毕业论文设计 钒酸盐氧化法和化学氧化法测定血清胆红素的比较

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1、钒酸盐氧化法和化学氧化法测定血清胆红素的比拟摘要：目的 比拟钒酸盐氧化法和化学氧化法测定血清胆红素的性能。方法 用钒酸盐氧化法、化学氧化法分别测定血清中总胆红素TBil和直接胆红素DBil。根据美国临床实验室标准化委员会NCCLS指南，比拟了两种方法的精密度、线性范围、回收率和抗干扰能力，并计算两种方法测定结果的相关性。结果 两种方法重复性实验批内变异和批间变异分别小于3.0%和5.0%；两种方法测定TBil的平均回收率分别为100.17%、101.12%；测定DBil5%。钒酸盐法测定TBil的线性范围为0-570mol/L，化学氧化法测定TBil的线性范围为0-650 mol/L，钒酸盐法

2、测定DBil的线性范围为0-312 mol/L，化学氧化法测定DBil的线性范围为0-213 mol/L。以钒酸盐方法为比照法Y，对化学氧化法X进行评估，两种方法测定TBil回归方程为Y=0.995X+1.954，相关系数r2=0.999，P0.05，测定DBil的回归方程为Y=0.940X+0.731，r2=0.996，P0.05。化学法抗溶血干扰能力较钒酸盐法强，而抗维生素C的干扰较钒酸盐法差，两种方法对TG的抗干扰能力相当。结论 钒酸盐氧化法和化学氧化法测定血清胆红素性能相当，两种方法的线性检测范围、精密度、回收率和抗干扰能力均符合临床常规使用要求。 关键词 总胆红素; 直接胆红素; 方

3、法学比拟Comparison of vanadate-acid oxidizes method and chemical oxidizes method to analyze bilirubin in serumAbstract Objective To compared the performances of the vanadate-acid oxidizes and chemical oxidizes methods detect bilirubin in serum. Method The total bilirubin and direct bilirubin in serum we

4、re analyzed by the methods of the vanadate-acid oxidizes and chemical oxidizes, respectively. The precision, linearity, rate of recovery, anti-interference ability of two methods were compared according standard method of NCCLS, and calculate the relativity of two methods. Results The within-run and

5、 run to run imprecision (CV) of two kinds of methods were less than 3.0% ands 5.0%, respectively. The recovery rate of two kinds of methods detected total bilirubin were 100.17%、101.12%，respectively，5%，respectively. The linear range of TBil measured by the method of the vanadate-acid oxidizes was 0-

6、570 mol/L and that the chemical oxidizes was 0-650mol/L, the linear range of DBil measured by the method of the vanadate-acid oxidizes was 0-321mol/L and that the method of the chemical oxidizes was 0-213mol/L, respectively. The TBil levels by vanadate-acid oxidizes method (X) were closely correlate

7、d with those obtained chemical oxidizes method (Y), Y=0.995X+1.954, r2=0.999 P0.05, the DBil levels by vanadate-acid oxidizes method (X) were closely correlated with those obtained chemical oxidizes method (Y), Y=0.940X+0.731，r2=0.996，P0.05. Chemical oxidizes method anti- interference of the dissolv

8、ing blood was stronger than that vanadate-acid oxidizes， but the interference of the anti- vitamin C was less than the vanadate-acid oxidizes method. The two kinds of methods were equal to the interference ability of anti-TG. Conclusion Examination range, anti-interference ability, precision and rec

9、overy rate of bilirubin determination with the two methods can meet the clinical demand, suitable for determination of bilirubin levels in a clinical laboratory. Key words Total bilirubin; Direct bilirubin; Methodology comparison胆红素是临床上的常规检测工程。目前测定的主要方法主要有三种：一是重氮方法(简称J-G法)，此法操作简便，为大多实验室采用的常规方法、但存在着重

