌细胞4Gy照射后照射后w细胞、细胞、M细胞、细胞、neo细胞和细胞和823细胞生存率分别为细胞生存率分别为0.108 0.006、0.155 0.004、0.147 0.007和和0.140 0.013,W细胞生存率显著地低于后三种细胞（细胞生存率显著地低于后三种细胞（p0.05）4种胃癌细胞肿瘤种胃癌细胞肿瘤10Gy照射后体积抑制曲线：照射后体积抑制曲线：w细胞肿瘤放射反应曲细胞肿瘤放射反应曲线明显受到抑制线明显受到抑制p53对人胃癌细胞热敏感性的作用对人胃癌细胞热敏感性的作用4 4种不同种不同p53p53状况胃癌细胞在状况胃癌细胞在4242C

3、 C 2 h 2 h 或或4343C 30minC 30min后后8h8h，仅，仅W W细细胞胞S S期比例明显增加期比例明显增加（P0.05P0.05）分）分别占别占53.553.5或或50.050.0，凋亡比率凋亡比率分别达分别达10.5%10.5%和和12.3%12.3%。而其他。而其他3 3种种细胞的细胞的S S期比例无明显增高期比例无明显增高 ，凋，凋亡比例都为亡比例都为0(p0.05)0(p0.05)。4 4种细胞种植肿瘤两次种细胞种植肿瘤两次43C 20min加热后，加热后，w细细胞肿瘤抑制曲线增长缓慢，到胞肿瘤抑制曲线增长缓慢，到20天时仅增大了天时仅增大了1倍倍，而其他而其他

4、3种细胞肿瘤增长迅速，到种细胞肿瘤增长迅速，到20天时增大了天时增大了2.7 3.6倍倍,生长速度显著地高于生长速度显著地高于W细胞细胞（P0.05）。第二部分研究第二部分研究重组人重组人p53腺病毒对人胃癌细胞腺病毒对人胃癌细胞放射敏感性和热敏感性作用放射敏感性和热敏感性作用Bax凋亡凋亡坏死坏死激活免疫系统激活免疫系统产生细胞因子和淋巴细胞产生细胞因子和淋巴细胞提高抗肿瘤体液免疫和细胞免疫力提高抗肿瘤体液免疫和细胞免疫力免疫系统免疫系统转染率与病毒剂量转染率与病毒剂量 病毒量为病毒量为50 MOI时，四种胃癌细时，四种胃癌细胞感染率胞感染率40%左右；左右；100 MOI时，时，感染率达感

5、染率达8090%（multiplicity of infection,MOI,效靶比）。效靶比）。Adp53表达定位表达定位 1:100MOI效靶比效靶比Adp53产生产生细胞高转染率（细胞高转染率（100）和）和p53基因在基因在细胞内高表达细胞内高表达，产，产生生G2/M期阻滞和凋亡增加和期阻滞和凋亡增加和细胞增殖抑制细胞增殖抑制图图1 100MOI Adp53感染感染4种种胃癌细胞胃癌细胞48小小时后时后p53蛋白的蛋白的免疫组化染色。免疫组化染色。Adp53感染细感染细胞核着棕色。胞核着棕色。显示显示p53表达在表达在细胞核内并达细胞核内并达到到100转染。转染。1.Marker 2.

6、W+Adp53 3.W control 4.M+Adp53 5.M control 6.neo+Adp53 7.neo control 8.823+Adp53 9.823 control图图2：Western blot印记法显示印记法显示4种胃癌细胞种胃癌细胞100MOIAdp53感染感染后后48小时，在小时，在53KD位置上均有位置上均有一条清晰的杂交带，表明一条清晰的杂交带，表明 p53蛋蛋白高表达。白高表达。Wt Mut Neo BGC-823图图3.4种胃癌细胞种胃癌细胞100MOIAdp53感染后感染后48小时小时TUNEL法染色显示法染色显示高比率凋亡细胞被染成棕高比率凋亡细胞被染

