动物蠕虫学粪便检查技术简介

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1、动物蠕虫虫学粪便便检查技术术(一)一、实验验目的及及要求1掌握握动物蠕虫虫学常见见的实验验室粪便便虫卵检检查技术术。2在光光学显微微镜下区区分虫卵卵和异物物。3认识识吸虫卵卵、绦虫虫卵、线线虫卵等等蠕虫虫卵卵，掌握握其一般般特征。二、实验验器材载玻片，盖盖玻片，镊子，平皿，烧杯，塑料杯或纸杯，漏斗，漏斗架，胶帽吸管，离心管，试管，玻璃棒，粪筛，纱布，平底管（青霉素小瓶），玻璃珠，三角小烧瓶，100ml球状烧瓶，火柴棍，特制铁丝圈，虫卵计数板，普通离心机，光学显微镜等。甘油，饱饱和食盐盐水，0.11N（或4%）NaOOH，家畜畜新鲜粪粪便等。三、实验验方法、步步骤和操操作要领领(直接涂涂片法、漂

2、漂浮法、沉沉淀法、虫虫卵计数数法)（一）直直接涂片片法（Exaaminnatiion of Dirrectt Smmearrs）在清洁的的载玻片片上滴1-2滴水或或1滴甘油油与水的的等量混混合液（加加甘油的的好处是是能使标标本清晰晰，并防防止过快快蒸发变变干），其其上加少少量粪便便，用火火柴棍仔仔细混匀匀。再用用镊子去去掉大的的草棍和和渣子等等，之后后加盖玻玻片，置置光学显显微镜下下观察虫虫卵或幼幼虫。(图1-11)图1-1 直接涂片法示意图另一方法法是直接接涂片法法的改良良法叫回回旋法。取23g粪样加清水23倍，充分混匀成悬液。后用玻璃棒搅拌0.51min，使之成回旋运动，在搅拌过程中迅速提

3、起玻璃棒，将棒端附着的液体放于载片上涂开，加上盖片在镜下检查。检查时多取几滴悬液。该方法的原理是由于回旋搅动的结果，可使玻璃棒端悬液小滴中附有较多量的寄生虫卵或幼虫。（二）漂漂浮法（Metthodd Innvollvinng FFlottatiion）其原理是是采用比比重高于于虫卵的的漂浮液液，使粪粪便中的的虫卵与与粪便渣渣子分开开而浮于于液体表表面，然然后进行行检查。漂漂浮液通通常多采采用饱和和盐水，其其方法简简便、经经济、易易行。饱饱和盐水水漂浮法法对大多多数线虫虫卵、绦绦虫卵及及某些原原虫卵囊囊均有效效，但对对吸虫卵卵、后圆圆线虫卵卵和棘头头虫卵效效果较差差。饱和盐水水漂浮方方法操作作步

4、骤：取新鲜鲜粪便2g放在平平皿或烧烧杯中，用用镊子或或玻璃棒棒压碎，加加入10倍量的的饱和盐盐水，搅搅拌混合合，用粪粪筛或纱纱布过滤滤到平底底管中，使使管内粪粪汁平于于管口并并稍隆起起为好，但但不要溢溢出。静静置30分钟左左右，用用盖片蘸蘸取后，放放于载片片上，镜镜下观察察；或用用载片蘸蘸取液面面后翻转转，加盖盖片后镜镜检；也也可用特特制的铁铁丝圈进进行蘸取取检查。(图1-22)图1-2 漂浮法示意图除上述漂漂浮方法法外，还还有一种种简单的的漂浮技技术它它可以检检查含卵卵量少的的粪便（每g粪便少于50个虫卵）。具体步骤如下：即取3g粪便放于一塑料杯或烧杯内，加进50ml漂浮液后用玻璃棒搅匀，通

5、过粪筛或双层纱布过滤到另一个杯中漂浮10分钟然后用一试管插在滤液的中央底部，并迅速提起。把附在上面的液滴滴落在载片上，加上盖片镜检。（三）沉沉淀法（Seddimeentaatioon TTechhniqque）其原理是是利用虫虫卵比重重比水大大的特点点，让虫虫卵在重重力的作作用下，自自然沉于于容器底底部，然然后进行行检查。沉沉淀法可可分为离离心沉淀淀法和自自然沉淀淀法两种种。1离心心沉淀法法。通常常采用普普通离心心机进行行离心，使使虫卵加加速集中中沉淀在在离心管管底，然然后镜检检沉淀物物。方法法是取5g被检粪粪便，置置于平皿皿或烧杯杯中，加加5倍量的清清水，搅搅拌均匀匀。经粪粪筛和漏漏斗过滤滤