10、氮试剂不稳定以及与间接胆红素和直接胆红素反响特异性不佳的缺点1；二是胆红素氧化酶法、该法特异性强、干扰因素少，但本钱昂贵，临床上应用受到限制2。三是采用无机氧化剂氧化胆红素的化学氧化法，如目前临床上广泛应用的钒酸盐氧化法因试剂稳定，方法简单，抗干扰能力强，被大多实验室接受3。新近推出的另一种化学氧化法，以KHCl3为氧化剂，在一定的pH条件下，使胆红素氧化为胆绿素，在450nm处反响前后的吸光度变化与胆红素浓度成正比。由于使用的氧化剂与钒酸盐氧化法不同，其测定性能可能存在差异。为了了解该方法的性能及其测定结果与钒酸盐氧化法是否具有可比性，我们分别对钒酸盐氧化法和化学氧化法测定血清总胆红素和直接

11、胆红素的性能进行了评价和比拟，现报告如下。1 材料和仪器1.1 试剂 钒酸盐氧化法测定TBil和 DBil试剂盒批号分别为2006030306和2006030004和校准品，由浙江东瓯生物工程提供；化学氧化法测定TBil和DBil批号分别为20060418和20060412和校准品，由宁波美康生物科技提供。质控血清由英国郎道公司提供。1.2 仪器 日本日立7170S全自动生化分析仪，CELL-DNY 1700血细胞分析仪。2 方法与结果2.1 精密度实验 取高值98.74mol/L、中值31.85mol/L、低值4.79mol/L三份混合血清标本，分别用钒酸盐氧化法和化学氧化法作批内、批间重复

12、性试验，测定TBil与DBil各20次，结果显示两种方法批内CV均3.0%，批间均5%，两种方法批内、批间精密度均较好。结果见表1、2。表1 TBil批内、批间CV%测定结果方法 批内 批间 高值 中值 低值 平均值 高值 中值 低值 平均值 钒酸盐氧化法 0.67 0.47 1.69 0.94 化学氧化法 0.47 0.42 0.74 0.54 表2 DBil批内、批间CV%测定结果方法 批内 批间 高值 中值 低值 平均值 高值 中值 低值 平均值钒酸盐氧化法 0.52 0.75 0.88 化学氧化法 0.54 0.48 2.53 1.18 2.2 回收实验 取一份TBil mol/L的混

13、合血清标本分成3管，每管0.9ml，分别参加TBil浓度为298.0和和43.2mol/L。取一份含DBil浓度为30.0和11.1mol/L高、中、低血清0.1 ml，混合后高、中、低血清标本中的DBil浓度分别为48.4 mol/L、36.0mol/L和28.1mol/L。用钒酸盐氧化法和化学氧化法分别测定TBil、DBil 3次，两种方法测定TBil和DBil的回收实验结果如下表3、4。表3 两种方法测定TBil的回收实验结果方法 高值 中值 低值根底值 实际值 测得值 回收率% 实际值 测得值 回收率% 实际值 测得值 回收率%平均值%钒酸盐氧化法 00 0 0 0 0 10 0 0

14、0 100.17化学氧化法 0 0 0 0 0 0 0 00 104.02 2 表4 两种方法测定DBil的回收实验结果方法 高值 中值 低值 根底值 实际值 测得值 回收率% 实际值 测得值 回收率% 实际值 测得值 回收率% 平均值%钒酸盐氧化法30.03 48.36 47.17 4 35.96 35.53 0 28.14 28.63 101.75 化学氧化法 30.03 48.36 47.00 97.19 35.96 35.33 98.25 28.14 28.63 99.62 5 取一份高值血清标本，第1管为原浓度，第2-5管按4：1、3：2、2：3、1：4与生理盐水混合。测定每份标本的

15、TBil和DBil，各个浓度均用2种方法重复测定3次，取其平均值。结果说明，钒酸盐氧化法TBil在0-570mol/L图1，DBil在0-312 mol/L图3，化学氧化法TBil在0-650 mol/L图2，DBil在0-213 mol/L图4内保持良好线性关系。2.4 相关性实验 取70份病人标本用两种方法分别测定，并进行相关性分析。结果显示，钒酸盐氧化法Y与化学氧化法X测定TBil回归方程为，相关系数为r2=0.999,如图5。测定DBil的回归方程为 ，相关系数r2=0.996，如图6。两种方法之间具有良好的相关性，且两者之间差异无显著性意义P0.05。2.5 干扰试验2.5.1 溶血