7、成棕色。色。表表1 Adp53结合结合4Gy照射胃癌细胞存活率照射胃癌细胞存活率 存活分数存活分数 细胞系细胞系 Ad-p53组组 4Gy组组 p53+4Gy组组 Wtp53 0.6260.019 0.1170.013 0.0940.001 Mutp53 0.3690.024 0.1690.002 0.0760.009 Neo 0.5180.016 0.1520.004 0.1100.005 823 0.5260.023 0.1500.005 0.1080.025 注:采用Hotelling T2 检验表明Ad-p53+4Gy组存活分数显著低于4Gy组（P0.001）Adp53结合放射实验结合

8、放射实验 表表2 Adp53结合结合4Gy照射对照射对4种胃癌细胞的细胞周期和凋亡的影响（种胃癌细胞的细胞周期和凋亡的影响（FCM法）法）细胞系细胞系 条件条件 G1 S G2/M Sub-G1 凋亡率比值凋亡率比值Wtp53 对照组 48.25.0 29.64.0 22.24.0 4.91.1 Adp53 43.612.0 31.810.5 24.616.5 10.61.6 4Gy 61.04.2 25.19.9 13.97.5 13.42.0 Adp534Gy 41.512.0 21.76.5 36.8 15.5 39.9 5.0 3.0#Mutp53 对照组 48.512.0 39.55

9、.5 12.010.0 5.52.0 Adp53 40.32.0 38.716.0 21.010.0 17.93.2 4Gy 40.514.0 44.516.0 14.03.0 12.74.0 Adp534Gy 34.84.0 34.316.5 30.8 11.0 45.5 10.0 3.6Neo 对照组 44.05.0 33.36.5 22.75.0 7.02.5 Adp53 39.25.5 34.76.5 26.17.5 18.02.9 4Gy 43.09.0 30.27.5 26.86.5 11.45.0 Adp534Gy 29.78.0 36.27.5 34.1 9.5 25.1 2.

10、5 2.2823 对照组 52.03.0 34.85.5 13.24.0 5.13.0 Adp53 42.54.0 39.82.0 21.66.0 15.84.8 4Gy 53.612.5 29.510.5 16.92.0 11.83.0 Adp534Gy 40.82.5 1.39.0 27.9 7.0 29.8 6.3 2.5 表表3 Adp53结合结合4Gy照射照射4种胃癌细胞的凋亡率种胃癌细胞的凋亡率(TUNEL法法)凋亡率（凋亡率（%）细胞系细胞系 对照组对照组 Ad-53 4Gy p53+4Gy 凋亡率比值凋亡率比值 Wt-p53 1.0 18.0 0.5 12.0 2.0 40.0

11、 2.5 3.3*Mut-p53 0.0 28.0 2.0 3.0 1.0 48.0 3.5 16.0 Neo 0.0 26.0 3.0 5.5 0.5 36.0 0.5 6.5 BGC823 0.0 25.0 4.0 5.0 1.0 35.0 1.5 7.0 *凋亡率比值凋亡率比值Adp534Gy的凋亡率的凋亡率/单纯单纯4Gy的凋亡率的凋亡率nW细胞肿瘤细胞肿瘤Adp53对对6Gy照射的抑瘤率比值为照射的抑瘤率比值为1.41,而而对对M细胞肿瘤为细胞肿瘤为1.91。图图5.2示示Adp53结合结合6Gy照照射对射对M细胞肿瘤的抑制作用细胞肿瘤的抑制作用 图图5.1示示Adp53结合结合6G

12、y照射照射对对W细胞肿瘤的抑制作用细胞肿瘤的抑制作用相对体积相对体积相对体积 表表1 Adp53结合加温对结合加温对W细胞周期和凋亡的作用（细胞周期和凋亡的作用（FCM）条件条件 G1 S G2/M Sub-G1 热增效比热增效比对照 38.76.2 39.37.3 22.01.6 2.61.7Adp53 38.52.4 26.82.7 34.71.0 8.50.742C 2h 36.85.0 37.83.9 25.36.0 6.54.843C 0.5h 42.07.1 34.04.7 24.04.3 14.212.2Adp53+42C 2h 44.85.1 21.86.7 34.0 2.9