6、到离心心管中。置置离心机机上离心心2-3分钟（电电动离心心机转速速约为500转/分），然然后倾去去管内上上层液体体，再加加清水搅搅匀，再再离心。这这样反复复进行2-3次，直直至上清清液清亮亮为止，最最后倾去去大部分分上清液液，留约约为沉淀淀物1/2的溶液液量，用用胶帽吸吸管吹吸吸均匀后后，吸取取适量粪粪汁（2滴左右右）置载载玻片上上，加盖盖玻片镜镜检。2自然然沉淀法法。操作作方法与与离心沉沉淀法类类似，只只不过是将将离心沉沉淀改为为自然沉沉淀过程程。沉淀淀容器可可用大的的试管进进行。每每次沉淀淀时间约约为半小小时左右右。自然然沉淀法法缺点是是所需时时间较长长，但其其优点是是不需要要离心机机，因

7、而而在基层层乡下操操作较为为方便。（四）虫虫卵计数数法（Eggg Coounttingg Meethood）虫卵计数数法主要要用于了了解畜禽禽感染寄寄生虫的的强度及及判断驱驱虫的效效果。方方法有多多种，这这里介绍绍二种常常用的计计数方法法。1麦克克马斯特特氏法（McMMastters MMethhod）。计数板的的构造：计数板板是由二二片载玻玻片组成成，其中中一片较较另一片片窄一些些（便于于加液）。在在较窄的的玻片上上有1cm见方的的刻度区区二个，每每个正方方形刻度度区中又又平分为为5个长方方格。另另有厚度度为1.55mm的几个个玻璃条条垫于二二个载玻玻片之间间，以树树脂胶粘粘合。这这样就形形

8、成了二二个计数数室，每每个计数数室的容容积为0.115mll（0.115cmm3）。(图1-33)计数方法法：取2g粪便混混匀，放放入装有有玻璃珠珠的小瓶瓶内，加加入饱和和盐水58mml充分振振荡混合合，通过过细的粪粪筛过滤滤，后将将滤液边边摇晃边边用吸管管吸出少少量滴入入计数室室内，置置于显微微镜台上上，静置置几分钟钟后，用用低倍镜镜将二个个计数室室内见到到的虫卵卵全部数数完，取取平均值值，再乘乘以200，即为为每克粪粪便中的的虫卵数数（EPG）。图1-3 麦克马斯特氏计数板示意图2斯陶陶尔氏法法（Stoolls MMethhod）。用用小的特特制球状状烧瓶，在在瓶的下下颈部有有二个刻刻度，

9、下下面为56mml，上面面为60mml（没有有这种球球状烧瓶瓶，可用用大的试试管或小小三角烧烧杯代替替，但须须事先标标好上述述二个刻刻度）。计数时，先先加入0.11N（或4%）NaOOH溶液至56mml处，再再徐徐加加入捣碎碎的粪便便，使液液面达60mml处为止止（大约约加进4g粪便）。然然后加入入10多个玻玻璃小球球，充分分振荡，使使呈细致致均匀的的粪悬液液（也可可以过滤滤）。后后用吸管管吸取0.115mll置载玻玻片上，盖盖以不小小于2240mmm的盖玻玻片镜检检计数（没没有大盖盖片，可可用若干干张小盖盖片代替替；或将将0.115mll粪液滴滴于23张载片片上，分分别进行行计数后后，再加加

10、起来即即可）。所所见虫卵卵总数乘乘以100，即为为每克粪粪便中的的虫卵数数。(图1-44)图1-4 斯陶尔氏法示意除上述方方法之外外，也可可以用漂漂浮法或或沉淀法法来进行行虫卵计计数。即即称取一一定量粪粪便(15g)，加入入适量(10倍量)的漂浮浮液或水水后，进进行过滤滤，尔后后或漂浮浮或进行行反复水水洗沉淀淀，最后后用盖片片或载片片沾取表表面漂浮浮液或吸吸取沉渣渣，进行行镜检，计计数虫卵卵。计数数完一片片后，再再检查第第二片、第第三片，直到到不再发发现虫卵卵或沉渣渣全部看看完为止止。然后后将见到到的虫卵卵总数除除以粪便便克数，即即为每克克粪便虫虫卵数。四、实验验注意事事项1.直接接涂片法法。

11、做直直接涂片片时，涂涂片的厚厚薄以在在载玻片片的下面面垫上有有字的纸纸时，纸纸上的字字迹隐约约可见为为宜。直直接涂片片法的优优点是简简便、易易行、快快速、适适合于虫虫卵量大大的粪便便检查；缺点是是对虫卵卵含量低低的粪便便检出率率低。因因此在实实际工作作中，需需多检几几片，以以提高检检出率。检查虫卵时，先用低倍镜顺序查盖玻片下所有部分，发现疑似虫卵物时，再用高倍镜仔细观察。因一般虫卵（特别是线虫卵）色彩较淡，镜检时视野宜稍暗一些（聚光器下移）。2漂浮浮法。饱饱和盐水水漂浮法法漂浮时时间约为为30分钟左左右较为为适宜。时时间过短短（少于于10分钟）漂漂浮不完完全；时时间过长长（大于于1小时）易易造