16、干扰试验 取4ml全血标本用生理盐水反复洗涤，然后参加蒸馏使红细胞完全溶解，离心沉淀后取上清液，用CELL-DNY1700血细胞分析仪测定其血红蛋白浓度为85g/L即为干扰物。再将其配置成85 g/L、66 g/L、50 g/L、38 g/L、21 g/L、10 g/L浓度的干扰物，取混合血清标本，分成六管，每份标本与一种浓度的干扰物按9：1比例混合，混合后干扰物终浓度为8.5 g/L、6.6 g/L、5.0 g/L、3.8 g/L、2.1 g/L、1.0 g/L。每份标本测定三次，取平均值，结果见表5。 表5 血红蛋白干扰实验结果 血红蛋白含量g/L工程 根底值 1.0 2.1 3.8 5.

17、1 6.6 测得值 干扰率% 测得值 干扰率% 测得值 干扰率% 测得值 干扰率% 测得值 干扰率% 测得值 干扰率%钒酸盐氧化法 TBil 34.10 33.77 -0.96 32.97 -3.10 30.17 -11.52 28.07 -17.68 27.80 -18.47 DBil 24.53 24.07 -1.87 20.67 0 16.77 -31.63 14.73 -39.95 化学氧化法 TBil 35.73 37.40 4.67 37.33 4.48 35.07 -1.85 34.63 -3.08 0 -4.28 0DBil 24.00 0 -3.33 23.43 -2.38

18、0 -1.25 25.00 4.17 28.00 16.67 29.33 当血红蛋白浓度大于3.8 g/L时，对钒酸盐氧化法测定TBil有干扰；当血红蛋白浓度大于2.1 g/L时，对测定DBil有干扰。采用化学氧化法测定TBil、DBil时，血红蛋白大于6.6时g/L有干扰。说明化学氧化法测定TBil、DBil时的抗溶血能力较钒酸盐氧化法强。2.5.2 脂血干扰试验 含三酰甘油TG 96mmol/L的注射用脂肪乳剂，用生理盐水配制成96 mmol/L、48 mmol/L、32 mmol/L、28 mmol/L、19 mmol/L浓度。取混合血清标本分成五份，每份与一种浓度的干扰物按9：1比例混

19、合，混合后干扰物终浓度为9.6 mmol/L、4.8 mmol/L、3.2 mmol/L、2.8 mmol/L、1.9 mmol/L，每份标本测定3次。结果见表6。 表6 脂血干扰实验结果 TG含量mmol/L工程 根底值 1.9 2.8 3.2 4.8 9.6 测得值 干扰率% 测得值 干扰率% 测得值 干扰率% 测得值 干扰率% 测得值 干扰率% 钒酸盐氧化法 TBil 79.63 79.73 0.13 78.60 -1.29 78.80 -1.04 76.20 -4.30 0DBil 54.33 54.73 0.74 54.43 0.18 0 -0.97 52.37 化学氧化法 TBil

20、 00DBil 55.33 56 .00 1.20 57.00 3.01 57 .00 3.01 57.33 3.61 59.00 TG浓度在9.6 mmol/L时，对钒酸盐氧化法测定TBil和DBil有干扰；而化学氧化法测定TBil时 ，时尚未有干扰，测定DBil在TG浓度为9.6 mmol/L时有干扰。2.5.3 维生素C干扰试验 取一支含量为400 g/L的维生素C，用生理盐水稀释成一系列不同浓度，按1：9参加到每份混合血清标本中，每份测定3次。结果显示，采用钒酸盐氧化法测定TBil和DBil时，维生素C浓度在5g/L以内无干扰。采用化学氧化法测定TBil和DBil时，维生素C浓度g/L