13、21.4 9.8 3.3Adp53+43C0.5h 35.82.1 40.57.6 23.8 7.1 22.5 12.2 1.6 表表2 Adp53结合加温对结合加温对M细胞周期和凋亡的作用（细胞周期和凋亡的作用（FCM）条件条件 G1 S G2/M Sub-G1 热增效比热增效比对照 45.81.5 34.80.5 20.00.8 2.21.5Adp53 41.32.4 33.56.2 25.87.8 8.25.242C 2h 41.35.0 36.512.2 22.05.9 4.71.543C 0.5h 43.83.9 38.54.7 17.55.1 7.512.2Adp53+42C 2h

14、 42.510.8 32.03.3 25.3 13.4 9.8 2.4 2.1Adp53+43C0.5h 41.52.5 36.39.9 22.5 12.5 13.3 0.5 1.8 时间（天）时间（天）图图6.1 Adp53结合结合43 C0.5h W细胞细胞肿瘤抑制曲线肿瘤抑制曲线 时间（天）时间（天）图图6.2 Adp53结合结合43 C0.5h W细胞细胞肿瘤抑制曲线肿瘤抑制曲线相对体积相对体积 W细胞种植肿瘤相对生长曲线细胞种植肿瘤相对生长曲线(见图见图6.1)：单纯：单纯43 C 0.5h加温、单纯加温、单纯Adp53和和Adp53结合结合43 C 0.5h，肿瘤抑制率分别为，肿瘤

15、抑制率分别为15.8%、21.8%和和27.2%,Adp53的热增效比为的热增效比为1.7。M细胞种植肿瘤相对生长曲线（见图细胞种植肿瘤相对生长曲线（见图6.2）：单纯加温、单纯）：单纯加温、单纯Adp53和和Adp53结合加温，肿瘤抑制率分别为结合加温，肿瘤抑制率分别为24.2%、31.0%和和37.8%，Adp53的热的热增效比为增效比为1.6。临床研究临床研究Gene Therapy dreamp53 基因放疗基因放疗 野生型野生型p53p53促进放射线引发的细促进放射线引发的细胞周期阻滞和凋亡。而变异胞周期阻滞和凋亡。而变异p53 p53 减弱甚至取消这种效应减弱甚至取消这种效应 腺病

16、毒介导腺病毒介导p53p53恢复肿瘤细胞内恢复肿瘤细胞内p53p53的功能，提高肿瘤细胞放射的功能，提高肿瘤细胞放射敏感性。敏感性。试验材料试验材料 重组人重组人p53腺病毒注射液（今又生）腺病毒注射液（今又生）今又生结构：今又生结构：E1基因缺失的携带人野基因缺失的携带人野生型生型p53基因的基因的5型腺病毒型腺病毒Adp53 structure Gendicine is an E1 substituted replication-incompetent recombinant adenovirus encoding the human p53 gene.E1A/E1Bdeletionp53

17、Structural proteinsE4E2E3病毒表面的蛋白质与细病毒表面的蛋白质与细胞表面的蛋白质通过胞表面的蛋白质通过“配子与配体配子与配体”结合的结合的方式，整个病毒颗粒被方式，整个病毒颗粒被细胞吞噬入细胞内。在细胞吞噬入细胞内。在细胞浆内，病毒外壳与细胞浆内，病毒外壳与内核的内核的DNA分离，其分离，其中外壳蛋白质被降解；中外壳蛋白质被降解；DNA进入细胞核。在进入细胞核。在核内，核内，DNA转录出转录出RNA（mRNA),mRNA从胞核出来进入细胞浆；从胞核出来进入细胞浆；在胞浆翻译出在胞浆翻译出 p53蛋白蛋白质质，p53蛋白质通过内蛋白质通过内质网系统再进入到细胞质网系统再进