12、成虫虫卵变形形、破裂裂，难以以识别。另另外，漂漂浮液必必须饱和和；盐类类的饱和和溶液须须保存在在不低于于13的情况况下，才才能保持持较高的的比重；否则效效果难以以保证。除饱和盐盐水漂浮浮液以外外，其他他一些漂漂浮液也也可用于于一些特特殊虫卵卵的检查查。如饱饱和硫酸酸锌溶液液（饱和和度为10000mll水中溶溶解9200g硫酸锌锌）漂浮浮力强，检检查猪肺肺丝虫卵卵效果较较好；饱饱和硫酸酸镁溶液液（饱和和度为10000mll水中溶溶解4400g硫酸镁镁）多用用于结肠肠小袋纤纤毛虫包包囊的检检查；饱饱和蔗糖糖溶液（饱饱和度为为10000mll水中溶溶解12880g蔗糖）性性温和，可可适于多多种虫卵卵

13、和卵囊囊的漂浮浮。漂浮法检检查多例例粪便时时，如用用铁丝圈圈蘸取漂漂浮液面面，则检检查完一一例，再再蘸取另另一例时时，需先先在酒精精灯上烧烧过铁丝丝圈后再再用之，以以免相互互污染，影影响结果果的准确确性。另另外，如如用载玻玻片或盖盖玻片蘸蘸取虫卵卵，则使使用的载载玻片或或盖玻片片一定要要干净无无油腻，否否则难以以蘸取。3沉淀淀法。沉沉淀法对对各种蠕蠕虫卵及及幼虫均均可查到到，特别别适用于于检查比比重大的的虫卵（如如吸虫卵卵等）。注注意此法法粪量少少，一次次粪检最最好多看看几片，以以提高检检出率。另外，也也可将离离心沉淀淀法和漂漂浮法结结合起来来应用。如如可先用用漂浮法法将虫卵卵和比虫虫卵轻的的

14、物质漂漂起来，再再用离心心沉淀法法将虫卵卵沉下去去；或者者选用沉沉淀法使使虫卵及及比虫卵卵重的物物质沉下下去，再再用漂浮浮法使虫虫卵浮起起来，以以获得更更高的检检出率。4虫卵卵计数法法。做虫虫卵计数数时，所所取粪便便应干净净，不能能掺杂砂砂土、草草根等；操作过过程中，粪粪便必须须彻底粉粉碎，混混合均匀匀；用吸吸管吸取取粪液时时，必须须摇匀粪粪液，在在一定深深度吸取取；采用用麦克马马斯特氏氏法计数数时，必必须调好好显微镜镜焦距（计计数室刻刻度线条条可被看看到）；计数虫虫卵时，不不能有遗遗漏和重重复。为了取得得准确的的虫卵计计数结果果，最好好在每天天的不同同时间检检查三次次，并连连续检查查三天，然

15、然后取其其平均值值。这样样就可以以减少寄寄生虫在在每昼夜夜间排卵卵不平衡衡的影响响。将每克粪粪便虫卵卵数乘以以24小时时粪便的的总重量量（g），即即是每天天所排虫虫卵的总总数，再再将此总总数除以以已知成成虫每天天排卵数数（可查查书得到到），即即可得出出雌虫的的大约寄寄生数量量。如寄寄生虫是是雌雄异异体的，则则将上述述雌虫数数再乘以以2，便可可得出雌雌雄成虫虫寄生总总数。由于粪中中虫卵的的数目与与宿主机机体状况况、寄生生虫的成成熟程度度、雌虫虫数目及及排卵周周期、粪粪便性状状（干湿湿）、是是否经过过驱虫及及其它多多种因素素有关，所所以虫卵卵计数只只能是对对寄生虫虫感染程程度的一一个大致致推断。五

16、、实验验报告1记录录粪检虫虫卵结果果，并对对各种方方法做简简要叙述述和概括括总结。2绘吸吸虫卵、绦绦虫卵、线线虫卵各各一个，并并注明虫虫卵各部部构造名名称。附:参考考资料（一）饱饱和盐水水的配制制把食盐加加入沸水水锅内，直直到食盐盐不再溶溶解而出出现沉淀淀为止（即1000ml沸水中加入约400g食盐），精制盐配制的饱和盐水一般不必过滤，待冷却后即可使用（冷却后的溶液有食盐结晶析出，即为饱和）；粗制盐配制的饱和液可用滤纸、纱布或棉花过滤后备用。（二）各各类蠕虫虫卵特征征描述1吸虫虫卵（Treemattodee Egggs）。吸虫虫卵多数数呈卵圆圆形或椭椭圆形，为为黄色、黄黄褐色或或灰褐色色。卵壳