21、以内无干扰。结果见表7。表7 维生素C干扰实验结果 维生素C含量g/L工程 根底值 0.6 1.25 2.5 5 6 测得值 干扰率% 测得值 干扰率%测得值 干扰率%测得值 干扰率% 测得值 干扰率% 钒酸盐氧化法 TBil 17.30 17.70 2.31 17.53 1.33 17.40 0.57 16.40 -5.20 15.43 -DBil 5.57 5.57 0.00 5.60 0.54 5.63 1.07 4.87 -12.57 4.23 -化学氧化法 TBil 13.73 12.57 -8.44 12.67 -7.72 12.77 -6.99 12.93 -5.83 13.20

22、 -DBil 6.00 2.67 -55.50 2.33 -61.17 2.00 -66.67 2.00 -66.67 2.00 3. 讨论 我们对钒酸盐氧化法和化学氧化法测定TBil和DBil的精密度试验、回收试验、线性试验、干扰试验及两种方法的相关性分析进行了评估，并进行了比拟。精密度试验结果显示，化学氧化法测定TBil的平均CV%小于钒酸盐氧化法，钒酸盐氧化法测定DBil的平均CV%小于化学氧化法，但两种方法批内和批间CV%分别小于3.0%和5.0%，说明两种方法均具有良好的精密。钒酸盐氧化法的批内变异结果与陈薇1、席金瓯2 、王念跃4等报道的相近，而批间变异稍高，这可能与标本保存及放置

23、时间有关。回收实验结果显示，钒酸盐氧化法和化学氧化法测定TBil的平均回收率分别为%，测定DBil%5%，钒酸盐法测定TBil和DBil的回收率为中值低值高值，化学氧化法测定TBil和DBil的回收率中值高值，DBil的回收率较TBil的高，均能满足临床应用的要求。线性实验说明钒酸盐氧化法测定TBil在0-570mol/L，DBiL在0-312 mol/L；化学氧化法测定TBil在0-650 mol/L，DBiI在0-213 mol/L内保持良好线性关系。相关实验说明两种方法测定TBil和DBil有高度的相关性，相关系数r均大于0.99，且两者之间无显著性差异P0.05。干扰实验说明，血红蛋白

24、浓度大于l和DBil的钒酸盐氧化法测定有干扰，这与丁昊5的结果相近。而血红蛋白浓度大于/L、TG大于9.6mmol/L时对化学氧化法有干扰，说明化学氧化法的抗血红蛋白以及TG的干扰能力较钒酸盐氧化法强。对维生素C的干扰实验，TBil和DBil采用钒酸盐氧化法测定结果显示维生素C浓度大于5g/L时有干扰，而采用化学氧化法测定维生素C浓度大于/L时有干扰，说明化学氧化法对维生素C的抗干扰能力较钒酸盐氧化法差。 通过以上实验说明，两种方法测定TBil和DBil的性能无较大区别，均可用于临床常规检查。参考文献1 席金瓯，常晓松.钒酸盐氧化法测定血清胆红素的分析性能评价.检验医学，2004；193：26

25、2-2632 陈薇，胡汗宁，贺小玲.血清胆红素3种测定方法的比拟.医学新知杂 ，2003，132：83-853 陈新宇，胡云良，丁红香.改进化学氧化法测定血清总胆红素、直接胆红素的评价.江西医学检验，2004；223：231-2324 王念跃，张永臣.血清总胆红素测定方法比拟.临床检验杂志，2003；211：365 丁昊. 血清总胆红素、直接胆红素的钒酸盐氧化法测定.实用医技杂志,2003;10(7);73-74医学院本科毕业论文题 目：钒酸盐氧化法和化学氧化法测定血清胆红素的比拟目录摘要及关键词.1-2页.3页.3页2.1 精密度实验.3页 2.2 回收实验.4页 线性试验.5页2.4 相关性实验.5页 干扰试验.5页2.5.1 溶血干扰试验.5页2.5.2 脂血干扰试验.6页2.5.3 维生素C干扰试验.7页.7-8页参考文献.9页 线性图.10-11页相关性图.12页