18、入到细胞核与核内的核与核内的DNA结合，结合，以调节以调节DNA（基因）（基因）表达。表达。P53基因治疗的临床机理 瘤内注射今又生瘤内注射今又生p53基因及其靶基基因及其靶基因的表达因的表达 治疗治疗P53基因基因 上调上调P21基因及基因及Bax基因基因 下调下调VEGF基因基因 方法：方法：IHC和和RTPCR及测序及测序免疫组化法评价今又生瘤内注射后免疫组化法评价今又生瘤内注射后p53基因表达基因表达.张子苑张子苑NPC例，注药前例，注药前p53Adp53注射后注射后p53+75%刘凯恶性神经鞘瘤例刘凯恶性神经鞘瘤例 注药前注药前P53+75%,PCR+P53基因表达基因表达张沂择舌癌

19、例，注药前张沂择舌癌例，注药前P21张沂择注药后张沂择注药后P2150丁先进丁先进NPC例，注药前例，注药前P21丁先进注药后丁先进注药后P21 25P21基因表达基因表达丁先进丁先进NPC，注药前，注药前Bax丁先进注药后丁先进注药后Bax2550郑昌华郑昌华NPC例，注药前例，注药前Bax郑昌华例注药后郑昌华例注药后Bax50%张沂择例注药后张沂择例注药后Bax25-50张沂择舌癌例注药前张沂择舌癌例注药前Bax丁先进丁先进NPC例注药前例注药前VEGF75丁先进例注药后丁先进例注药后VEGF马冰清平滑肌肉瘤例注药前马冰清平滑肌肉瘤例注药前VEGF75%马冰清例注药后马冰清例注药后VEGF

20、张子苑例注药后张子苑例注药后VEGF25-50%张子苑张子苑NPC例注药前例注药前VEGF75%胃体癌，低分化腺癌（上图，疗前）胃体癌，低分化腺癌（上图，疗前）VEGFP53灌注热灌注热化疗化疗后手术，胃角后手术，胃角残存肿瘤，镜下仅见间质内散残存肿瘤，镜下仅见间质内散在稀少变性癌细胞在稀少变性癌细胞VEGF今又生特有今又生特有p53序列序列 331bp马冰清，平滑肌肉瘤，马冰清，平滑肌肉瘤，IHC法示：用药前法示：用药前+75%,用药后用药后+75%PCR法示：用药前，用药后法示：用药前，用药后注药前仅注药前仅38吻合（如上图），注药后与吻合（如上图），注药后与p53专有序列比较专有序列比较

21、100吻合吻合（如下图）（如下图）马冰清注药前马冰清注药前与与p53专有序列图比较专有序列图比较仅仅38吻合吻合马冰清注药后马冰清注药后与与p53专有序列图比较专有序列图比较达达100吻合吻合例例2：(龚兆洪龚兆洪NPC,IHC示示)注今又生前注今又生前样品样品p53与与今又生专有今又生专有p53序列序列仅有仅有38吻合吻合0720290_G1_P53F_B06_0721708:DNAMAN2 identity=38%5 GTGGTGGTGCCCTATGAGCCGCCTGAGGTTGGCTCTGACTGTACCACCATCCA CT ACAAC 41 GTGGTGAGGCTCCCCTTTCTT

22、 GCGGAGATTCTCTTCC TCTGTGCGCCGGTCTCTC CCAGG65 TACATGTGTAACAGTTCCTGCATGGGCGGCATGAACCGGAGGCCCATCCTCACCATCATC101 ACAGGCACAAACACGCACCTCAAAGCTGTTCCGTCCCAGTAGATTACCACTGGAGTCTTC125 ACACTGGAAGACTCCAGTGGTAATCTACTGGGACGGAACAGCTTTGAGGTGCGTGTTTGT 161 CAGTGTGATGATGGTGAGGATGGGCCTCCGGTTCATGCCGCCCATGCAGGAACTGTTACA18