17、壳由数层层卵膜组组成，比比较厚而而坚实。大大部分吸吸虫卵的的一端有有卵盖，卵卵盖和卵卵壳之间间有一条条不明显显的缝（新新鲜虫卵卵在高倍倍镜下时时可看见见）。当当毛蚴发发育成熟熟时，则则顶盖而而出；有有的吸虫虫卵无卵卵盖，毛毛蚴则破破壳而出出。有的的吸虫卵卵卵壳表表面光滑滑；也有有的有各各种突出出物（如如结节、小小刺、丝丝等）。新新排出的的吸虫卵卵内，有有的含有有卵黄细细胞所包包围的胚胚细胞。有有的则含含有成形形的毛蚴蚴。(图1-55)4321图1-5 各类蠕虫卵1.吸虫卵 2.绦虫卵（有梨形器） 3.线虫卵 4.棘头虫卵2绦虫虫卵（Cesstodde EEggss）。园叶目目绦虫卵卵与假叶叶目

18、绦虫虫卵构造造不同。园园叶目绦绦虫卵中中央有一一椭圆形形具三对对胚钩的的六钩蚴蚴。六钩钩蚴被包包在一层层紧贴着着的膜里里，该膜膜称为内内胚膜；还有一一层膜位位于内胚胚膜之外外，叫外外胚膜。内内外胚膜膜之间呈呈分离状状态，中中间含有有或多或或少的液液体，并并常含有有颗粒状状内含物物。有的的绦虫卵卵的内层层胚膜上上形成突突起，被被称之为为梨形器器（灯泡泡样结构构）。各各种绦虫虫卵卵壳壳的厚度度和结构构有所不不同。绦绦虫卵大大多数无无色或灰灰色，少少数呈黄黄色、黄黄褐色。假假叶目绦绦虫卵则则非常近近似于吸吸虫卵。3线虫虫卵（Nemmatoode Egggs）。一般的的线虫卵卵有四层层膜（光光学显微微

19、镜下只只能看见见二层）所所组成的的卵壳，壳壳内为卵卵细胞。但但有的线线虫卵随随粪排至至外界时时，已经经处于分分裂前期期；有的的甚至已已含有幼幼虫。各各种线虫虫卵的大大小和形形状不同同，常见见椭圆形形、卵形形或近于于圆形。卵卵壳的表表面也各各有所不不同，有有的完全全光滑，有有的有结结节，有有的有小小凹陷等等。各种种线虫卵卵的色泽泽也不尽尽相同，从从无色到到黑褐色色。不同同线虫卵卵卵壳的的薄厚不不同，蛔蛔虫卵卵卵壳最厚厚；其它它多数卵卵壳较薄薄。4棘头头虫卵（Thorny-head Worm Eggs）。虫卵多为椭圆或长椭圆形。卵的中央有一长椭圆形的胚胎，在胚胎的一端具有三对胚钩。胚胎被三层卵膜包

20、着；最里面的一层常是最柔软的；中间一层常较厚，大多在两端有显著的压迹；最外一层的构造往往变化较大，有的薄而平，有的厚，并呈现凹凸不平的蜂窝状构造。（三）牛牛、马、羊羊、猪、犬犬、猫、兔兔、家禽禽寄生虫虫虫卵图图(图1-6) (图1-77) (图1-88) (图1-99) (图1-110) (图1-111) (图1-112) (图1-113) 图1-6 牛寄生虫卵1.大片吸虫卵 2.前后盘吸虫卵 3.日本分体吸虫卵 4.双腔吸虫卵 5.胰阔盘吸虫卵6.东毕吸虫卵 7.莫尼茨绦虫卵8.食道口线虫卵 9.仰口线虫卵 10.吸吮线虫卵 11.指形长刺线虫卵12.古柏线虫卵 13.犊新蛔虫卵 14.牛艾美耳球虫卵囊1.犬弓弓首蛔虫虫卵 22.狮弓蛔蛔虫卵 3.犬复孔孔绦虫卵卵 4.毛细线线虫卵 5.毛尾线线虫卵 6.肾膨结结线虫卵卵7.血色色食道线线虫卵 88.犬钩口口线虫卵卵 9.巴西钩钩口线虫虫卵 100.美洲板板口线虫虫卵 111.犬胃线线虫卵 122.裂头绦绦虫卵13.中中线绦虫虫卵 144.华枝睾睾吸虫卵卵 155.并殖吸吸虫卵 166.抱茎棘棘隙吸虫虫卵 177.细粒棘棘球绦虫虫卵 188.泡状带带绦虫卵卵（四）动动物粪便便内常见见的其它它物体图图(图1-4)