23、5 GCCTGTCCTGGGAGAGACCGGCGCACAGAGGAAGAGAATCTCCGCAAGAAAGGGGAGCCT221 CATGTAGTTGTAGTGGATGGTGGTACAGTCAGAGCCAACCTCAGGCGGCTCATAGGGCAC245 CACCACGAGCTGCCCCCAGGGAGCACTAAGCGAGCACTGCCCAACAA 281 CACCACACTATGTCGAAAAGTGTTTCTGTCATCCAAATACTCCACAC例例1：注药后注药后样品样品p53与今又生专有与今又生专有p53序列序列100吻合（吻合（IHC示）示）0720299_G23_P53R_D0

24、9_0724712:DNAMAN1 identity=100%1 CTCGTGGTGAGGCTCCCCTTTCTTGCGGAGATTCTCTTCCTCTGTGCGCCGGTCTCTCCC38 CTCGTGGTGAGGCTCCCCTTTCTTGCGGAGATTCTCTTCCTCTGTGCGCCGGTCTCTCCC61 AGGACAGGCACAAACACGCACCTCAAAGCTGTTCCGTCCCAGTAGATTACCACTGGAGTC 98 AGGACAGGCACAAACACGCACCTCAAAGCTGTTCCGTCCCAGTAGATTACCACTGGAGTC121 TTCCAGTGTGATG

25、ATGGTGAGGATGGGCCTCCGGTTCATGCCGCCCATGCAGGAACTGTT 158 TTCCAGTGTGATGATGGTGAGGATGGGCCTCCGGTTCATGCCGCCCATGCAGGAACTGTT181 ACACATGTAGTTGTAGTGGATGGTGGTACAGTCAGAGCCAACCTCAGGCGGCTCATAGGG218 ACACATGTAGTTGTAGTGGATGGTGGTACAGTCAGAGCCAACCTCAGGCGGCTCATAGGG241 CACCACCACACTATGTCGAAAAGTGTTTCTGTCATCCAAATACTCCACACGCAA 2

26、78 CACCACCACACTATGTCGAAAAGTGTTTCTGTCATCCAAATACTCCACACGCAAP53表达表达 IHC法法 12/25(48%)RT-PCR+测序测序法法 16/17(94.1%)P21表达表达 IHC法法 11/25(44%)Bax表达表达 IHC法法 9/24(37.5%)VEGF表达表达 IHC11/24(45.7%)瘤内注射瘤内注射Adp53后后P53及其靶基因表达情况及其靶基因表达情况重组人重组人P53腺病毒制剂临床试验腺病毒制剂临床试验 1998年年2000年年1月完成临床月完成临床I期试期试验验 2001年年10月月2003年年5月完成月完成II

27、/III期临床试验期临床试验 北京肿瘤医院为牵头单位北京肿瘤医院为牵头单位李利华，鼻咽癌，李利华，鼻咽癌，右颈转移右颈转移,T2N2M0右上颈转右上颈转移淋巴结移淋巴结6.1cm2纤维鼻咽纤维鼻咽镜可见右镜可见右鼻咽顶鼻咽顶3cm肿物肿物疗前疗前CT示示右鼻咽顶右鼻咽顶肿物肿物5.5cm2病理：低分病理：低分化鳞癌化鳞癌方法1右上颈肿物右上颈肿物B超探查超探查右上颈肿物注射部位右上颈肿物注射部位大小大小 6.1cm2右上颈肿右上颈肿物，物，6.8 cm2，注，注射今又生射今又生B超引导下，右上颈肿物穿刺注射今又生超引导下，右上颈肿物穿刺注射今又生可见针尖可见针尖位置在瘤位置在瘤内内注药后即注药

28、后即刻在瘤内刻在瘤内形成一片形成一片强回声区强回声区方法方法2左：左侧鼻咽顶肿瘤左：左侧鼻咽顶肿瘤 右：直接瘤内注射今又生右：直接瘤内注射今又生光纤鼻咽内镜引导下瘤内注射光纤鼻咽内镜引导下瘤内注射今又生今又生左下图：左下图：60Gy，8次注今次注今又生，鼻内镜见左鼻咽顶又生，鼻内镜见左鼻咽顶肿瘤消失肿瘤消失 各种各种给药给药途径途径瘤内注射的意义1.避免免疫攻击避免免疫攻击2.腺病毒感染快腺病毒感染快而广而广3.高感染率致高高感染率致高疗效疗效分组方案分组方案 多中心随机对照多中心随机对照II/IIIII/III期临床期临床试验试验 基因放疗组（基因放疗组（GTRTGTRT）单纯放疗组（单纯放

29、疗组（RTRT）方案方案 基因放疗组基因放疗组（GTRTGTRT）每周每周5 5瘤内注射瘤内注射今又生今又生10101212VP/VP/次，次，第三天第三天放疗，病灶区放疗，病灶区采用与采用与RTRT组相同照射组相同照射,予予70Gy/35f/770Gy/35f/78w,8w,第五周第五周(40Gy)(40Gy)，第八周，第八周(70Gy)(70Gy)，疗后，疗后2 2个月为疗效确认，以个月为疗效确认，以CTCT测量肿瘤体积，测量肿瘤体积，计算计算40Gy40Gy、70Gy70Gy、和确认时肿瘤缩小率、和确认时肿瘤缩小率（）（）.按按WHOWHO实体肿瘤客观疗效评定标准，疗效实体肿瘤客观疗效评

30、定标准，疗效评定为评定为CRCR、PRPR、SDSD、PDPD。实验室特殊检查实验室特殊检查 肿瘤组织肿瘤组织p53p53蛋白检测（蛋白检测（IHCIHC法和法和测序法）测序法）病毒抗体检测（病毒抗体检测（ELASAELASA法）法）临床常规检验临床常规检验 每周血、尿、便每周血、尿、便 每月血生化（每月血生化（BUN,Cr,AST,ALT)BUN,Cr,AST,ALT)每月心电图、胸片每月心电图、胸片毒性反应毒性反应 按按WHOWHO常见毒性分级标准评价毒付反常见毒性分级标准评价毒付反应，按轻、中、重、威胁生应，按轻、中、重、威胁生命评价和记录。重点观察体温变命评价和记录。重点观察体温变化。

31、一般在注射今又生后几小时内化。一般在注射今又生后几小时内出现短暂的自限性发热出现短暂的自限性发热（self-self-limited feverlimited fever），），3838 C C以上发烧以上发烧者可酌情给予退烧药（消炎痛栓或者可酌情给予退烧药（消炎痛栓或柴胡注射液）。柴胡注射液）。统计学分析统计学分析 全部数据的统计分析，采用全部数据的统计分析，采用SPSS11.0 SPSS11.0 统计软件，瘤灶缩小统计软件，瘤灶缩小率比较采用率比较采用t t检验（两组方差不检验（两组方差不齐时，用齐时，用tt检验），疗效比较检验），疗效比较采用采用PearsonPearson卡方检验，不良

32、反卡方检验，不良反应测定值与基线比较采用应测定值与基线比较采用Dunnett-tDunnett-t检验。检验。GTRT group(n=26)RT group(n=27)Gender(n)Male FemaleAge(y)Median RangeHistologic type KeratinizingUndifferentiated UICC stage(n)I II III IV(M0)17948.5 12.4197042208(30.8)8(30.8)10(38.4)19851.6 11.3287132409(33.3)10(37.1)8(29.6)Table 1.Comparison o

33、f patient characteristics between GTRT and RT groups*Data presented as the number of patients,with the percentages of the total in parentheses.表表2 鼻咽癌鼻咽癌GTRT组组26例和例和RTRT组组27例瘤灶大小（例瘤灶大小（mm2）比较）比较组别组别瘤灶数瘤灶数肿瘤大小肿瘤大小GTRT组组26 676.15 437.84mm2RTRT组组44 645.91 448.97mm2GTRT组瘤灶大于组瘤灶大于RT组，但成组组，但成组t检验：检验：Z=-0.

34、271,p=0.787,两组瘤灶大小差别无统计学意义，说明两组疗效具有可比性。两组瘤灶大小差别无统计学意义，说明两组疗效具有可比性。XSGTRT组与组与GT组具可比性组具可比性 性别构成、年龄、病理、肿瘤大性别构成、年龄、病理、肿瘤大小、临床分期均无显著差别小、临床分期均无显著差别鼻咽癌鼻咽癌T2N2M0,III,疗前肿瘤疗前肿瘤 23.5cm2 充满鼻咽和充满鼻咽和鼻腔鼻腔照射照射40Gy 结结合合 6 次注射今次注射今又生后肿瘤完又生后肿瘤完全消失全消失Left upper fig：NPC stage IV pretreatmet Nasopharyngeal tumorNaso-endo

35、scope photoUpper fig:pretreatInferior fig:at 44Gy and 5 times injection tumor disappeared.CT imaging at 70GY and Gendicine 8 times，nasopharynx tructure normalTable 3.Tumor shrinkage rates(%)of Gendicine-injected tumors of GTRT group as compared with RT group 40Gy 70Gy ValidationGTRT 64.50 17.78#84.3

36、516.97#90.2721.15#RT 41.53 24.59#56.60 28.01#72.50 23.17#RER*1.551.49 1.25#Tumor shrinkage rate(%)(X S)Radio-enhancement ratio(RER )tumor shrinkage rate of Gendicine-injected tumor of GTRT group/tumor shrinkage rate of tumor of RT groupP0.01 for each treatment point at 40Gy,70Gy and validation.Table

37、 4.Response rate(%)of GTRT group as compared with RT groupgroup40Gy70GyValidationaFNCRPRSDPDFNCRPRSDPDFNCRPRSDPDGTRT26 2186026916102616910RT44 019250473251902881460aFN:tumor focus number.P 0.001 for each treatment point at 40Gy,70Gy and validation.At validation the CR rate were 16/26(61.5%)for GTRT-

38、tumors and 8/28(28.6%)for RT-tumors,respectively.*At validation time point,the CR rate of GTRT group was 2.15 times to that of RT group (61.5%/28.6%)今又生的坏死效应今又生的坏死效应注射注射Adp53Adp53部位肿瘤部位肿瘤B B超显示肿瘤超显示肿瘤血供迅速减少甚至消失，血供迅速减少甚至消失，CTCT显显示肿瘤内示肿瘤内CTCT值明显下降，坏死值明显下降，坏死明显。有明显。有3 3例在例在40Gy40Gy时穿刺病理时穿刺病理证实未见癌细胞（证实未

39、见癌细胞（1-101-10侯凤才、侯凤才、1 11414李文花、李文花、1 11616邱礼斌）邱礼斌）候凤才，鼻咽癌，左上颈淋巴结转移候凤才，鼻咽癌，左上颈淋巴结转移左外上后为注左外上后为注P53，5.7cm2，注射后，注射后弥散好；左内前下为对照，弥散好；左内前下为对照，5.7cm240Gy,前前LN，对照，对照，2.9cm2,缩缩40后后LN1 cm2，注，注P53,缩小缩小72，空洞坏死，空洞坏死，针吸未见癌细胞针吸未见癌细胞第六次注射第六次注射 p53，LN，50Gy，活检病理：大部，活检病理：大部分坏死，残存少许纤维分坏死，残存少许纤维组织及横纹肌。组织及横纹肌。Adverse Events 骨髓、肝、肾、肺、心功能骨髓、肝、肾、肺、心功能 今又生注射前今又生注射前后都保持在正常范围后都保持在正常范围 107 病例病例 the incidence of fever was 78.5%,grade 1(less than 38 C)fever 43%grade 2(range 38 C 40 C)35.5%.大多数发生自限性发烧（大多数发生自限性发烧（self-limited fever)